王曉林 - 戴鸝瑩 - 邸 松 鐘方麗 -

(吉林化工學院化學與制藥工程學院，吉林 吉林 132022)

中藥類保健食品是在中醫(yī)藥理論指導下以中藥材為主要成分的具有保健功能的特殊食品[1]。刺芪參膠囊是由人參、黃芪、刺玫果3味中藥材制成的保健食品，其中，人參具有抗氧化、增強免疫、降血糖等活性[2-4]，作為新食品原料，其主要應(yīng)用范圍已逐漸從臨床醫(yī)療擴大到保健、食品等領(lǐng)域[5]；刺玫果含有三萜皂苷、黃酮、多糖類活性成分，具有較強的增強免疫及藥食同源的開發(fā)價值[6-7]，刺玫果與人參可以配伍使用[8]。黃芪對免疫系統(tǒng)具有良好的調(diào)節(jié)作用[9]，能提高人體的活力[10]、運動性能，具有抗疲勞的作用[11-12]，人參與黃芪配伍使用可提高機體免疫力[13-14]。課題組擬將人參、黃芪、刺玫果三者配伍，按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》測定其標志性成分人參皂苷及多糖的含量，并進行急性毒性試驗、三項遺傳毒性試驗等試驗，旨在為其研究開發(fā)提供依據(jù)。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

刺芪參膠囊：0.4 g/粒，每粒含人參0.187 5 g、黃芪0.312 5 g、刺玫果0.375 0 g，自制；

人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品：純度≥98.0%，北京馬踏飛燕有限公司；

葡萄糖對照品：純度≥98.0%，上海源葉生物有限公司；

乙腈、甲醇：HPLC級，天津市大茂化學試劑廠；

蒽酮：分析純，上海源葉生物有限公司；

生化試劑盒：四川新健康成生物股份有限公司；

血液學試劑盒：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；

環(huán)磷酰胺：江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司；

1.8-二羥基蒽醌：上海晶純試劑有限公司；

氧化型輔酶II、2-氨基芴：美國Fluka公司；

敵克松：上海金橋化工廠；

疊氮鈉：ACROS公司；

水為重蒸餾水；

其他化學試劑均為分析純；

高效液相色譜儀：Agilent-1260型，搭載DAD陣列檢測器，安捷倫科技有限公司；

全自動生化分析儀：7600型，日本日立株式會社；

奧林巴斯生物顯微鏡：CX31型，日本Olympus Corporation公司；

紫外分光光度計：TU-1810型，北京普析通用儀器有限公司；

獸用全自動血液細胞分析儀：BC-5300Vet型，武漢盛世達醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 試驗動物

SPF級昆明種小鼠、SPF級SD大鼠：動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(湘)2016-0002，動物檢疫時間為3～5 d，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司；

輻照滅菌清潔級大鼠飼料：生產(chǎn)許可證號為SCXK(京)2014-0010，北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 刺芪參膠囊中人參皂苷含量的測定 按《中國藥典》2015年版一部中的方法測定。

(1) 色譜條件：以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，乙腈為流動相A，水為流動相B，檢測波長203 nm，流速1.0 mL/min，洗脫程序見表1。

(2) 線性關(guān)系的考察：精密稱取人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品5.31，4.91，4.87 mg，加甲醇定容至5 mL容量瓶中，精密吸取上述混合對照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，6.0 mL置于10 mL容量瓶中定容，在色譜條件下進樣10 μL，記錄峰面積。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Flow phase gradient elution procedure

(3) 供試品溶液配制：稱取研磨混合均勻的樣品2.50 g，采用氯仿用索氏提取器加熱回流脫脂3 h，將氯仿液回收再利用，剩余藥渣的溶劑揮干，將濾紙筒和藥渣一起移至具塞錐形瓶中，精密加入50 mL正丁醇飽和溶液，密塞，放置過夜，超聲處理30 min，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL于蒸發(fā)皿中蒸干溶劑，加適量甲醇將蒸發(fā)皿中的殘渣溶解，并轉(zhuǎn)移到5 mL容量瓶中，甲醇定容，得供試品溶液。

