胡穎 杜相飛 王冬雪 馮漢宇

摘? ? 要：從介紹孤雌生殖、化學(xué)試劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖定義入手，對誘導(dǎo)劑、誘導(dǎo)方法、誘導(dǎo)玉米孤雌生殖的機理、植株的結(jié)實特性、孤雌生殖系的鑒定、影響因素等進行綜述，對存在的問題及解決途徑進行展望，希望能為玉米育種工作者進行化學(xué)試劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖研究提供參考。

關(guān)鍵詞：玉米;誘導(dǎo)試劑;結(jié)實率;孤雌生殖

中圖分類號：S513? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.03.017

Breeding of Inbred Lines Through Chemical-Induced Maize Parthenogenesis

HU Ying1， DU Xiangfei2， WANG Dongxue2， FENG Hanyu2

（1.Chengde Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Chengde， Hebei 067000， China;2.Sinofarm Seeds（Group）Company Limited， Beijing 100028， China）

Abstract： The concept of parthenogenesis and chemical-induced maize parthenogenesis were introduced in this paper， induced chemical， treatment methods， induction maize parthenogenesis mechanism， the seed rate trait of the plants， identification of parthenogenesis line and the affect factors were reviewed， the problems existed and solutions were forecasted， we hope that provide a reference for maize breeding workers studying chemical-induced maize parthenogenesis.

Key words： maize; induced chemicals; seed rate of the plants; parthenogenesis

植物孤雌生殖是指雌配子體不經(jīng)授精而在其他因素刺激下或基因控制下發(fā)育形成種子的生殖方式，是無融合生殖的主要類型[1]。誘導(dǎo)玉米孤雌生殖選育自交系，是在控制玉米雌穗不接受玉米花粉的條件下，使用誘導(dǎo)物質(zhì)刺激雌穗結(jié)實，然后繁殖，選育玉米自交系?；瘜W(xué)試劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖就是在人工控制條件下，不經(jīng)過受精，采用化學(xué)試劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖選育自交系，該技術(shù)育種周期短，效率高、用地少、簡便省事、成本低，可把大多數(shù)優(yōu)良基因固定在一個材料中，能克服遠緣雜交障礙，創(chuàng)造新種質(zhì)，是一種快速創(chuàng)造優(yōu)良種質(zhì)資源的玉米育種技術(shù)之一，在選育自交系上具有廣闊的發(fā)展前景[2-3]。

1 誘導(dǎo)劑與誘導(dǎo)方法

誘導(dǎo)劑主要有兩類，一類是化學(xué)藥劑，主要有馬來酰胼、秋水仙堿和二甲基亞砜;另一類是除草劑，主要包括戊炔草胺、甲基胺草磷、胺磺靈、氟樂靈、二甲戊靈誘和炔苯酰草胺等[4]。誘導(dǎo)方法主要有噴施法、注射法、噴注法、涂抹法和子房處理等。噴施法，先剪去一些花絲，保留1～2 cm花絲，噴2 mL左右處理液處理花絲;噴注法，先剪去一些花絲，保留1～2 cm花絲，拔取中部一些花絲，出現(xiàn)凹槽，噴注2 mL誘導(dǎo)劑在花絲或花柱上，噴藥后用硫酸紙袋套好;注射法，為避免花粉污染，用注射器針頭穿過紙袋向苞葉或穗子里注入2 mL處理液;涂抹法，把處理液涂抹在苞葉上;子房處理就是把雌穗苞葉剝開，在其表面噴藥后合上苞葉，噴施法較注射法操作簡單，只是雜株率高[5]，處理時期有抽絲前、抽絲后1，2，3，4，5 d，處理時間點一般選擇早上4：00—7：30或下午6時后。

