錢(qián)雯麗 孫敏 劉若楠

摘 要 目的：觀(guān)察羅布麻葉對(duì)高血壓大鼠血壓及免疫的影響。方法：降血壓實(shí)驗(yàn)，經(jīng)口給予自發(fā)性高血壓（SHR）大鼠不同劑量的羅布麻葉，設(shè)三個(gè)劑量組、空白對(duì)照組和高劑量正常組，連續(xù)灌胃30天。檢測(cè)并比較各組大鼠血壓、心率。免疫實(shí)驗(yàn)，灌胃給予KM小鼠不同劑量羅布麻葉，設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組。連續(xù)灌胃30天后，處死小鼠進(jìn)行細(xì)胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能指標(biāo)、NK細(xì)胞活性測(cè)定。結(jié)果 ?羅布麻葉具有增強(qiáng)動(dòng)物免疫力、降低高血壓大鼠血壓的作用。

關(guān)鍵詞羅布麻葉;免疫;血壓;大鼠;小鼠

羅布麻（ Apocynum venetum L.） 是夾竹桃科多年生宿根性草本植物，自然分布在中國(guó)西北的新疆、青海、甘肅、內(nèi)蒙、寧夏等部分地區(qū)，有很高的藥用價(jià)值[1]。羅布麻葉羅布麻葉中主要含有黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)、低分子有機(jī)酸類(lèi)、長(zhǎng)鏈脂肪酸酯、醇類(lèi)、甾體類(lèi)等成分。本草綱目記載其有平心悸、止眩暈、消喘止咳、強(qiáng)心利尿之功能。中國(guó)藥典記載其清熱利水、平肝安神， 用于高血壓、頭暈、心悸、失眠。現(xiàn)代研究表明， 羅布麻葉具有降血壓、降血脂、增強(qiáng)免疫力、抗焦慮、保護(hù)肝臟等多種功效[2-4]。本實(shí)驗(yàn)觀(guān)察羅布麻葉對(duì)高血壓大鼠的降壓作用及其對(duì)正常小鼠免疫功能的影響。

實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 SHR雄性大鼠48只，SPF級(jí)，體重180～220g;Wistar大鼠12只，清潔級(jí)，雄性，體重180～220g，用于降血壓功能實(shí)驗(yàn)。SPF級(jí)ICR雄性小鼠，160只，體重18～22g，用于增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)。大鼠、小鼠均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.2 受試物羅布麻葉產(chǎn)地新疆羅布。羅布麻葉用10倍85℃熱水浸泡40min，浸泡2次，收集濾液。于70℃濃縮成浸膏，浸膏以純化水稀釋至相對(duì)應(yīng)濃度進(jìn)行灌胃。降血壓實(shí)驗(yàn)，濃縮浸膏加純水分別稀釋至含藥材100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml進(jìn)行大鼠灌胃。增強(qiáng)免疫實(shí)驗(yàn)。濃縮浸膏加純水分別稀釋至含藥材50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml的濃度進(jìn)行小鼠灌胃。

1.3 儀器 BP-98A型血壓測(cè)量?jī)x、酶標(biāo)儀、分光光度儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、電子分析天平、離心機(jī)、微量注射器等。

1.4 分組及劑量 降血壓實(shí)驗(yàn)，以高血壓大鼠設(shè)低、中、高劑量組（100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml）和高血壓空白組，同時(shí)設(shè)正常大鼠高劑量組（100mg/ml）。高血壓劑量組和正常大鼠高劑量組以相對(duì)應(yīng)濃度羅布麻葉浸膏稀釋液灌胃，高劑量空白組灌胃等體積純化水，灌胃體積為10ml/kg。連續(xù)30天。每周測(cè)1次血壓。

增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)，160只小鼠分為四個(gè)大組每組40只。A組用于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn);B組用于NK細(xì)胞活性測(cè)定及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn);C組用于抗體生成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、血清溶血素測(cè)定和遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn); D組用于小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)。大組再分成4個(gè)小組，每組10只。設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組（50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml）和陰性對(duì)照組。三個(gè)劑量組分別灌胃對(duì)應(yīng)濃度的羅布麻葉浸膏稀釋液，陰性對(duì)照組灌胃純化水，灌胃體積20ml/kg。連續(xù)灌胃30天，處死小鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。

方法

2.1實(shí)驗(yàn)方法 按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（ 2003 版）中“輔助降血壓功能檢測(cè)方法-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)”及“增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)”有關(guān)方法進(jìn)行。輔助降血壓功能進(jìn)行動(dòng)物的體重、血壓和心率測(cè)定;增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)包括：細(xì)胞免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、體液免疫功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面。