(4) 方法學考察試驗：精密吸取人參皂苷Rg1、Re、Rb1的混合對照品溶液，按規(guī)定色譜條件下重復進樣6次，記錄峰面積，計算RSD值，考察儀器精密度。取同一批樣品制備6份供試品溶液，按色譜條件進樣，記錄人參皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面積，計算樣品中人參皂苷的含量及RSD值，考察方法的重復性。

(5) 檢出限試驗：精密吸取質(zhì)量濃度分別為21.24，19.64，19.48 μg/mL的人參皂苷Rg1、Re、Rb1的混合對照品溶液進行稀釋，按規(guī)定色譜條件進樣，以信號噪音比≥3為指標，對儀器檢出限進行考察。

(6) 加標回收率試驗和刺芪參膠囊中人參皂苷含量的測定：稱取研磨混合均勻的樣品6份(已知人參皂苷含量)，精密稱定，將適量的質(zhì)量濃度已知的人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品溶液加入到6份樣品中，使加入的對照品與樣品質(zhì)量比分別約為1∶1，制備6份供試品溶液，按色譜條件于203 nm處測定峰面積值，計算加標回收率。

1.3.2 刺芪參膠囊中多糖含量的測定 參照《保健食品功效成分檢測方法》中的蒽酮—硫酸分光光度測定法。

(1) 線性關(guān)系的考察：精密稱取葡萄糖對照品5.55 mg，加水定容至50 mL容量瓶中，配制葡萄糖對照品溶液，精密吸取上述對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL于10 mL比色管中，加水至2.0 mL，制備系列葡萄糖對照品溶液，按照規(guī)定的方法顯色，測定625 nm處的吸光度。

(2) 供試品溶液配制：稱取研磨混合均勻的樣品于100 mL容量瓶中，加水80 mL，沸水浴加熱1 h，冷卻，定容，過濾，取濾液50 mL，加糖化酶0.5 g于60 ℃以下水浴水解1 h，滅酶，冷卻，定容至50 mL，過濾，取續(xù)濾液5.0 mL于離心管中，加入無水乙醇20 mL，混勻，于4 ℃冰箱靜置4 h，離心，棄去上清液，殘渣用80%乙醇洗滌，離心，殘渣加水溶解并定容至25 mL容量瓶，作為供試品溶液。

(3) 方法學考察試驗：精密吸取質(zhì)量濃度為0.11 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，顯色，測定625 nm處的吸光度，重復測定6次，考察儀器精密度。取同一批樣品制備6份供試品溶液，顯色，測定625 nm處的吸光度，計算樣品中多糖的平均含量和RSD值，考察方法的重復性。

(4) 加標回收率試驗和刺芪參膠囊中多糖含量的測定：稱取研磨混合均勻的樣品6份(已知多糖含量)，精密稱定，將適量質(zhì)量濃度已知的葡萄糖對照品溶液加入到6份樣品中，使加入的對照品與樣品質(zhì)量比分別約為1∶1，按照供試品溶液制備方法進行制備，顯色，測定625 nm處的吸光度，計算回收率。

1.3.3 大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗 采用最大耐受劑量法試驗。經(jīng)口灌胃給予刺芪參膠囊供試液，連續(xù)觀察14 d，記錄動物的中毒癥狀和死亡情況，試驗結(jié)束后稱重、處死動物、解剖檢查[15]。

1.3.4 Ames試驗 采用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102 4株標準突變型菌株進行試驗，并以多氯聯(lián)苯(PCB)誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統(tǒng)。采用平板摻入法，在加與不加S-9的條件下進行測試，計數(shù)每皿回復突變菌落數(shù)[16]。

1.3.5 小鼠骨髓細胞微核試驗 按照30 h兩次灌胃法試驗，每次間隔24 h。試驗時高、中、低劑量組動物使用濃度為0.500，0.250，0.125 g/mL的供試液；陽性對照組動物使用濃度為2.000 mg/mL的環(huán)磷酰胺溶液。灌胃體積為20 mL/kg·BW，按照2003年版的《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中該項試驗的方法進行操作，計算微核的千分率及嗜多染紅細胞與正染紅細胞比值[17]。