2 誘導(dǎo)玉米孤雌生殖的機理

誘導(dǎo)劑的種類不同，其誘導(dǎo)機理也不一樣。秋水仙堿引起細胞C型有絲分裂、多極有絲分裂，抑制紡錘體的形成，使染色體加倍;二甲基亞砜誘導(dǎo)某些植物孤雌生殖，可直接獲得純合二倍體;馬來酰胼是一種強烈的染色體斷裂劑，致于二倍體胚的來源，據(jù)已有文獻推測可能是單倍體卵細胞或未減數(shù)的卵細胞，二倍體胚乳來源可能是未受精極核或珠心細胞[6]。史振聲[7]認為，有學(xué)者推測鈍化卵細胞胞質(zhì)中或助細胞中存在一種抑制卵細胞在受精前分裂的抑制物正常授精時花粉管的分泌物可解除這種抑制物，化學(xué)誘導(dǎo)劑有可能起到花粉管分泌物的作用，鈍化那種抑制物，啟動卵細胞分裂，經(jīng)誘導(dǎo)劑的作用而加倍，導(dǎo)致遺傳上純合二倍體胚的形成。氟樂靈、甲基胺草磷、炔苯酰草胺等通過阻止細胞分裂的殺草功能誘導(dǎo)玉米孤雌生殖，氟樂靈具有與二甲戌靈相同的除草機理和功能，但配制后保存時間短些[8]，氟樂靈在低濃度短時間處理下就可誘導(dǎo)小麥根尖分生組織細胞有絲分裂發(fā)生變異，導(dǎo)致出現(xiàn)染色體數(shù)目加倍、多極化、不均等分裂、染色體成環(huán)等現(xiàn)象[9]。

3 誘導(dǎo)植株的結(jié)實特性與誘導(dǎo)率

調(diào)查誘導(dǎo)玉米當代材料的小花數(shù)、結(jié)實穗數(shù)、結(jié)實粒數(shù)，可計算出結(jié)實（株）穗率和結(jié)實粒率，結(jié)實（株）穗率高并不代表結(jié)實粒率高，結(jié)實粒率高也不代表結(jié)實（株）穗率高，兩者之間沒有必然的關(guān)系。孤雌生殖Pa0（誘導(dǎo)結(jié)實當代）以1粒為主，誘導(dǎo)結(jié)實1粒的占半數(shù)以上，平均結(jié)實在2.5粒左右[10]，播種442粒Pa0種子，其中266粒出苗，出苗率為60.18%，花期選擇優(yōu)良單株進行套袋自交留種共182株，正常結(jié)實的植株為133株（Pa1種植一代單株），平均結(jié)實率為30.09%，不同玉米品種的Pa1代的結(jié)實率有差異[11]。趙佐宇[12]用二甲基亞砜、馬來酰胼和秋水仙堿處理5～6個玉米雌穗可獲得一個二倍體純系，王俊強等[13]在2015年按照獲得純系數(shù)除以處理雌穗小花數(shù)計算誘導(dǎo)率，則處理4～5穗可產(chǎn)生1個純系，近期的試驗表明，結(jié)實株一般在30%～80%，結(jié)實粒率平均在1.5?！ぶ?1，有的達3～5粒，每誘導(dǎo)2株可獲得1個純系[7]。

4 孤雌生殖系的后代鑒定

鑒定孤雌生殖系的方法有田間、室內(nèi)、染色體鑒定和同工酶分析等。田間鑒定是通過田間觀測Pa2代的穗行，根據(jù)幼苗、葉形、株高、株形、花藥和花絲等性狀表現(xiàn)是否整齊一致，確認是否為孤雌生殖純系;室內(nèi)鑒定是通過考種果穗性狀是否一致判斷是否為純系;染色體鑒定是通過顯微鏡檢測其染色體是否為二倍體;同工酶分析主要通過酶帶的一致性確認是否為純系[14]。Pa1種子大部分都能正常發(fā)芽出苗，約28.4%的植株中途死亡或得不到種子，Pa2（種植2代）種子在田間種植，株間長勢、長相整齊一致，與常規(guī)自交系相比，其遺傳穩(wěn)定性沒有差異，雖然Pa2代中只有8%左右的純合系，但是絕大多數(shù)的株系在很短時間（Pa3、Pa4代）內(nèi)得到純合[15]。趙念力等[2]于2011年按穗行對70份材料進行田間鑒定，對苗、葉色、株形、雄穗形狀、花藥和花絲的顏色、株高、穗位、抽穗、吐絲和成熟期等進行觀察，結(jié)果表明Pa2多偏母本或父本型，且大多數(shù)表現(xiàn)分離，其中純系頻率為17.1%，觀察了部分根尖和花粉母細胞染色體，結(jié)果表明Pa1和Pa2代植株中6.1%是純合二倍體植株，85%～90%植株是二倍體細胞占絕對多數(shù)的混合體植株，但絕大多數(shù)株系在短時間內(nèi)可以形成純合二倍體[16]，這與谷明光等[17]根系細胞染色體觀察結(jié)果基本相似。