2.2統(tǒng)計(jì)分析： 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行分析。對(duì)照組與劑量組的比較用方差分析，如方差齊，則用SNK法進(jìn)行兩兩比較;若方差不齊，則Dunnetts T3 法進(jìn)行兩兩比較，顯著性水平P≤0.05。

結(jié)果

3.1降血壓實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1對(duì)大鼠體重的影響 試驗(yàn)初始及實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物體重、體重正常增長(zhǎng)，各組動(dòng)物體重的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3.1.2對(duì)大鼠血壓的影響 由表1可見(jiàn)，前面三周各劑量大鼠血壓與高血壓空白組比較無(wú)明顯變化，第四周中、高劑量組大鼠血壓較高血壓空白組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。正常大鼠給予高劑量羅布麻葉，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中血壓無(wú)明顯變化。

3.1.3對(duì)大鼠心率的影響 由表2可見(jiàn)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，各劑量大鼠、空白組和正常高劑量組大鼠心率均無(wú)明顯變化，各劑量組大鼠心率與高血壓空白組大鼠比較無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3.2增強(qiáng)免疫力實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1對(duì)小鼠體重的影響 試驗(yàn)初期、中期、末期各劑量組小鼠體重，與陰性對(duì)照組比較無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3.2.2對(duì)小鼠脾臟/體重、胸腺/體重比值：連續(xù)灌胃30天后，各劑量組小鼠脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與陰性對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

3.2.3對(duì)小鼠細(xì)胞免疫的影響 連續(xù)灌胃30天后，中，高劑量組小鼠的耳殼增重顯著高于對(duì)照組（表3，P<0.05，P<0.01）;三個(gè)劑量組小鼠的淋巴細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異（表3，P>0.05）。

3.2.3對(duì)小鼠體液免疫功能： 與陰性對(duì)照組比較，各劑量組小鼠溶血空斑數(shù)，無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4，P>0.05）;中、高劑量組小鼠的血清溶血素值顯著高于與對(duì)照組;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4，P<0.05）。

3.2.4.小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能：三個(gè)劑量組小鼠的單核-巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異（表5，P>0.05）;中、高劑量組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞指數(shù)較陰性對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義表5，P<0.05）。

3.2.5.小鼠NK細(xì)胞活性的影響：三個(gè)劑量組小鼠的NK細(xì)胞活性與對(duì)陰性照組相比，無(wú)顯著性差異（表6，P>0.05）。

討論

以上實(shí)驗(yàn)顯示，羅布麻葉對(duì)高血壓大鼠具有降壓作用，對(duì)正常大鼠血壓、心率均無(wú)影響;羅布麻葉還可以增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、增加小鼠血清溶血數(shù)值、可提高巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬能力。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，降血壓實(shí)驗(yàn)：第二周開(kāi)始羅布麻葉對(duì)高血壓大鼠逐漸有影響，慢慢的下降，第四周時(shí)中劑量組、高劑量組大鼠的血壓較高血壓空白組明顯低，具有顯著性差異，且具有一定的劑量量效關(guān)系。說(shuō)明羅布麻葉達(dá)到50mg/ml（折合藥材0.5g/kg）可以降低高血壓大鼠的血壓。增強(qiáng)免疫力實(shí)驗(yàn)：低劑量組所有指標(biāo)均體現(xiàn)與陰性對(duì)照無(wú)顯著性差異，中劑量、高劑量顯示在遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（耳殼增重）、血清溶血數(shù)值、巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)較陰性對(duì)照組，具有顯著增加。說(shuō)明羅布麻葉達(dá)到17mg/ml（折合藥材0.33g/kg）可以增強(qiáng)小鼠免疫力。羅布麻葉具有增強(qiáng)動(dòng)物免疫力、降低高血壓動(dòng)物血壓的作用，降低血壓劑量要求較高。

引用文獻(xiàn)

1.趙曉娟，胡律江，郭慧玲，等.羅布麻藥理作用研究進(jìn)展.江西中醫(yī)藥.2014年 10月，第10期總45卷第382期：76-78

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3.周本宏，劉剛，胡先明，等.羅布麻對(duì)紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的保護(hù)作用.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)， 2004， 20（5）： 506-508

4.蘇冬梅，岳常青， 呂銳，等.羅布麻對(duì)耐藥性菌株R質(zhì)粒的作用.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，41（4）：352