韋永江 汪洪發(fā) 梁國(guó)慶 汪勇 王潔 楊通會(huì) 李治芳

豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是一種由豬瘟病毒引起的具有高度傳染性疫病，致死率高，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一。其臨床典型特征是全身皮膚、漿膜、黏膜和內(nèi)臟器官有不同程度的出血，而現(xiàn)在臨床上的普遍情況是非典型化的、亞臨床感染、持續(xù)感染及隱性感染等。 2017年起貴州省羅甸縣豬瘟退出強(qiáng)制免疫范疇，為評(píng)估羅甸縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)戶豬瘟自主免疫效果，本次試驗(yàn)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖大戶、散養(yǎng)戶三個(gè)來源不同的生豬血清樣品開展豬瘟免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟免疫抗體合格率明顯高于養(yǎng)殖大戶和散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖大戶高于散養(yǎng)戶。

為有效做好豬瘟的防疫工作，羅甸縣在每年給各市縣發(fā)放豬瘟疫苗，進(jìn)行春、秋2季集中免疫。為切實(shí)了解2019年豬瘟疫苗免疫實(shí)施情況和評(píng)估免疫效果，根據(jù)免疫計(jì)劃要求，所有發(fā)放疫苗的區(qū)（市）縣的部分規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶和屠宰廠采集血清樣品，采用豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)采集樣品進(jìn)行免疫抗體水平的檢測(cè)。

一、材料與方法

1、試驗(yàn)材料

豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)廠家為深圳真瑞生物科技有限公司，批號(hào)為2019061802）、豬血清樣品（共計(jì)307份樣品）、酶標(biāo)儀、移液器、吸頭、量筒等。

本次試驗(yàn)集中采樣時(shí)間為7天，采樣范圍覆蓋全縣9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)、8個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)、15個(gè)養(yǎng)殖大戶和49個(gè)散養(yǎng)戶，被采樣生豬均為60日齡以上健康豬，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)間為1天。

2、試驗(yàn)方法

采用阻斷ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被豬瘟抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有豬瘟抗原特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其它成分后，再加入酶標(biāo)的抗豬瘟抗體，樣本中的抗體阻斷了酶標(biāo)抗體與包被板上抗原的結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度。

3、檢測(cè)結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm讀取吸光度OD值，試驗(yàn)成立條件為陰性對(duì)照（N）OD值>0.5，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照（P）阻斷率>50%，計(jì)算方法為PI（阻斷率）=1-（樣品OD值/陰性O(shè)D值）。當(dāng)PI（阻斷率）>40%則判斷為陽(yáng)性，當(dāng)PI≦40%且>30%時(shí)為可疑，當(dāng)PI≦30%則判斷為陰性。

二、結(jié)果與分析

通過檢測(cè)得出，養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖大戶、散養(yǎng)戶受檢樣品的豬瘟免疫抗體合格率分別為85.44%、57.27%，23.4%，總體合格率為56.35%，結(jié)果表明不同來源樣品的豬瘟免疫抗體合格率存在明顯差異，養(yǎng)殖場(chǎng)高于養(yǎng)殖大戶和散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖大戶高于散養(yǎng)戶，詳見表一。

三、討論

2017年豬瘟退出強(qiáng)制免疫范疇后，政府不再對(duì)豬瘟免疫作強(qiáng)制要求，豬瘟免疫模式變?yōu)轲B(yǎng)殖場(chǎng)戶自主免疫。從檢測(cè)結(jié)果來看，豬瘟免疫抗體合格率以養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖大戶、散養(yǎng)戶逐漸呈“階梯式”下降，出現(xiàn)這樣的結(jié)果可能與養(yǎng)殖場(chǎng)戶自身的防疫意識(shí)有很大關(guān)系。經(jīng)調(diào)查了解，本次采樣的養(yǎng)殖場(chǎng)均建有詳細(xì)的免疫程序，場(chǎng)內(nèi)各項(xiàng)管理制度相對(duì)規(guī)范，防疫設(shè)施較為齊全，且場(chǎng)主自身防疫意識(shí)較強(qiáng);養(yǎng)殖大戶有一定的防疫意識(shí)，但防疫措施落實(shí)效果不理想;而散養(yǎng)戶基本上不主動(dòng)實(shí)施免疫，防疫意識(shí)較為淡薄。截止目前，全國(guó)已發(fā)生多起非洲豬瘟疫情，其中大部分疫情發(fā)生在中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶，中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶由于防疫意識(shí)不強(qiáng)、 防疫設(shè)施不健全、 防疫措施落實(shí)不到位，對(duì)非洲豬瘟疫情防控工作帶來重大隱患。因此，進(jìn)一步提高全縣養(yǎng)殖場(chǎng)戶自主防疫意識(shí)及防疫條件迫在眉睫。

研究表明：在加強(qiáng)豬瘟診斷和免疫監(jiān)測(cè)的同時(shí)，必須從源頭控制，從種源入手扎實(shí)抓好種豬場(chǎng)豬瘟的防疫工作。為避免免疫失敗，淘汰隱性感染或潛伏感染的種豬。同時(shí)制定科學(xué)合理的免疫程序，適當(dāng)加大免疫劑量，保證豬群具有抵抗豬瘟病毒感染的抗體水平。加強(qiáng)飼料管理，優(yōu)先選用配合飼料，保證豬群的營(yíng)養(yǎng)全面，使機(jī)體擁有較強(qiáng)的免疫力。豬場(chǎng)必須實(shí)施嚴(yán)格的生物安全措施，定期對(duì)圈舍、墊草、糞水和用具等進(jìn)行徹底消毒;來訪人員和工作人員進(jìn)入豬場(chǎng)必須經(jīng)過淋浴等消毒程序;禁止外來人員或車輛進(jìn)入豬場(chǎng)。需引進(jìn)豬時(shí)，必須做好隔離觀察和免疫檢測(cè)。

綜上所述： 本次試驗(yàn)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖大戶、散養(yǎng)戶三個(gè)來源不同的生豬血清樣品開展豬瘟免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟免疫抗體合格率明顯高于養(yǎng)殖大戶和散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖大戶高于散養(yǎng)戶。因此，需要做好相應(yīng)的預(yù)防和控制措施，只有這樣，才能有效的確保養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。

（作者單位：550100貴州省羅甸縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局）