5 影響玉米孤雌生殖頻率的因素

5.1 誘導(dǎo)劑種類、濃度、處理時期和誘導(dǎo)方法

誘導(dǎo)劑種類、濃度、處理時期和誘導(dǎo)方法影響結(jié)實。誘導(dǎo)劑種類不同，誘導(dǎo)率不一樣，不同的藥劑組合誘導(dǎo)孤雌生殖的效果差異很大。合適的誘導(dǎo)濃度，如0.1%秋水仙堿+0.1%二甲基亞砜誘導(dǎo)效果較好，最佳處理時期和方法是吐絲前向苞葉內(nèi)注射誘導(dǎo)劑 [18]，除草劑一般60～80 μmol·L-1的誘導(dǎo)效果最好。關(guān)于處理時期和方法到目前為止，還沒有比較權(quán)威一致的說法，趙念力等[22]認為抽絲3 d噴藥效果最佳，這可能是抽絲3 d卵細胞處于活躍狀態(tài)對藥劑敏感，所以誘導(dǎo)效果好;有的認為抽絲后5 d為最佳，優(yōu)于其他時期或花絲處理，優(yōu)于子房處理[19]，可能與花絲長短對試劑敏感程度不同，或拔出花絲的部位頂端直徑的差異及凹槽深度不同有關(guān)，致使花柱或子房獲得不等量的藥劑而影響誘導(dǎo)效果。

5.2 誘導(dǎo)材料的基因型和不同年份

同一化學(xué)試劑對不同基因型玉米孤雌生殖誘導(dǎo)率不同，同一材料不同年份誘導(dǎo)效果不同。蘭卡群誘導(dǎo)率高于瑞德群誘導(dǎo)率，糯玉米高于普通玉米。育種者在今后誘導(dǎo)玉米孤雌生殖過程中要充分考慮基因型等因素，以便高效育種[20]。基因的純合與孤雌生殖誘導(dǎo)有關(guān)，基因型越復(fù)雜孤雌生殖的誘導(dǎo)頻率越高，不同材料誘導(dǎo)順序為雜交種好于群體材料，群體材料優(yōu)于高代材料。此外早熟品種低于晚熟品種，當?shù)赝茝V品種誘導(dǎo)率均處在前列，因此，在對誘導(dǎo)材料的選擇上要優(yōu)先考慮當?shù)赝茝V或種植適宜的品種、自交系[21]，同一品種或基因型不同年份誘導(dǎo)效果不同，這可能是兩年所用材料的遺傳背景和環(huán)境差異造成的。

6 存在的問題與展望

玉米育種難在選系，重在組配，中心問題是配合力，能否選育出優(yōu)良的玉米雜交種，重點在于選育優(yōu)良自交系，然而從目前的文獻報道來看，此項技術(shù)還存在一些問題，需要進一步完善，比如誘導(dǎo)獲得的種子，并不完全都是理想的純系，其中還含有非整倍體、雜合體等，后代表現(xiàn)并不穩(wěn)定，然而從選系的速度看，快于常規(guī)選系方法，從效率看，又優(yōu)于單倍體選系法，大多數(shù)的株系在很短時間（Pa3、Pa4代）內(nèi)可得到純合[13]。而且獲得的純合系具有整齊度好、遺傳性穩(wěn)定等特點，可直接用來配制雜交組合，且配制的組合整齊度優(yōu)于常規(guī)自交系組合[22]，孤雌生殖系的遺傳性狀和配合力與常規(guī)選育的自交系無異，Pa2代進行測交，經(jīng)農(nóng)藝性狀調(diào)查、產(chǎn)量比較和配合力分析，可選育出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗的玉米雜交種[23]。

參考文獻：

[1]劉飛虎，梁雪妮.植物孤雌生殖研究進展[J].世界農(nóng)業(yè)，1996 （8）：20-23.