1.3.6 小鼠精子畸形試驗 高、中、低劑量組動物使用的供試液同1.3.5，設(shè)溶劑對照及環(huán)磷酰胺陽性對照組(50 mg/kg·BW)，陽性對照組動物使用濃度為2.500 mg/mL的環(huán)磷酰胺溶液。各組動物灌胃體積按20 mL/kg·BW每日經(jīng)口灌胃一次，連續(xù)灌胃5 d，按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中小鼠精子畸形試驗中的規(guī)定，記錄畸形類型及精子畸形率[18]。

1.3.7 大鼠長期喂養(yǎng)(30 d)試驗

(1) 大鼠及分組：選用斷乳SD大鼠80只，對照組每組20只大鼠，設(shè)3個劑量組(相當于人體推薦量的25，50，100倍)。采用喂飼法，樣品各劑量組喂飼加樣飼料，對照組喂飼不加樣的基礎(chǔ)飼料，連續(xù)喂養(yǎng)30 d。

(2) 觀察指標：觀察大鼠是否中毒、死亡及行為和表現(xiàn)。每周稱1次體重和2次食物攝入量，計算每周食物利用率、總的食物利用率、總進食量及總增重。于試驗結(jié)束時禁食16 h取腹主動脈血，測定血液學指標和血清生化指標；試驗結(jié)束時處死大鼠，解剖，觀察其內(nèi)臟的變化，對其肝、腎、脾、睪丸進行稱重，計算其臟體比，取肝、腎、脾、胃腸、睪丸(卵巢)作組織病理學檢查[19]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

小鼠骨髓細胞微核試驗用泊松分布和卡方檢驗進行統(tǒng)計學處理，小鼠精子畸形試驗采用X2檢驗進行統(tǒng)計學處理，長期喂養(yǎng)(30 d)試驗采用SPSS統(tǒng)計軟件對各項檢測數(shù)據(jù)作單因素方差分析和(或)t檢驗。

2 結(jié)果與討論

2.1 人參皂苷含量的測定

2.1.1 線性關(guān)系 由表2可知，人參皂苷Rg1、Re、Rb1分別在21.24～637.20，19.64～589.20，19.48～584.40 μg/mL呈線性關(guān)系。

2.1.2 方法學考察 結(jié)果(表3)表明，儀器精密度、方法重復性良好。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果Table 2 The results of linear relationship investigation

表3 方法學考察試驗數(shù)據(jù)

Table 3 Methodological experimental data (n =6)%

2.1.3 檢出限 試驗表明，當人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品質(zhì)量濃度分別為5.31，4.91，4.87 μg/mL時，儀器的信號噪音比為3.8～5.9，上述濃度即定為利用該儀器檢測人參皂苷Rg1、Re、Rb1的檢出限值。

2.1.4 加標回收率試驗和刺芪參膠囊中人參皂苷含量測定 由表4可知，3批刺芪參膠囊中人參皂苷含量分別為0.283，0.279，0.274 g/100 g(以人參皂苷Rg1、Re、Rb1的三者之和計)。

2.2 多糖含量的測定

2.2.1 線性關(guān)系 以葡萄糖對照品質(zhì)量的數(shù)據(jù)為橫軸，測定的吸光度值為縱軸，繪制標準曲線，回歸方程為y=4.558 4x-0.004 7，R2=0.999 4，說明葡萄糖質(zhì)量在0.022～0.132 mg內(nèi)呈線性關(guān)系。

表4 加樣回收率結(jié)果Table 4 Result of recovery tests

2.2.2 方法學考察 試驗表明，儀器在檢測葡萄糖對照品溶液的吸光度時，其RSD為0.39%(n=6)，表明該方法的儀器精密度良好；6份供試品的多糖含量分別為3.37，3.28，3.39，3.33，3.29，3.37 g/100 g，平值為3.34 g/100 g，RSD為1.37%，表明該方法的重復性良好。

2.2.3 加標回收率試驗和刺芪參膠囊中多糖含量測定

由表5可知，3批刺芪參膠囊中多糖含量分別為3.12，3.29，3.38 g/100 g(以葡萄糖計)。

2.3 急性毒性試驗

由表6可知，雌、雄昆明小鼠和SD雌、雄大鼠在觀察期內(nèi)均未出現(xiàn)死亡和明顯中毒癥狀，刺芪參膠囊對大、小鼠急性經(jīng)口MTD值>24.0 g/kg·BW，屬于無毒級。

