肖佳華 李茹夢 邵力

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌;褶皺臂尾輪蟲;酵母;溫度調(diào)控;種群增長

褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）是海水魚、蝦、蟹等水產(chǎn)幼苗生長發(fā)育期間不可或缺的餌料生物，“育好苗先培好蟲”這句行話說明輪蟲培育是育苗產(chǎn)業(yè)上不可缺少的關(guān)鍵一環(huán)。褶皺臂尾輪蟲食性廣泛，生產(chǎn)上主要以投喂單胞藻為主，但土池生產(chǎn)中單胞藻的接種和培育受天氣環(huán)境等不可控因素的影響較大，工廠化生產(chǎn)中單胞藻的接種和培育則受場地限制等因素影響較大，因此單胞藻產(chǎn)量極其不穩(wěn)定，池塘內(nèi)常常因?yàn)槌霈F(xiàn)藻類的快速演替，從而導(dǎo)致輪蟲餌料短缺的問題，嚴(yán)重影響育苗產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。在單胞藻缺乏時(shí)，酵母是被廣泛運(yùn)用的輪蟲基礎(chǔ)餌料，20世紀(jì)60年代Hirata發(fā)現(xiàn)可以用面包酵母培養(yǎng)海水輪蟲[1]，20世紀(jì)70年代海水小球藻與面包酵母培養(yǎng)輪蟲的模式被廣泛推廣[2]，相比小球藻，酵母生產(chǎn)廠家眾多，可獲得性好，發(fā)酵條件簡單，成本低廉，可在短時(shí)間內(nèi)替代單胞藻作為輪蟲的主要餌料，酵母已經(jīng)被證實(shí)可用于輪蟲高密度生產(chǎn)養(yǎng)殖，可保證在單胞藻供應(yīng)不足情況下維持輪蟲的存活和生長。但相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)單獨(dú)用酵母培養(yǎng)的輪蟲，易產(chǎn)生營養(yǎng)缺乏癥狀，如今輪蟲營養(yǎng)強(qiáng)化的研究涉及到藻類和酵母搭配光合細(xì)菌、魚油、維生素B12和維生素C等[3-8]，甘松永等用酵母與枯草芽孢桿菌作為輪蟲餌料進(jìn)行高密度培養(yǎng)，結(jié)果證實(shí)酵母和芽孢桿菌可用作餌料培養(yǎng)[9]。

本試驗(yàn)針對(duì)枯草芽孢桿菌生長特性及配合酵母投喂后對(duì)輪蟲種群生殖的影響作進(jìn)一步研究，以期獲得枯草芽孢桿菌與酵母搭配的最佳添加濃度和控制溫度，盡可能為實(shí)際生產(chǎn)當(dāng)中所遇到的問題提供數(shù)據(jù)支持，也為輪蟲營養(yǎng)強(qiáng)化提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

本試驗(yàn)中使用的試驗(yàn)菌株為枯草芽孢桿菌粉活化后分離篩選得到，經(jīng)生物性狀和培養(yǎng)試驗(yàn)鑒定為合格的水產(chǎn)養(yǎng)殖專用枯草芽孢桿菌菌株，枯草芽孢桿菌菌粉購自濟(jì)寧金山生物工程有限公司。

本試驗(yàn)使用的褶皺臂尾輪蟲為鹽城射陽海水育苗基地輪蟲養(yǎng)殖池塘內(nèi)取塘口底泥休眠卵孵化而來，試驗(yàn)室孵化后進(jìn)行單個(gè)體純化培養(yǎng)，純化培養(yǎng)后收集休眠卵以保種，輪蟲培養(yǎng)液采用人工海水配方，并每天更換培養(yǎng)液，培養(yǎng)條件：光照度約為 4 000 lx，晝夜比為 16 h ∶ 8 h。

種子培養(yǎng)基：1.50%葡萄糖、1.50%蛋白胨、015%牛肉膏，pH值7.0～7.2，121 ℃滅菌30 min。

液體培養(yǎng)基：1.50%葡萄糖、1.50%蛋白胨、030% K2HPO3、0.10% 30.8 mg/L MnSO4、0.70% CaCO3、0.05% MgSO4·7H2O、0.01% FeCl3，pH值為7.0～7.2，121 ℃滅菌30 min。

斜面培養(yǎng)基：將15 g營養(yǎng)瓊脂溶入1 000 mL液體培養(yǎng)基中，121 ℃滅菌30 min，趁熱倒入已滅菌的培養(yǎng)皿，4 ℃冷藏。

