吳琪珍

(1. 贛南衛(wèi)生健康職業(yè)學院，江西 贛州341000； 2. 贛州衛(wèi)生學校，江西 贛州 341000)

咖啡?？鼘幩犷惢衔铮且环N常見的天然酚酸類化合物，其酰基由咖啡酸(3,4-二羥基肉桂酸)和奎寧酸(1-羥基六氫沒食子酸)酯化而成。該類化合物主要有單咖啡酰奎寧酸(Mono-caffeoylquinic acids，MCQA)、雙咖啡?？鼘幩?Dicaffeoylquinic acids，DCQA)和三咖啡?？鼘幩?Tricaffeoylquinic acids，TCQA)及各種衍生物?？Х弱？鼘幩犷惢衔锎嬖谟诤芏嘀胁菟幖八卟酥?，比較有代表性的有金銀花、款冬花、茵陳、菜薊、咖啡豆、紅薯等。本文將從咖啡?？鼘幩犷惢衔锏幕瘜W結構，檢測分析及藥理活性等方面做一簡要概述。

1 化學結構

根據(jù)咖啡?；鶄€數(shù)，該類化合物可分為單咖啡?？鼘幩?、雙咖啡?？鼘幩岷腿Х弱？鼘幩?。此外，咖啡酰和奎寧酸母核上由于各種取代，得到了許多咖啡?？鼘幩岬难苌?。

1.1 單咖啡?？鼘幩?/h3>

根據(jù)取代基位點不同，MCQA主要包括4種同分異構體：1-咖啡?？崴?1-CQA)、3-咖啡?？崴?綠原酸，3-CQA)、4-咖啡?？崴?4-CQA)、5-咖啡?？崴?5-CQA)[1]。

圖1 單咖啡?？鼘幩峄衔锏慕Y構式Fig.1 Structure of MCQA

1.2 雙咖啡?？鼘幩?/h3>

植物中常見的雙咖啡?？鼘幩嵊?種，為奎尼酸母核上羥基二取代的同分異構體，主要包括1,3-二咖啡?？崴?1,3-DCQA，洋薊素)、1,4-二咖啡酰奎尼酸(1,4-DCQA)、1,5-二咖啡?？崴?1,5-DCQA)、3,4-二咖啡?？崴?3,4-DCQA，異綠原酸B)、3,5-二咖啡?？崴?3,5-DCQA，異綠原酸A)、4,5-二咖啡?？崴?4,5-DCQA，異綠原酸C)。

圖2 雙咖啡?？鼘幩峄瘜W結構Fig. 2 Structure of DCQA注：1,3-DCQA(1)、1,4-DCQA(2)、1,5-DCQA(3)3,4-DCQA(4)、3,5- DCQA(5)、4,5- DCQA(6)

1.3 三咖啡?？鼘幩?/h3>

目前植物中分離得到的三咖啡?？鼘幩嶂饕獮?,4,5-三咖啡?？鼘幩?、1,3,5-三咖啡?？鼘幩岷?,4,5-三咖啡?？鼘幩帷?/p>

1.4 咖啡?？鼘幩犷愌苌?/h3>

咖啡酰奎寧酸類化合物衍生物有多種，主要分為3種。第一種是奎寧酸母核上1位羧基發(fā)生酯化，如5-O-咖啡?；鼘幩峒柞2]。吳琪珍[3]從菊科植物款冬花中分離得到3,4-二咖啡?？鼘幩峒柞ァ?,5-二咖啡?？鼘幩峒柞ァ?,5-二咖啡?？鼘幩峒柞ズ?-咖啡?？鼘幩峒柞?。

第二種是奎寧酸母核上1位羥基上的氫被烴基取代，如Ela等[4]從植物InulacrithmoidesL.根中分離得到3,5-二咖啡?？鼘幩?1甲酯和4,5-二咖啡酰奎寧酸-1甲酯。

