朱虹，黃讓明

(廣東省汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測所，廣東汕頭 515041)

馬來酸二乙酯(又名順丁烯二酸二乙酯，DEM)是高分子化合物單體，是農(nóng)藥、醫(yī)藥、香料、水質(zhì)穩(wěn)定劑(有機(jī)多元羧酸膦酸化合物)的中間體，也是聚氯乙烯等的優(yōu)良增塑劑［1–5］。馬來酸二乙酯對(duì)皮膚和眼睛有一定程度的致敏反應(yīng)和刺激作用，對(duì)人體健康存在安全隱患。GB／T 26396–2011《洗滌用品安全技術(shù)規(guī)范》中禁止在香精中使用馬來酸二乙酯，但并未明確洗滌用品中該物質(zhì)的檢測方法。衣物洗滌劑作為最常用的洗滌用品之一，關(guān)系著人們的安全和健康，因此建立衣物洗滌劑中馬來酸二乙酯測定方法具有重要意義。在以往的報(bào)道中，馬來酸二乙酯的檢測方法有高效液相色譜法、超高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜法和氣相色譜–質(zhì)譜法［6–10］等，這些方法中未有針對(duì)衣物洗滌劑用品方面的檢測方法。衣物洗滌劑中含有大量的表面活性劑等復(fù)雜成分，對(duì)馬來酸二乙酯的測定存在嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)［11–12］。若用傳統(tǒng)的方法直接提取，基質(zhì)抑制作用［11–12］明顯，回收率低?；|(zhì)效應(yīng)是指在樣品測試過程中，由于待測物以外其它物質(zhì)的存在或者其它的物理、化學(xué)因素，直接或間接影響待測物響應(yīng)的現(xiàn)象。目前消除基質(zhì)效應(yīng)的方法［13–16］有優(yōu)化樣品前處理方法、優(yōu)化色譜質(zhì)譜分析條件、使用內(nèi)標(biāo)、采用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液校正等方法，也可多法聯(lián)用。其中，有效的樣品前處理方法，從最大限度去除基質(zhì)成分著手，是消除基質(zhì)效應(yīng)最有效的手段。常見的前處理方法［13］有沉淀蛋白法(PPT)、液液萃取法(LE)、固相萃取法(SPE)和分散固相萃取法等。

筆者采用QuEChERS EMR–Lipid 凈化管對(duì)樣品進(jìn)行前處理。該凈化管是一種增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品，使用的增強(qiáng)型除脂分散凈化劑(EMR–Lipid)是一種根據(jù)脂類成分及大多數(shù)目標(biāo)分析物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)的增強(qiáng)型脂質(zhì)去除的凈化材料。特殊的高分子材料經(jīng)水活化后，比表面積增大，疏水性增強(qiáng)，體積排阻，選擇性吸附碳數(shù)大于6 的直鏈烴類結(jié)構(gòu)化合物，如脂質(zhì)(甘油三酯、游離脂肪酸、膽固醇、磷脂等)以及非離子表面活性劑(十六烷基磺酸鈉、十六烷基三甲基氯化銨等)，且不會(huì)造成分析物意外損失。目前分散固相萃取–增強(qiáng)型去除脂質(zhì)技術(shù)主要應(yīng)用于食品中獸藥［17–18］、農(nóng)藥殘留分析［19］，而在日用化工產(chǎn)品檢測方面的應(yīng)用鮮有報(bào)道。筆者運(yùn)用分散固相萃取–增強(qiáng)型去除脂質(zhì)技術(shù)，結(jié)合液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜(LC–MS／MS)法，采用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液校正，建立一種高效、高靈敏度的測定衣物洗滌劑中馬來酸二乙酯含量的方法，填補(bǔ)監(jiān)管空白。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀：QTRAP 5500 型，美國AB SCIEX 公司；

超聲波清洗機(jī)：SB25–12DT 型，寧波新芝生物科技股份有限公司；

旋渦震蕩器：Kylin-Bell VORTEX–5 型，江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司；

電子分析天平：METTLER TOLEDO ME 204型，梅特勒–托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司；

高速離心機(jī)：3–18KS 型，德國希格瑪實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)公司；

氮?dú)獍l(fā)生器：Genius 1024 型，畢克氣體儀器貿(mào)易（上海）有限公司；

溶劑過濾裝置：配置0.22 μm 有機(jī)濾膜和水相濾膜，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；

馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度不小于95%，北京曼哈格生物科技有限公司；

QuEChERS EMR–Lipid 凈化管：美國安捷倫科技有限公司；

氮?dú)猓?9.5%，由氮?dú)獍l(fā)生器制備；

乙腈：HPLC 級(jí)，瑞典歐森巴克化學(xué)公司；

實(shí)驗(yàn)用水：超純水；

實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，CT增強(qiáng)掃描和十二指腸鏡檢查聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，對(duì)壺腹周圍癌病變特征的顯示更準(zhǔn)確和全面。且CT增強(qiáng)掃描或十二指腸鏡檢查單獨(dú)應(yīng)用于壺腹周圍癌病變特征的顯示與2種技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用檢查時(shí)對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

針式過濾器：0.22 μm，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品預(yù)處理

提取：稱取樣品0.2 g（精確到0.001 g）于10 mL 容量瓶中，加入8.0 mL 乙腈，在旋渦振蕩器器上高速振蕩2 min，于60℃水浴中超聲提取20 min，靜置至室溫，用乙腈定容至標(biāo)線，搖勻，以5 000 r／min的轉(zhuǎn)速離心5 min。上清液待凈化。

凈化：在已活化好的QuEChERS EMR–Lipid凈化管中（活化方式：移取5.0 mL 水至QuEChERS EMR–Lipid 凈化管中，在旋渦振蕩器上高速振蕩渦旋30 s），加入5.0 mL 上述上清液，渦旋1 min，于4℃下以9 000 r／min 離心5 min，取上清液，過0.22 μm 濾膜，進(jìn)行LC–MS／MS 分析，采用外標(biāo)法 定量。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1 g(精確至0.000 1 g)于100 mL 容量瓶中，加入乙腈溶解并定容，制備成1.0 mg／mL 的馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。用乙腈稀釋，制備成馬來酸二乙酯質(zhì)量濃度為1.0 μg／mL 的標(biāo)準(zhǔn)中間液。根據(jù)待測樣品基質(zhì)類型的不同，稱取與該待測樣品基質(zhì)類型相同的空白樣品0.2 g（精確到0.001 g）6 份，分別加入適量的標(biāo)準(zhǔn)中間液，按1.2.1 步驟處理，配制成馬來酸二乙酯質(zhì)量濃度分別為0.0，0.5，10.0，25.0，50.0，100.0 μg／L 的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3 儀器工作條件

色譜柱：Waters Symmetry C18液相色譜柱[150 mm×2.1 mm，3.5 μm，沃特世科技(上海)有限公司]；流動(dòng)相：乙腈–水(體積比為70∶30)；流量：0.3 mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：2 μL。

1.3.2 質(zhì)譜

離子源：電噴霧(ESI)；檢測模式：正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)；離子源噴霧電壓(IS)：5 500 V(正離子模式)；離子源加熱溫度：550℃；氣簾氣(CUR)、霧化氣(GAS1)、加熱輔助氣(GAS2)、碰撞氣(CAD):均為氮?dú)猓欢ㄐ噪x子對(duì)、定量離子對(duì)、DP 和CE 見表1。

表1 特征選擇離子及質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

考察了流動(dòng)相乙腈–水體積比分別為80∶20，75∶25，70∶30 下的色譜行為。結(jié)果表明，當(dāng)乙腈–水體積比為80∶20 和75∶25 時(shí)，色譜峰形開叉明顯；當(dāng)乙腈–水體積比為70∶30 時(shí)，峰形最好，靈敏度更高，故選擇體積比為70∶30 的乙腈–水作為流動(dòng)相。濃度為100 μg/L 馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。離子對(duì)173.0／127.1 基線平整，干擾更少，故選取173.0／127.1 為定量離子對(duì)。

圖1 100 μg／L 馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

2.2 提取條件的選擇和優(yōu)化

根據(jù)馬來酸二乙酯的化學(xué)性質(zhì)和衣物洗滌劑的基質(zhì)特點(diǎn)，選取洗衣液、洗衣粉、洗衣皂3 種不同基質(zhì)的衣物洗滌劑樣品，添加5.0 mg／kg 的馬來酸二乙酯，分別考察了甲醇、乙腈和不同配比(體積比分別為90∶10，70∶30，50∶50)的甲醇–水、乙腈–水溶液體系作為提取溶劑的提取效果，結(jié)果見表2。表2 結(jié)果表明，未凈化的樣品，平均回收率只有41.5%～64.8%。為提高方法的回收率，嘗試選取增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR–Lipid 對(duì)提取液進(jìn)一步凈化。考慮甲醇會(huì)溶解EMR–Lipid，故使用乙腈作為提取溶劑，經(jīng)QuEChERS EMR–Lipid 凈化，結(jié)果列于表2。結(jié)果表明，經(jīng)乙腈提取、QuEChERS EMR–Lipid 凈化后的馬來酸二乙酯的回收率提高至90%以上。故選取乙腈為提取劑并使用QuEChERS EMR–Lipid 凈化的方式作為本實(shí)驗(yàn)的樣品預(yù)處理方法。