2.4 遺傳毒性試驗

2.4.1 Ames試驗 由表7、8可知，刺芪參膠囊各劑量對各試驗菌株在加與不加S-9代謝活化系統(tǒng)情況下，回復突變數(shù)均未小于自發(fā)回復突變菌落數(shù)的2倍，并且沒有劑量—反應(yīng)關(guān)系，而陽性對照組的平均回變菌落數(shù)均大于溶劑對照組2倍以上，呈現(xiàn)明顯陽性，說明刺芪參膠囊未誘導4種菌株回變菌落數(shù)增加，Ames 試驗結(jié)果為陰性。

2.4.2 小鼠骨髓細胞微核試驗 由表9可知，刺芪參膠囊各劑量組小鼠骨髓PCE微核率與純水對照組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，環(huán)磷酰胺對照組小鼠骨髓PCE微核率與純水對照組相比，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；未見刺芪參膠囊誘發(fā)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率增高，說明刺芪參膠囊在各劑量下未見致突變作用。

2.4.3 小鼠精子畸形試驗 由表10可知，溶劑對照組昆明雄性小鼠精子畸形率為1.30%，刺芪參膠囊各劑量組精子畸形率為1.32%～1.42%，與純水對照組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；環(huán)磷酰胺對照組精子畸形率為5.42%，與純水對照組相比，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，精子畸形類型主要表現(xiàn)以無定形為主。說明刺芪參膠囊未誘發(fā)小鼠精子畸形率增高。

表5 加樣回收率結(jié)果Table 5 Result of recovery tests

表6 急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果

Table 6 Results of acute oral toxicity test

性別劑量/(g·kg-1·BW)動物數(shù)累積死亡數(shù)MTD/(g·kg-1·BW)始重/g給予受試物第7天體重/g終重/g雌(小)24.0100>24.021.6±0.627.6±2.131.4±2.0雄(小)24.0100>24.021.6±0.834.6±2.240.0±2.4雌(大)24.0100>24.0210.0±10.9237.3±8.4245.0±7.5雄(大)24.0100>24.0211.7±7.6280.5±14.5313.2±15.6

表7 Ames試驗結(jié)果Ⅰ?Table 7 Results of Ames test Ⅰ

? A為敵克松，50 μg /皿；B為疊氮鈉，1.5 μg /皿；C為2-氨基芴，10 μg /皿；D為1,8二羥蒽醌，50 μg /皿。

表8 Ames試驗結(jié)果Ⅱ?Table 8 Results of Ames test Ⅱ

? A為敵克松，50 μg /皿；B為疊氮鈉，1.5 μg /皿；C為2-氨基芴，10 μg /皿；D為1,8二羥蒽醌，50 μg /皿。

2.5 大鼠長期喂養(yǎng)(30 d)試驗

2.5.1 一般觀察 試驗表明，各劑量組雌、雄鼠在整個試驗期間的活動、進食、飲水及糞便性狀正常，沒有發(fā)現(xiàn)其行為明顯改變、中毒及死亡。

2.5.2 對SD大鼠體重及體重增長的影響 由表11可知，各劑量組雌、雄鼠各周體重和試驗期間體重總增重與對照組相比，均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.5.3 對SD大鼠進食及食物利用率的影響 由表12可知，各劑量組雌、雄鼠各周進食量及總進食量與對照組相比，均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；各劑量組雌、雄鼠各周食物利用率及試驗期間雌、雄鼠總食物利用率與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.5.4 血液學指標檢查 由表13可知，各劑量組雌、雄鼠試驗?zāi)┢诟黜椦簩W指標與對照組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.5.5 血液生化指標檢查 由表14可知，低劑量組雌鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)降低，與對照組相比，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；中、高劑量組雌鼠該3項指標與對照組相比，均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，故該3項指標的改變無生物學意義。各劑量組雄鼠各項生化指標和各劑量組雌鼠其他各項血液生化指標與對照組相比，均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表9 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結(jié)果?Table 9 Micronucleus test of polychromatic erythrocytes in bone marrow of mice