第三種取代主要是除咖啡酰外，奎寧酸母核上羥基被其他取代基，如香草酰(vanilloyl)、阿魏酰(feruloyl)、丁香酰(syringoyl)、葡萄糖等其他取代。Liu等[5]從丁公藤中分離得到11種新的咖啡?？鼘幩嵫苌?，包括4-O-咖啡酰-3-O-香草?？鼘幩?1)、5-O-咖啡酰-4-O-香草?？鼘幩?2)、5-O-咖啡酰-3-O-香草?？鼘幩?3)、4-O-咖啡酰-3-O-香草?？鼘幩峒柞?4)、5-O-咖啡酰-3-O-香草?？鼘幩峒柞?5)、5-O-咖啡酰-3-O-丁香?？鼘幩?6)、4-O-咖啡酰-3-O-丁香?？鼘幩峒柞?7)、4-O-(7"S, 8"R)-糖苷酰-5-O-咖啡?？鼘幩?8)、4-O-(7"S, 8"R)- 糖苷酰-5-O-咖啡?？鼘幩峒柞?9)、3-O-(7"S, 8"R)- 糖苷酰-4-O-咖啡?？鼘幩?10)、3-O-(7"S,8"R)-糖苷酰-4-O-咖啡?？鼘幩峒柞?11)。

Yang等[6]從拐軸鴉蔥中分離得到4種咖啡?？鼘幩犷愌苌铮?-)-1-O-阿魏酰-3-O-二氫咖啡?？鼘幩帷?-)-1-O-阿魏酰-4-O-二氫咖啡?？鼘幩帷?-)-1-O-阿魏酰-5-O-二氫咖啡?？鼘幩帷?-)-1,4-O-二阿魏酰-3-O-二氫咖啡?？鼘幩帷?/p>

1.5 穩(wěn)定性

咖啡?？鼘幩犷惢衔镏写嬖邗ユI、不飽和雙鍵、鄰二酚羥基、羥基等，是這類化合物容易發(fā)生變化的主要因素。在提取過程中，酯基容易發(fā)生水解，異構化，鄰二酚羥基容易發(fā)生氧化。

張倩等[7]對金銀花提取過程中，三個雙咖啡?？鼘幩岬谋壤兓?guī)律進行了檢測。隨著提取時間的變化， 3,5-DCQA所占比例逐漸下降，3,4-DCQA和4,5-DCQA所占比例逐漸升高，作者推測提取過程中3,5-DCQA會異構化為另外2種成分。

在藥材提取過程中，咖啡?？鼘幩犷惓煞职l(fā)生變化不可避免。在單體分離純化及儲存的過程中要極力避免這種變化，嚴格控制溫度，避免過長時間加熱，同時也要注意pH等條件，盡量干燥后保存。在提取分離過程中，多采用旋轉蒸發(fā)儀等進行濃縮，必要時采用真空冷凍干燥，盡可能地減少咖啡?？崴犷惢衔锇l(fā)生變化。

2 檢測分析

咖啡?？鼘幩犷惢衔锍Ｓ玫臋z測分析及含量測定手段有薄層層析色譜、紫外分光光度法、高效液相色譜、液質聯(lián)用色譜等。

薄層層析色譜(TLC)是提取分離中常用的鑒別手段。常用展開系統(tǒng)有BAW系統(tǒng)(正丁醇-醋酸-水：4:1:1)，可以鑒別綠原酸和異綠原酸類成分。藥典記載的金銀花鑒別綠原酸的展開劑是乙酸丁酯-甲酸-水(7.5:2.5:2.5)上層溶液[8]。薄層展開后置紫外燈下展示，365 nm處有熒光。薄層鑒別檢測時間短，儀器簡單易得，缺點是靈敏度不高，尤其是不能有效鑒別同分異構體。

紫外分光光度法常用于總咖啡?？鼘幩岷康臏y定。茍占平等[9]以綠原酸為對照品，直接采用紫外分光光度法，在327 nm處對川渝6種忍冬葉進行了總咖啡?？鼘幩岷康臏y定。甄攀等[10]則采用絡合比色法測定吳茱萸及其炮制品中總酚酸含量，以綠原酸為對照品，1%鐵氰化鉀-1%三氯化鐵(1:1)混合液絡合顯色，于760 nm處采用分光光度法測定了總酚酸含量。

高效液相色譜法(HPLC)是常用的咖啡酰奎寧酸類化合物定性定量鑒別的手段。通常采用的是反相色譜柱，如C18柱，洗脫溶劑為甲醇-水、乙腈-水加入少量的弱酸鹽，如甲酸、乙酸、磷酸等。劉長河等[11]發(fā)現(xiàn)以0.025%磷酸、0.3%醋酸的混合酸為緩沖鹽比單一的緩沖鹽洗脫效果更好，能提高洗脫峰的分離度。李丹等[12]以綠原酸為內標，同時測定山銀花提取物中六個咖啡酰奎寧酸類化合物含量。這種一測多評定量分析方法以一種標準品為內標，同時檢測多種化合物，逐漸受到了廣泛關注。高效液相色譜法主要用于化合物的定量分析，但是在定性鑒別上面仍有缺憾。