表2 不同溶劑提取和QuEChERS EMR–Lipid 凈化后的平均回收率

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)是影響待測物定量準(zhǔn)確度的關(guān)鍵因素之一?；|(zhì)效應(yīng)包括基質(zhì)抑制效應(yīng)和基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)［11–12］。衣物洗滌劑中含有大量的表面活性劑等復(fù)雜成分，為了考察其基質(zhì)效應(yīng)的影響，對(duì)馬來酸二乙酯的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)估。目前常用的基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)，可以采用空白樣品加標(biāo)響應(yīng)峰面積與溶劑加標(biāo)響應(yīng)峰面積的比值［21–22］表示，也可用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的線性方程斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率比SR 表示［23–24］。采用SR 值評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)時(shí)：若SR=1，說明無基質(zhì)效應(yīng)；若SR ＜1，呈基質(zhì)抑制效應(yīng)；若SR＞1，呈基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。當(dāng)0.8＜SR＜1.2時(shí)，存在基質(zhì)效應(yīng)，但影響不大；當(dāng)0.5 ＜SR ＜0.8或1.2 ＜SR ＜1.5 時(shí)，表現(xiàn)為中等程度的基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)SR ＜0.5 或SR ＞1.5 時(shí)，表示基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)烈。

用乙腈稀釋馬來酸二乙酯標(biāo)準(zhǔn)中間液，配制與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度相同的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程Y=10 134.35X+137.35。計(jì)算表3 中基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程的斜率(k1)與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率(k2)的比值(SR)，得出洗衣液、洗衣粉、洗衣皂3 種基質(zhì)的SR 值分別為0.66，0.70，0.74。結(jié)果表明，SR 值在0.5～0.8 之間，3 種衣物洗滌劑對(duì)馬來酸二乙酯均存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)，且呈基質(zhì)抑制作用。因此，通過基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正，才能更準(zhǔn)確地反映衣物洗滌劑樣品中馬來酸二乙酯的含量。

2.4 線性回歸方程和檢出限

分別以洗衣液、洗衣粉、洗衣皂為基質(zhì)，配制馬來酸二乙酯質(zhì)量濃度均分別為0.0，0.5，10.0，25.0，50.0，100.0 μg／L 的3 種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。按1.3 儀器工作條件測定基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以馬來酸二乙酯的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，馬來酸二乙酯的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性方程、線性相關(guān)系數(shù)見表3。表3 結(jié)果表明，馬來酸二乙酯在0.5～100.0 μg／L 范圍內(nèi)線性相關(guān)性良好(r＞0.999 6)。根據(jù)3 倍空白噪音計(jì)算檢出限［20］，計(jì)算得馬來酸二乙酯的檢出限為0.05 mg／kg。

表3 線性范圍、線性方程與線性相關(guān)系數(shù)

2.5 精密度與回收試驗(yàn)

稱取經(jīng)檢測不含馬來酸二乙酯的洗衣液、洗衣粉、洗衣皂3 種衣物洗滌劑樣品，分別添加高、低兩個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度水平的同基質(zhì)樣品重復(fù)制備6 個(gè)，按實(shí)驗(yàn)方法測定樣品中馬來酸二乙酯的含量，計(jì)算回收率和精密度，結(jié)果見表4。由表4可知，平均回收率為92.7%～98.2%，測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～4.6%，說明該方法具有良好的精密度與準(zhǔn)確度。樣品加標(biāo)色譜圖如圖2 所示。

表4 回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語

應(yīng)用分散固相萃取–增強(qiáng)型去除脂質(zhì)技術(shù)進(jìn)行樣品處理，以LC–MS／MS 法測定衣物洗滌劑中的馬來酸二乙酯。采用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正，有效地消除或補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)的影響，提高了分析方法的可靠性。該方法特異性好，靈敏度和準(zhǔn)確度以及檢測時(shí)間均能滿足工業(yè)生產(chǎn)過程中的檢測要求，方便監(jiān)管部門對(duì)衣物洗滌劑加工生產(chǎn)企業(yè)原料使用情況進(jìn)行摸底調(diào)查，掌握第一手?jǐn)?shù)據(jù)，排查質(zhì)量安全隱患，并加強(qiáng)對(duì)該化學(xué)物質(zhì)的安全質(zhì)量監(jiān)管。

圖2 加標(biāo)樣品LC–MS／MS 色譜圖