酵母輪蟲基礎(chǔ)食物懸液：取干酵母加入濃度為1.5%葡萄糖培養(yǎng)基，溫度為25 ℃，活化30 min后，以22 ℃、5 500 r/min離心去除葡萄糖培養(yǎng)基，加入人工海水配成濃度為6×106個(gè)/mL酵母液備用。高活性干酵母購自安琪酵母股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 枯草芽孢桿菌活菌生長曲線的測定方法 在無菌操作臺(tái)下，將4 ℃保存的斜面培養(yǎng)基菌株接入已滅菌的新斜面培養(yǎng)基中，置于菌種培養(yǎng)箱 37 ℃ 活化24 h后接種到100 mL種子培養(yǎng)基中，37 ℃，200 r/min，搖床振蕩培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)后的種子液按7%的接種量接入已滅菌的100 mL液體培養(yǎng)基中，37 ℃、200 r/min搖床振蕩培養(yǎng)枯草芽孢桿菌母液，培養(yǎng)0、1、3、5、7、10、12、15、20、24、28 h時(shí)對(duì)枯草芽孢桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。測定各時(shí)間點(diǎn)活菌數(shù)量時(shí)用1 mL無菌吸管吸取1 mL母液的菌懸液，加入9 mL無菌人工海水混勻成1 ∶ 10稀釋比例的菌懸液，這樣依次稀釋，直至得到1 ∶ 105、1 ∶ 106、1 ∶ 107、1 ∶ 108、1 ∶ 109、1 ∶ 1010等濃度，每次稀釋更換無菌吸管，以上每個(gè)濃度設(shè)置3次重復(fù)。向每個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中倒入約10 mL已滅菌的液體培養(yǎng)基，混合均勻，待凝固后備用，用 1 mL 無菌吸管分別吸取不同稀釋濃度活菌懸液 0.1 mL，加至已凝固好的培養(yǎng)基中，用涂布棒涂勻，在無菌操作臺(tái)中靜置 30 min 后，倒置于37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24 h，對(duì)同一梯度平行平板菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算平均值，根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣接種量換算樣品中活菌含量。

1.2.2 輪蟲種群動(dòng)態(tài)研究方法 取冷藏保存的輪蟲休眠卵，放入海水培養(yǎng)液中，在自然光照、25 ℃條件下進(jìn)行孵化，并于16～24 h內(nèi)觀察發(fā)育狀況，發(fā)育形成穩(wěn)定的群體后，挑取出日齡4 h以內(nèi)的輪蟲幼體置于一次性細(xì)胞培養(yǎng)板（6孔）中，每孔加入 5 mL 試驗(yàn)溶液，每孔5只輪蟲幼體，每組設(shè)置6個(gè)平行;在枯草芽孢桿菌剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期的時(shí)間點(diǎn)聯(lián)合酵母配成試驗(yàn)溶液，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)枯草芽孢桿菌的濃度超過1 000 mg/L時(shí)對(duì)輪蟲生長開始有抑制作用，設(shè)置枯草芽孢桿菌的濃度梯度為0（對(duì)照組）、100、200、300、500、800 mg/L，設(shè)置培養(yǎng)箱光照度為 4 000 lx，晝夜比為16 h ∶ 8 h，溫度分別設(shè)置為 20、25、30 ℃。每次間隔24 h鏡檢并更換培養(yǎng)液，連續(xù)觀察10 d，對(duì)輪蟲個(gè)體數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)輪蟲種群數(shù)量、日種群增長率以及種群密度等。

1.3 數(shù)據(jù)處理

種群密度=種群總數(shù)/培養(yǎng)體積。種群密度單位為ind./mL。

根據(jù)收集的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用Excel作初步處理，再用Sigma Plot 11.0軟件進(jìn)行處理。根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），并進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌生長曲線測定

在培養(yǎng)0、1、3、5、7、10、12、15、20、24、28 h時(shí)對(duì)枯草芽孢桿菌活菌數(shù)進(jìn)行記錄，以活菌數(shù)量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制活性菌株生長曲線，由圖1可知，枯草芽孢桿菌菌株從種子培養(yǎng)基接入液體培養(yǎng)基后經(jīng)歷了4個(gè)生長時(shí)期，分別為延遲期、對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰退期，0～4 h為延遲期，4～10 h進(jìn)入對(duì)數(shù)增長期，活菌的數(shù)量呈指數(shù)型增長，峰值約達(dá)到1.1×1010CFU/mL后進(jìn)入穩(wěn)定期，穩(wěn)定期為10～24 h，活菌總體數(shù)量基本保持不變，24 h后進(jìn)入衰退期，活菌數(shù)量下降。因此，活化菌的時(shí)間應(yīng)控制在4 h左右，此時(shí)菌株剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，細(xì)菌形態(tài)典型、生物活性強(qiáng)。

2.2 20 ℃下不同濃度枯草芽孢桿菌聯(lián)合酵母對(duì)輪蟲種群的影響

2.2.1 20 ℃條件下輪蟲種群動(dòng)態(tài) 20 ℃時(shí)，褶皺臂尾輪蟲在不同濃度枯草芽孢桿菌中種群動(dòng)態(tài)變化

見圖2，輪蟲種群數(shù)量隨枯草芽孢桿菌的濃度升高先上升再降低。對(duì)照組最大種群容納量為 324 ind.，100、200、300、500、800 mg/L枯草芽孢桿菌處理組最大種群容納量分別為343、369、375、402、356 ind.。在種群起始密度均為1.0 ind./mL的情況下，除 300 mg/L 枯草芽孢桿菌處理組在第10天才到達(dá)種群數(shù)量高峰外，其他各處理組和對(duì)照組均在第9天達(dá)到種群數(shù)量高峰，之后種群數(shù)量呈下降趨勢。

