張興鋒，朱功俊，龔韋凡，劉向明,，桂 鵬

(1 中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430074；2 共青科技職業(yè)學(xué)院，江西 共青城 332020)

百合科劍葉龍血樹(shù)Dracaenacochinchinensis(Lour.) S. C. Chen喜高溫濕熱，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值。龍血竭來(lái)源于龍血樹(shù)特定部位的樹(shù)脂，具有廣泛的藥理作用，如抗炎抗菌，降低血脂血糖，保護(hù)心肌細(xì)胞等[1]。黃酮在龍血竭中含量很高，為了研究龍血竭的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，使其更好的應(yīng)用于臨床，我們主要針對(duì)黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行了研究，分離并確定了11個(gè)化合物，結(jié)構(gòu)分別為：

圖1 化合物1～3結(jié)構(gòu)式

圖2 化合物4～7結(jié)構(gòu)式

圖3 化合物8結(jié)構(gòu)式

圖4 化合物9～11結(jié)構(gòu)式

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與材料

DXR-500 MHz核磁共振儀(TMS內(nèi)標(biāo))，Bruker；RE 52-98型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；DZF-6020型真空干燥箱，上海恒科儀器有限公司；ZF-IA型三用紫外分析儀，上海和勤分析儀器有限公司；JA2013N型電子天平，上海明橋精密科學(xué)儀器有限公司；CP214型電子天平，奧豪斯儀器有限公司；YMC-Pack ODS-A(250×10 mm)色譜柱，深圳凱米斯科技有限公司；Ultimate 3000型高效液相色譜儀(DAD二極管陣列檢測(cè)器，VWD紫外檢測(cè)器)，Dionex。

聚酰胺和正相硅膠填料，青島海洋化工有限公司；氫氧化鈉和鹽酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；分析級(jí)乙醇、石油醚和乙酸乙酯，天津博迪華工有限公司；色譜級(jí)甲醇和乙腈，Tedia。

龍血竭購(gòu)于西雙版納藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究所滕紅麗教授鑒定為百合科劍葉龍血樹(shù)樹(shù)脂的乙醇提取物，即龍血竭。樣品(No：2012030)存放于中南民族大學(xué)藥學(xué)院天然產(chǎn)物研究室。

1.2 提取與分離

龍血竭500 g粉碎成粉，0.4%氫氧化鈉溶解，抽濾。加入鹽酸于濾液調(diào)節(jié)pH值至2.1，抽濾，濾渣充分干燥后稱(chēng)重得308.2 g樣品。提取物(308.2 g)與等質(zhì)量聚酰胺混合拌樣上柱，經(jīng)25%，40%，55%，70%，85%和100%乙醇梯度洗脫后得7個(gè)組分，F(xiàn)r.1～Fr.7。Fr. 1(23.2 g)與等質(zhì)量硅膠混合拌樣上柱，經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(45:1)、(25:1)、(1:1)梯度洗脫，再經(jīng)多次硅膠柱層析得6組分，F(xiàn)r.1-1～Fr.1-6。Fr.1-1(103.1 mg)經(jīng)高效液相色譜分離得化合物1(10.3 mg)、化合物2(20.5 mg)、化合物3(7.6 mg)、化合物4(15.3 mg)、化合物6(6.1 mg)。Fr. 2(25.3 g)與硅膠等質(zhì)量混合拌樣上柱，經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(20:1)、(10:1)、(5:1)、(1:1)梯度洗脫，再經(jīng)多次硅膠柱層析得4組分，F(xiàn)r.3-1～Fr.3-4。Fr.3-1(120.3 mg)經(jīng)高效液相色譜分離得化合物5(3.7 mg)、化合物7(10.6 mg)、化合物8(9.9 mg)、化合物9(20.3 mg)、化合物10(7.7 mg)、化合物11(8.4 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.12 (2H, dd,J=8.1, 1.9 Hz, H-2’, 6’), 7.99 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.64 (3H, m, H-3’, 4’, 5’), 7.04 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 6.95 (1H, dd,J=8.8, 1.9 Hz, H-6), 6.93 (1H, s, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為7-羥基黃酮。

化合物2：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.66 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 6.60 (1H, s, H-3), 6.13 (1H, s, H-6), 2.07 (3H, s, 8-CH3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為5,7,4’-三羥基-8-甲基黃酮。

化合物3：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.81 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.77 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.57 (1H, s, H-3), 6.28 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 5.95 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為5,7,4’-三羥基黃酮。

表 1 化合物1～3 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

化合物4：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.66 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-5), 5.83 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 3.51 (3H, s, 4-OCH3), 3.48 (3H, s, 6-OCH3), 2.73 (2H, t,J=8.4 Hz, H-α), 2.51 (2H, t,J=8.4 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為2,4’-二羥基-4,6-二甲氧基二氫查爾酮。

