耿 振 姜延國(guó)

（遼寧省丹東市衛(wèi)生健康服務(wù)中心 遼寧丹東 118000）

1 前言

特布他林（TBL）為β-受體激動(dòng)劑，具有脂肪再分配和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，被廣泛應(yīng)用于飼料中[1]，但TBL 的殘留也會(huì)一定程度上影響人們的身體健康。本文參照2019 年國(guó)家食品污染物工作手冊(cè)[2]中氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS），測(cè)定了腸類制品中TBL的殘留量，依據(jù)JJF 1135—2005《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》[3]對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度進(jìn)行評(píng)定，提高了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器、藥品和試劑

儀器：氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（賽默飛TRACE/ISQ LT）；電子天平（島津 AUW120）；TG-5MS 毛細(xì)管色譜柱；pH 計(jì)（梅特勒公司）；SLW 固相萃取柱。

藥品和試劑：TBL 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)：SB05-230-2008，批號(hào)：201903）；β-葡萄糖苷酶；雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）；三甲基氯硅烷（TMCS）；甲醇、乙酸乙酯、甲苯均為色譜純。

2.2 樣品前處理方法

2.2.1 樣品酶解

稱取5.0 g 絞碎樣品，加入15 mL pH=5.2 的乙酸鈉-醋酸緩沖液，勻質(zhì) 20 s，加 50 μL β-葡萄糖苷酶，37℃水浴水解16 h，離心10 min，上清液用2.0 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH 至2.0±0.1，離心10min，分離上清液待用。

2.2.2 樣品凈化

固相萃取柱先用甲醇5 mL、水5 mL、50 mmol/L鹽酸5 mL 活化，將上清液過(guò)柱，之后用5 mL 水淋洗，真空泵抽干，再用5 mL 甲醇洗脫，然后用10 mL 5%氨化乙酸乙酯洗脫收集，50℃水浴中氮?dú)獯蹈伞?/p>

2.2.3 樣品衍生

蒸發(fā)剩余物加0.1 mL BSTFA+1% TMCS，置于80℃的烘箱中加熱衍生1.0 h，氮?dú)獯蹈?，?.2 mL甲苯溶解。

2.3 測(cè)定

自動(dòng)進(jìn)樣器吸取1.0 μL 甲苯溶液進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

3 不確定度分析

3.1 建立數(shù)學(xué)模型

TBL 含量計(jì)算詳見(jiàn)式（1）：

其中，X—試樣中 TBL 含量（μg/kg）；n—試樣溶液中TBL 含量（ng）；m—取樣量（g）。

由式（1）可知，試樣中TBL 含量測(cè)定不確定度主要由輸入量n、m 引入。

3.2 輸入量的不確定度分析

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)顯示值為100 μg/mL，擴(kuò)展不確定度 0.12 μg/mL，按正態(tài)分布 k=2，則 u（ρ）=0.06 μg/mL，urel（ρ）=0.000 6

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的不確定度

配制標(biāo)準(zhǔn)系列期間使用了A 級(jí)1 000 mL 單標(biāo)線容量瓶、A 級(jí) 1 mL 單標(biāo)線吸量管、1 000 μL 手動(dòng)移液器。根據(jù) JJG 196—2006《常用玻璃量器》[4]規(guī)定，20℃時(shí)容量瓶的容量允差為±0.400 mL，取矩形分布，則1000 mL=0.000231；20℃時(shí)吸量管的容量允差為±0.007 mL，取矩形分布，則0.00404 mL，urel（v2）＝0.00404 mL/1 mL=0.00404；手動(dòng)移液器的證書(shū)系統(tǒng)誤差為0.19%，按矩形分布考慮，則。

3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

制備 6 個(gè) TBL 標(biāo)準(zhǔn)，含量依次為 10、20、30、40、50、100 ng，重復(fù)測(cè)定 2 次，第一次峰面積為19 591、34 993、49 837、59 502、75 741、138 273，第二次峰面積為 20 797、35 240、49 192、59 765、73 538、141 255，峰面積取平均值，用最小二乘法擬合，可得曲線Y=1317.542X+8246.098，相關(guān)系數(shù) R=0.999 6。

根據(jù)公式

其中，b—曲線斜率；p—重復(fù)測(cè)定次數(shù)（p=6）；n—曲線的點(diǎn)數(shù)（n=12）；x—樣品濃度平均值（=16.761 ng）；—標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)濃度平均值（x0=41.667 ng）；—標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)濃度值1469.563。

3.2.4 樣品重復(fù)測(cè)定引入的不確定度

樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)得峰面積依次為32 117、30 207、30 361、29 231、29 356、30 705，根據(jù)貝塞爾公式=1049.434，通常以多次測(cè)定結(jié)果的算數(shù)平均值作為最終結(jié)果，則。

3.2.5 加標(biāo)回收率測(cè)定引入的不確定度

取6 份相同質(zhì)量的空白背景樣品，加入相同量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，測(cè)得6 組峰面積數(shù)據(jù)依次為 77 710、78 168、81 098、78 756、83 432、75 741，根據(jù)貝塞爾公式可得。

3.2.6 稱量過(guò)程引入的不確定度

電子天平最小分度為0.1 mg，由于穩(wěn)定性較好，由稱量重復(fù)性引入的不確定度可以忽略。準(zhǔn)確稱量5.000 4 g，根據(jù)天平的檢定證書(shū)，示值誤差為±0.33 mg，按矩形分布考慮，則urel（m）＝0.191 mg/5.0004 g=0.0000382。

3.3 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

4 結(jié)論

GC-MS 法測(cè)定腸類制品中TBL 殘留量的不確定度主要受標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合[5]、樣品重復(fù)測(cè)定及加標(biāo)回收率測(cè)定影響。由于樣品處理過(guò)程復(fù)雜，對(duì)加標(biāo)回收過(guò)程進(jìn)行不確定度評(píng)估更有意義。