液質聯(lián)用色譜技術為咖啡?？鼘幩犷惢衔锏亩ㄐ院投糠治鎏峁┝吮憷軌驅ξ⒘砍煞诌M行定性定量分析。Gouveia等[13]采用HPLC-DAD-ESI/MSn在30 min內分離了1,5-DCQA、3,5-DCQA和3,5-DCQA，進行了定性鑒別與純度測定。

此外，超高效液相色譜(UHPLC)也應用于咖啡酰奎寧酸類化合物的分析，得到了很好地分離效果。

3 藥理活性

3.1 抗菌、抗炎作用

分離得到的的咖啡?？鼘幩犷惢衔镄∈蠓闻莨嘞丛囼灠l(fā)現(xiàn)，綠原酸、3,5-DCQA、4,5-DCQA和3,4-DCQA能有效抑制白細胞數(shù)目的增高，說明有抗炎作用[14]。HAN等[15]對3種二咖啡酰奎寧酸進行活性比較發(fā)現(xiàn)，3,4-DCQA、3,5-DCQA和4,5-DCQA都具有顯著的抗菌作用。此外，從金銀花中分離得到的3-DCQA對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌有明顯的抗菌作用[16]。

3.2 抗氧化、清除自由基作用

咖啡?？鼘幩犷惢衔锲毡榫哂锌寡趸?，清除自由基的作用。從旋覆花中分離得到的1,3-DCQA能夠抑制各種因素引起的氧化損傷，清除羥自由基和超氧自由基，具有顯著的抗氧化作用[17]。從細裂葉蓮蒿Artemisiagmelinii中分離得的綠原酸、4-CQA、3,5-DCQA及其乙酯化物，具有抗氧化活性[18]。

菜薊頭中含有許多多酚類化合物，如1-CQA、3-CQA、1,4-DCQA、4,5-DCQA、3,5-DCQA、1,5-DCQA、3,4-DCQA等。作為一種常用的地中海食物，Garbetta等[19]研究了經(jīng)消化道消化前后多酚類化合物抗氧化能力，結果發(fā)現(xiàn)除1,5-DCQA外，菜薊頭水體物及其中的多酚類抗氧化能力不變。

3.3 抗病毒作用

3,4-DCQA和3,5-DCQA具有抗呼吸道合胞體病毒(RSV)的作用，但是對流感病毒A(Flu A)、柯薩奇病毒 B3(Cox B3)及1型單純性皰疹病毒(HSV-1)無效[20]。

DCQA同分異構體具有明顯的抗HIV病毒活性，作為一種新型的整合酶抑制劑，無論是培養(yǎng)的細胞系還是體內整合酶催化下，DCQA都能夠抑制HIV-1病毒復制[21]。 同樣，1,5-O-DCQA作為已知的一種無毒的HIV-1 整合酶抑制劑，在體內和體外的多種動物模型中均表現(xiàn)抗病毒活性[22]。

3.4 降血糖、降血脂作用

Renalison等[23]通過肥胖模型對綠色咖啡豆的提取物和5-CQA進行篩選試驗，發(fā)現(xiàn)5-CQA是咖啡豆的主要減肥成分。Zhang等[24]從菊科植物魁蒿葉中提取的綠原酸能顯著抑制天然蛋白質酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B) 的活性，并且能選擇性地抑制PTPs同工酶的作用，說明綠原酸可能成為潛在的肥胖癥、糖尿病治療藥物。

3.5 保肝作用

咖啡?？鼘幩犷惢衔锲毡榇嬖谟诰哂斜８巫饔玫牟菟幹?，如茵陳、旋覆花等具有顯著抗肝炎，抗肝纖維化的作用。從具有保肝作用的Inula crithmoides 根中分離得到的3,5-二咖啡?？鼘幩峒柞ァ?,5-二咖啡?？鼘幩峒柞ゼ?,5-二咖啡酰奎寧酸能降低大鼠SGOT、SGPT、ALP和膽紅素水平，說明具有保肝活性[4]。Shi等[25]發(fā)現(xiàn)綠原酸能夠抑制四氯化碳誘導的肝纖維化，其機制可能為抑制TLR4/MyD51/NF-κB信號通路。