化合物5：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.65 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.83 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 5.87 (1H, d,J=2.0 Hz, H-5), 5.86 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 3.56 (3H, s, 6-OCH3), 2.87 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.67 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為2,4,4’-三羥基-6-甲氧基二氫查爾酮。

化合物6：無(wú)色晶體。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.62 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 6.81 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 5.83 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 5.81 (1H, dd,J=8.0, 2.0 Hz, H-5), 3.67 (3H, s, 2-OCH3), 3.01 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.69 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為4,4’-二羥基-2-甲氧基二氫查爾酮。

化合物7：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.24 (1H, s, 4-OH), 7.69 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 6.92 (1H, d,J=8.5 Hz, H-6), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 5.87 (1H, dd,J=8.5, 2.5 Hz, H-5), 3.80 (3H, s, 4’-OCH3), 3.74 (3H, s, 2-OCH3), 3.09 (2H, t,J=7.8 Hz, H-α), 2.73 (2H, t,J=7.8 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為4-羥基-2,4’-二甲氧基二氫查爾酮。

表2 化合物4～7 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

化合物8：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.36 (1H, s, 4’-OH), 7.14 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.65 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.34 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 6.25 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 4.79 (1H, dd,J=10.2, 2.2 Hz, H-2), 3.56 (3H, s, 7-OCH3), 2.86～2.55 (2H, m, H-4), 2.03～1.86 (2H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) δ: 159.1 (C-7), 157.2 (C-4’), 155.5 (C-8a), 131.6 (C-1’), 130.2 (C-5), 127.6 (C-2’, C-6’), 114.3 (C-3’, C-5’), 113.5 (C-4a),106.6 (C-6), 101.0 (C-8), 76.6 (C-2), 55.3 (7-OCH3), 28.6 (C-3), 23.8 (C-4)。根據(jù)HMBC譜，δH7.24和δH6.91與C (157.2)存在信號(hào)關(guān)聯(lián)，OH質(zhì)子信號(hào)與C (157.2)存在信號(hào)關(guān)聯(lián)，因此可推斷羥基位于C-4’上。δH6.91, δH6.44, δH6.35與C (159.1)存在信號(hào)關(guān)聯(lián)，OCH3質(zhì)子與C (159.1)存在信號(hào)關(guān)聯(lián)，因此可推斷甲氧基位于C-7上。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為7-羥基-4’-甲氧基黃烷。

化合物9：無(wú)定型粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.78 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.47 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.71 (1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 5.56 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 3.86 (1H, m, H-2), 3.46 (3H, s, 5-OCH3), 3.39 (1H, m, H-2), 2.21 (2H, m, H-9), 2.28 (1H, m, H-4), 2.03 (1H, m, H-4);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物9為7,4’-二羥基-5-甲氧基高異黃烷。

化合物10：無(wú)色柱狀結(jié)晶。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.76 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.46 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.28 (1H, s, H-5), 6.11 (1H, s, H-8), 3.83 (1H, m, H-2), 3.39 (1H, m, H-2), 3.28 (3H, s, 6-OCH3), 2.29 (1H, m, H-9), 2.26 (1H, m, H-9), 2.18 (1H, m, H-4), 2.01 (1H, m, H-4), 1.83 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物10為7,4’-二羥基-6-甲氧基高異黃烷。

化合物11：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.74 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.54 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.41 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.01 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 5.91 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 3.84 (1H, m, H-2), 3.49 (1H, m, H-2), 2.45 (1H, m, H-4), 2.29 (1H, m, H-4), 2.18 (1H, m, H-9), 2.01 (1H, m, H-9), 1.81 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) 數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物11為7,4’-二羥基高異黃烷。

表3 化合物9～11 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

續(xù)表3

7156.2156.6155.5895.3101.0101.3937.936.936.64a99.4117.2109.58a155.0148.8154.91128.3128.4129.82129.3129.6128.63114.0116.3114.74155.1144.5153.65114.0116.3114.76129.3129.6128.65-OCH355.7--6-OCH3-57.7-

3 結(jié) 論

本文利用堿提酸沉、聚酰胺和硅膠柱色譜以及高效液相色譜從龍血竭黃酮類(lèi)成分中分離出3個(gè)黃酮類(lèi)，4個(gè)查爾酮類(lèi)，1個(gè)黃烷類(lèi)和3個(gè)高異黃烷類(lèi)成分。這為龍血竭所具備的抗炎抗菌，降低血脂血糖，保護(hù)心肌細(xì)胞等藥理活性研究提供了化學(xué)成分上的研究對(duì)象。后續(xù)我們將對(duì)龍血竭的其他成分進(jìn)行分離，通過(guò)較為完整的化學(xué)成分分析為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供更多理論依據(jù)。