[2]趙念力，蘇俊，閆秀峰，等.化學(xué)藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖選育自交系的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（30）：18463-18465.

[3]劉全林，張壽昌，張玉俊.誘導(dǎo)玉米孤雌生殖選育自交系研究初報[J].玉米科學(xué)，1998，6（3）：7-8.

[4]岳堯海，周旭東，王敏，等.化學(xué)試劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖果穗結(jié)實性的研究[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019 （4）：1-4.

[5]張廣峰，盧保紅，孟麗霞，等.2種人工誘導(dǎo)玉米孤雌生殖育種方法的比較[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（1）：141-144.

[6]王宏偉，史振聲，王志斌.我國化學(xué)誘導(dǎo)玉米孤雌生殖育種研究與進展[J].玉米科學(xué)，2001，9（2）：22-25.

[7]史振聲，王志斌，鐘雪梅，等.除草劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖新技術(shù)的應(yīng)用及問題討論[J].玉米科學(xué)，2018，26（4）：24-27.

[8]楊俊偉，王建軍，賈鑫，等.利用二甲戊靈誘導(dǎo)玉米孤雌生殖的研究[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019（4）：53-55.

[9]張競秋，李卓，李海嬰.除草劑氟樂靈對小麥根尖細胞有絲分裂的影響[J].植物研究，2008，28（5）：552-555.

[10]張增川，尹素芬，李勤龍，等.藥物誘導(dǎo)玉米孤雌生殖創(chuàng)造新材料初探[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，60（10）：27-30.

[11]林霞，高波，唐冬梅.藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖試驗研究[J].新疆農(nóng)墾科技，2015（2）：48-49.

[12]趙佐宇，谷明光.藥物誘導(dǎo)玉米孤雌生殖獲得二倍體純系[J].遺傳學(xué)報，1984，11（1）：39-46.

[13]王俊強，丁昕穎，馬寶新，等.化學(xué)藥劑誘導(dǎo)玉米唐四平頭群體孤雌生殖選育自交系的研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015 （10）：10-13.

[14]任燕靜.化學(xué)誘導(dǎo)玉米孤雌生殖快速選育自交系技術(shù)優(yōu)化研究[D].沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

[15]石太淵，楊立國，王穎，等.藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖的研究[J].雜糧作物，2000，20（1）：17-20.

[16]王宏偉，史振聲，邢志遠，等.藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖技術(shù)選育自交系[J].玉米科學(xué)，2007，15（3）： 52-54，58.

[17]谷明光，楊太興，郭樂群，等.藥物誘導(dǎo)玉米孤雌生殖植株的倍性變異[J].遺傳學(xué)報，1995，22（5）：406-412.

[18]王宏偉，邢志遠，史振聲，等.藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖[J].玉米科學(xué)，2006，14（6）：35-37.

[19]余建華，蔡群峰，加那提，等.化學(xué)藥劑誘導(dǎo)玉米孤雌生殖[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1999，4（3）：5-10.

[20]任燕靜，朱敏，史振聲，等.除草劑誘導(dǎo)玉米純系選育新技術(shù)研究[J].玉米科學(xué)，2017，25（1）：1-5.

[21]王俊強，趙念力，錢春榮，等.不同化學(xué)藥劑對玉米孤雌生殖的誘導(dǎo)效果[J].作物雜志，2010（2）：35-37.

[22]李祥昭，陳洪儉.藥物誘導(dǎo)玉米孤雌生殖選育自交系[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，22（1）：52-55.

[23]王金艷，馬駿，孫楠，等.藥劑誘導(dǎo)孤雌生殖玉米育種技術(shù)研究[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（1）：15-18.