Kim等[26]發(fā)現(xiàn)從山萵苣中提取出的3,4-DCQA、3,5-di-O-caffeoyl-muco-quinic acid和5-O-(E)-p-coumaroylquinic acid能抑制乙肝病毒病毒顆粒的釋放，顯著降低細胞內乙肝病毒 DNA水平，表明它們可能為潛在的抗乙肝病毒化療藥物。

3.6 神經(jīng)保護作用

1,5-DCQA對1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(PC12細胞)氧化應激損傷具有濃度依賴性的抑制作用，并抑制α-synuclein的過表達[27]。1,5-DCQA對缺血再灌注誘導的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(PC12細胞)損傷具有保護作用，能夠通過減輕氧化應激、保護線粒體功能，減輕缺血再灌注誘導的PC12細胞損傷[28]。

3,5-DCQA能夠促進人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y細胞)中磷酸甘油酸酯激酶1(PGK1)的mRNA表達，提高細胞內ATP水平，從而發(fā)揮對神經(jīng)元的神經(jīng)保護作用[29]。李春雨等[30]發(fā)現(xiàn)3,5-DCQA對大鼠試驗性局灶性腦缺血-再灌注損傷模型具有保護作用，能降低血清中丙二醛(MDA)水平，增強總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性。此外，3,4-DCQA、3,5-DCQA和綠原酸能保護視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC-5)，抑制小鼠前腦勻漿的脂質過氧化，防止氧化應激誘導的神經(jīng)毒性[31]。

3.7 抗腫瘤作用

綠原酸對肝癌、肺癌、胃癌、口腔癌、白血病、乳腺癌、鼻咽癌、結腸癌、宮頸癌、黑色素瘤、皮膚癌等發(fā)病率較高的腫瘤均表現(xiàn)出較好的防治效果[32]。試驗發(fā)現(xiàn)，綠原酸在缺氧條件下能降低人肝癌細胞株Hep3B中HIF-1a的水平，從而降低了HIF-1a的表達[33]。

3.8 心血管保護作用

研究表明，DCQA能夠抑制血小板聚集。治療心腦血管疾病時，含有一定量的DCQA燈盞細辛注射液等中成藥經(jīng)常與阿司匹林聯(lián)合使用，療效顯著[34]。5-CQA能夠保護1型對氧磷脂酶(PON-1)活性，防止低氧化氯引起的高密度脂蛋白(HDL)的對氧磷脂酶失活,可能具有心臟保護作用[35]。

5-CQA能夠抑制P-選擇素[36]。P-選擇素是一種1型跨膜糖蛋白，常常作為一種血小板激活的生物標記，能夠與P-選擇素配體1(PSGL-1)結合，參與血小板-白細胞及血小板-內皮細胞的作用中。

3.9 止咳化痰作用

吳琪珍等[14]通過小白鼠氨水引咳試驗發(fā)現(xiàn)，款冬花中提取出的綠原酸、3,4-DCQA、3,5-DCQA和4,5-DCQA四種咖啡?？鼘幩犷惢衔锞苎娱L小鼠咳嗽潛伏期，降小鼠咳嗽次數(shù)，其中混合物抑制率最高，為61.7%。此外，小鼠注射酚紅后，給藥組酚紅排泌濃度顯著降低，說明咖啡?？鼘幩犷惢衔锞哂幸欢ǖ幕敌Ч?/p>

4 小結

咖啡?？鼘幩犷惓煞衷谥参镏袕V泛存在，主要是由CQA、DCQA和TCQA組成。這些化合物由許多同分異構體組成，容易發(fā)生異構化。然而多數(shù)藥理試驗結果表明，咖啡?？鼘幩犷惖乃幚砘钚圆粌H跟與奎寧酸所連接的個數(shù)有關，而且與絕對構型密切相關，不同異構體的藥理活性效果不同。因此，如何能得到單一的穩(wěn)定的化合物也是該類化合物的研究重點?？Х弱？鼘幩犷惢衔飳Ξ斍叭藗兯P注的病癥有極大的潛力，如降血糖、降血脂、抗腫瘤等。研究該類化合物的作用機制，結合藥理試驗應用于臨床中，對未來醫(yī)學的研究具有深遠的意義。