? **與溶劑對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

表10 對小鼠精子畸形試驗的影響?Table 10 The effect of Ciqishen capsules on the mouse sperm abnormality test

? **與溶劑對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

表11 刺芪參膠囊對大鼠體重的影響Table 11 The effect of Ciqishen capsules on the body weight of rats

2.5.6 臟器絕對重量和臟/體比值 由表15可知，各劑量組雌、雄鼠各項臟器重量與對照組相比均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中、高劑量組雄鼠腎臟體重比值略高于對照組，與對照組相比，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但該兩項指標值在正常值范圍內(nèi)，故認為該兩項指標的改變無生物學意義；各劑量組雌鼠各臟器系數(shù)和各劑量組雄鼠其他臟器系數(shù)與對照組相比，均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表12 刺芪參膠囊對大鼠各周進食量和各周食物利用率的影響

Table 12 The effect of Ciqishen capsules on the food intake and food utilization of rats each week

性別時間/周0 mg/kg·BW1 334 mg/kg·BW2 667 mg/kg·BW5 334 mg/kg·BW進食量/g食物利用率/%進食量/g食物利用率/%進食量/g食物利用率/%進食量/g食物利用率/%雌1113.8±4.840.7±2.5116.7±5.641.5±4.0111.1±6.038.8±3.3114.0±4.439.2±2.72152.8±5.626.5±4.5152.8±4.524.7±2.4152.0±6.126.2±3.5161.3±4.224.9±4.13150.9±5.820.2±3.0151.2±3.321.8±4.0145.7±1.819.0±3.3148.6±9.118.2±5.04170.2±13.514.0±3.5173.4±11.312.8±5.0171.5±12.214.5±4.0171.3±10.814.8±2.8合計587.7±21.424.0±1.7594.1±37.923.9±2.1580.3±38.723.3±2.1595.2±24.523.1±2.0雄1122.8±10.144.3±3.2123.4±10.644.6±4.6126.9±8.345.3±3.4127.9±8.544.2±2.42171.5±7.829.3±3.8175.4±3.030.8±2.8175.4±3.429.2±1.9174.1±4.129.3±5.63192.2±6.237.0±4.4192.8±8.035.6±3.9191.0±9.334.6±6.4193.9±5.938.8±3.14233.5±15.929.3±16236.7±13.830.1±4.1239.6±24.027.7±3.4251.3±15.629.3±2.4合計720.0±31.733.9±1.4728.3±29.234.2±2.1732.9±33.733.0±2.5747.2±23.534.4±1.6

表13 刺芪參膠囊對大鼠血常規(guī)的影響

Table 13 The effect of Ciqishen capsules on the blood routine of rats

劑量/(mg·kg-1·BW)RBC/(×10l2·L-1)HGB/(g·L-1)PLT/(×109·L-1)WBC/(×109·L-1)HCT/%雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄07.53±0.438.03±0.70164.0±10.8173.7±18.2949±158996±1924.36±1.008.11±1.0847.5±3.250.0±5.41 3347.30±0.687.89±0.24157.2±12.9172.7±7.4842±104911±1213.68±1.248.83±0.9545.9±3.250.6±1.72 6677.96±0.617.51±0.57171.5±11.3165.7±9.6842±1281002±1303.76±1.197.83±2.1449.8±3.547.8±3.05 3347.62±0.647.99±0.50165.4±15.9176.5±11.4776±159889±1373.22±1.226.91±2.1548.4±4.552.0±3.4劑量/(mg·kg-1·BW)NEU/%LYM/%MON/%EOS/%BAS/%雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄014.86±5.5311.56±4.1480.34±6.4983.40±4.263.16±1.064.17±1.381.64±0.550.86±0.410.00±0.000.01±0.031 33418.45±9.6011.71±4.1178.56±10.0482.61±4.881.94±0.874.75±1.261.05±0.630.92±0.360.00±0.000.01±0.032 66717.28±5.1611.77±2.7779.20±5.5383.83±4.042.17±1.233.19±1.451.35±0.441.20±0.380.00±0.000.01±0.035 33418.06±9.4412.39±3.0777.98±13.0883.46±3.571.63±1.773.22±1.122.26±2.530.92±0.350.07±0.220.01±0.03

表14 刺芪參膠囊對大鼠生化指標的影響?

