鳳曉博 林 童 李 莉 姚志敏 蘇姍姍 魏玉海 戴達(dá)勇 張 榮

（西寧海關(guān) 青海西寧 810000）

1 前言

黑果枸杞（Lycium Ruthenicum Murr）主要分布于高山沙林、鹽化沙地、河湖沿岸和干河床中，為我國西部特有的沙漠藥用植物品種，主產(chǎn)于我國青海東部，在新疆北部、內(nèi)蒙古西部、陜西北部、甘肅和西藏等地也有零星分布[1]。

野生黑枸杞含有的花色甙素是最有效的天然自由基清除劑，可延緩人體細(xì)胞組織衰老，還可防治糖尿病，并具有明顯的抗疲勞、保肝、抗腫瘤、疏通血管、降壓、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用[2]。

目前，人們對黑果枸杞的研究僅限于對其多糖和色素的初步研究[3-5]，并未有相關(guān)檢測方法。本實驗旨在利用高效液相色譜法建立其指紋圖譜，以達(dá)到快速檢測黑果枸杞的真?zhèn)?、產(chǎn)地和質(zhì)量的目的，為黑果枸杞的質(zhì)量控制建立有效方法，并為其鑒別提供參考。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 實驗儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀（配四元泵，自動進(jìn)樣器，DAD 檢測器）；粉碎機(jī)；超聲波清洗器。

2.1.2 實驗藥品

乙腈、甲酸為色譜純；甲醇、石油醚均為分析純。

供試樣品黑果枸杞干果分別采自青海格爾木、諾木洪、德令哈、都蘭、察爾汗；新疆沙雅縣；甘肅民勤縣、敦煌瓜州縣；內(nèi)蒙古額吉納旗阿盟（表1）。

2.2 方法

2.2.1 樣品制備

準(zhǔn)確稱取2.00 g 樣品，加入20 mL 石油醚，振搖10 min，再超聲 30 min，3 000 r/min 離心 5 min，棄去石油醚，于50℃烘干殘渣；準(zhǔn)確加入20 mL 60%的乙醇（pH 4.80），振搖 10 min，超聲 30 min，2 000 r/min離心5 min，取上清液過0.45 μm 的膜過濾器過濾。

表1 樣品編號及產(chǎn)地

2.2.2 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈、水和 1%甲酸，0～70 min梯度洗脫（表2），流速1 mL/min，檢測波長196 nm，柱溫 35℃，進(jìn)樣量 10 μL。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 穩(wěn)定性考察

取S1樣品，按照上述的制備方法制備后，分別于 0、4、8、12、18、24 h 進(jìn)樣檢測，以蘆丁的保留時間和峰面積為參考，計算其相對保留時間，主要共有峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于3.0%；峰面積的RSD 均小于3.0%，表明樣品在24 h 內(nèi)相對穩(wěn)定（表3～表4）。

表2 梯度洗脫條件

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果-相對保留時間

表4 穩(wěn)定性實驗結(jié)果-相對峰面積

2.3.2 精密度考察

取S1樣品，按照上述的制備方法制備后，連續(xù)進(jìn)樣6 次，以蘆丁的保留時間和峰面積為參考，計算其相對保留時間，主要共有峰保留時間的RSD 均小于3.0%；峰面積的RSD 均小于3.0%，表明儀器的精密度良好（表5～表6）。

表5 精密度實驗結(jié)果-相對保留時間

表6 精密度實驗結(jié)果-相對峰面積

2.3.3 重復(fù)性考察

取S1樣品，稱取6 份，按照上述的制備方法制備后進(jìn)行檢測，以蘆丁的保留時間和峰面積為參考，計算其相對保留時間，主要共有峰保留時間的RSD均小于3.0%；峰面積的RSD 均小于3.0%，表明該方法具有較好的重復(fù)性（表7～表8）。

表7 重復(fù)性實驗結(jié)果-相對保留時間

表8 重復(fù)性實驗結(jié)果-相對峰面積

2.4 指紋圖譜的建立

將所得到的青海黑果枸杞色譜圖導(dǎo)入國家藥典委員會開發(fā)的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.130723 版本）中，在生成對照的模式下，以S2為參照圖譜，設(shè)定中位數(shù)的生成方式，計算其相似度（表9），生成對照圖譜（圖1、圖2）。

3 結(jié)論

（1）本次實驗以高效液相色譜技術(shù)，選用超聲波提取，于196 nm 波長下檢測，建立黑果枸杞的指紋圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.130723 版本），對青海地區(qū)的30 批黑果枸杞進(jìn)行分析，在以上色譜條件下能得到最多的色譜峰，穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性良好，通過此方法建立的黑果枸杞指紋圖譜具有較好的可控性。

（2）本實驗利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.130723 版本），建立了青海地區(qū)黑果枸杞的指紋圖譜，與建立的對照圖譜相比較，相似度能到達(dá)0.80 以上，可為今后黑果枸杞質(zhì)量控制提供技術(shù)保障，實驗的前處理方法簡單，具有很強(qiáng)的操作性。

圖1 30 批青海黑果枸杞匹配圖譜

圖2 青海黑果枸杞生成的對照圖譜

（3）黑果枸杞具有很好的營養(yǎng)價值，但是目前市場上所售黑果枸杞存在以次充好的問題，而通過本實驗建立的黑果枸杞指紋圖譜能較好地區(qū)分不同產(chǎn)地、不同質(zhì)量的黑果枸杞，為黑果枸杞的鑒別提供保障。