Table 14 The effect of Ciqishen capsules on the biochemical indicators of rats

劑量/(mg·kg-1·BW)TP/ (g·L-1)ALB/(g·L-1)ALT/(U·L-1)AST/(IU·L-1)BUN/(mmol·L-1)雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄054.7±2.153.4±2.131.5±1.030.2±1.731.3±6.732.2±8.283.2±9.787.2±11.57.48±1.284.75±0.611 33456.5±1.852.6±1.132.2±1.029.9±0.723.8±3.2??36.9±9.371.2±6.1??87.5±9.56.67±0.954.86±0.982 66756.3±1.953.5±1.732.3±1.030.3±0.926.6±5.834.9±7.786.0±9.584.7±10.87.32±1.045.42±0.585 33458.1±3.752.2±2.233.1±1.929.9±1.027.9±6.332.0±8.380.7±11.280.5±12.47.96±1.304.98±0.83劑量/(mg·kg-1·BW)CREA/(μmol·L-1)TG/(mmol·L-1)CHOL/(mmol·L-1)GLU/(mmol·L-1)雌雄雌雄雌雄雌雄035.4±5.725.7±3.40.47±0.100.71±0.242.30±0.202.09±0.257.12±0.766.22±0.731 33431.0±3.925.6±3.90.37±0.07??0.61±0.242.42±0.482.00±0.327.58±0.847.01±0.962 66732.2±3.627.6±5.70.42±0.100.51±0.311.91±0.492.08±0.387.45±0.976.78±1.655 33433.2±6.429.8±2.60.53±0.110.54±0.212.23±0.441.82±0.248.04±0.657.78±1.83

? **與溶劑對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

表15 刺芪參膠囊對大鼠臟器重量與臟/體比的影響?Table 15 The effect of Ciqishen capsules on the organ weight and the organ / body ratio of rats

? *與溶劑對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

2.5.7 病理組織學檢查 試驗結(jié)束后處死動物，解剖，肉眼觀察未見異常。組織病理學檢查結(jié)果顯示，對照組有1例雌性大鼠肝臟有輕度小灶狀壞死，高劑量組有1例雄鼠腎小管變性、壞死，系動物自發(fā)病變，與刺芪參膠囊無關(guān)，對照組及高劑量組動物其余臟器未見明顯病理組織學改變。

3 結(jié)論

建立了HPLC測定刺芪參膠囊中人參皂苷(以人參皂苷Rg1、Re、Rb1三者之和計)含量的方法，經(jīng)測定刺芪參膠囊中人參皂苷含量為0.273 g/100 g；建立了UV測定刺芪參膠囊中多糖(以葡萄糖計)含量的方法，經(jīng)測定刺芪參膠囊中多糖(以葡萄糖計)含量為3.190 g/100 g。為了科學地評價刺芪參膠囊作為保健食品的安全性，對其進行了大、小鼠的急性經(jīng)口毒性試驗、遺傳毒性試驗及大鼠30 d 喂養(yǎng)試驗，結(jié)果表明，刺芪參膠囊對大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果MTD值均>24.0 g/kg·BW，屬無毒性；三項遺傳毒性試驗結(jié)果均為陰性，表明刺芪參膠囊未見致畸變作用；刺芪參膠囊連續(xù)30 d給藥沒有對大鼠的血液生化指標產(chǎn)生影響，沒有對大鼠的食物利用率、體重、進食量以及試驗期間總食物利用率、增重、攝食量、主要免疫器官的臟/體比產(chǎn)生明顯影響；動物血液學指標檢查、血生化指標檢查未見異常變化；未發(fā)現(xiàn)與刺芪參膠囊有關(guān)的病理組織學改變。綜上，在試驗條件下口服刺芪參膠囊無明顯毒副作用。刺芪參膠囊的安全性評價按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年)的規(guī)定進行，但該《規(guī)范》目前已失效，而新的《保健食品毒理學評價程序》仍處于征求意見階段，待其實施后，課題組將根據(jù)相關(guān)要求對試驗內(nèi)容進行補充。