2.2.2 20 ℃條件下輪蟲種群增長率 褶皺臂尾輪蟲在20 ℃條件下不同濃度枯草芽孢桿菌日種群增長率見圖3，試驗(yàn)組種群增長率始終高于對(duì)照組，500 mg/L枯草芽孢桿菌試驗(yàn)處理組在第5天達(dá)到各試驗(yàn)組中最大種群增長率，為16.3%，明顯高于對(duì)照組，各組種群增長率均隨時(shí)間先上升后下降。對(duì)照組在第5天達(dá)到峰值，處理組種群增長率峰值出現(xiàn)時(shí)間均與對(duì)照組一致。

2.2.3 20 ℃條件下輪蟲種群密度 20 ℃時(shí)，輪蟲在不同濃度枯草芽孢桿菌中種群密度變化見圖4。第2天，對(duì)照組與各試驗(yàn)處理組種群密度差異較小。第3天，各處理組與對(duì)照組相比種群密度顯著增大（P<0.05）。第9天，100、200、800 mg/L處理組與對(duì)照組相比，雖然種群密度增大，但差異不顯著（P>0.05）。第10天，種群密度普遍下降，500 mg/L 組種群密度較第9天減小，但與對(duì)照組差異保持顯著（P<0.05）?？傮w來看，在20 ℃條件下，除 300 mg/L 濃度之外，其他濃度組種群密度隨時(shí)間先增大后減小。

2.3 25 ℃條件下不同濃度枯草芽孢桿菌聯(lián)合酵母對(duì)輪蟲種群的影響

2.3.1 25 ℃條件下輪蟲種群動(dòng)態(tài) 25 ℃條件下對(duì)照組和試驗(yàn)組最大種群容納量見圖5，對(duì)照組最大種群容納量達(dá)到333 ind.，100、200、300、500、800 mg/L枯草芽孢桿菌處理組的最大種群容納量分別達(dá)到603、647、723、842、639 ind.。試驗(yàn)周期內(nèi)各濃度處理組種群最大容量與對(duì)照空白組差異顯著（P<0.05），500 mg/L組最大容納量是空白對(duì)照組的2.53倍。除200 mg/L組之外，對(duì)照組及其他試驗(yàn)處理組到達(dá)峰值的時(shí)間相同，均在試驗(yàn)第9天。

2.3.2 25 ℃條件下輪蟲種群增長率 25 ℃條件下輪蟲種群增長率見圖6，對(duì)照組種群增長率隨時(shí)間延長呈先快速上升后緩慢下降的趨勢。100、200、300、800 mg/L處理組種群增長趨勢同對(duì)照組，呈先快速增長再緩慢下降的趨勢，4個(gè)濃度處理組最大種群增長率均在第3天出現(xiàn)，較對(duì)照組提前1 d。第1天至第3天，800 mg/L組種群增長率最高，從第4天開始，500 mg/L種群增長率超越800 mg/L處理組，并保持緩慢增長趨勢，在第7天到達(dá)最大種群增長率后開始下降，在第10天，試驗(yàn)處理組與對(duì)照組之間差異顯著（P<0.05），但各試驗(yàn)組之間種群增長率差異不顯著（P>0.05）?？傮w而言，25 ℃時(shí)添加枯草芽孢桿菌后，種群增長率在試驗(yàn)周期內(nèi)始終高于空白對(duì)照組，在所有試驗(yàn)處理組中綜合種群增長率最大的是 500 mg/L 處理組，增速最快的是 800 mg/L 處理組。

2.3.3 25 ℃條件下輪蟲種群密度 由圖7可知，25 ℃時(shí)試驗(yàn)第2天，對(duì)照組輪蟲種群密度為（1.2±0.3） ind./mL，與100、200、300、500 mg/L處理組之間差異并不顯著（P>0.05），但此時(shí)對(duì)照組與最高濃度組之間種群密度差異顯著（P<0.05），最高濃度（800 mg/L）組種群密度達(dá)到（1.9±0.4） ind./mL，均大于對(duì)照組及其他處理組。試驗(yàn)第3天，對(duì)照組種群密度為（2.1±0.7） ind./mL，100、200、300、500、800 mg/L處理組種群密度分別為（3.1±0.7）、（2.8±0.5）、（3.3±0.6）、（3.0±0.6）、（3.8±0.7） ind./mL，各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。試驗(yàn)第9天，500 mg/L處理組種群密度達(dá)到峰值，為（28.1±0.4） ind./mL，為對(duì)照組濃度的2.55倍，300 mg/L處理組種群密度達(dá)到（24.1±2.3） ind./mL，是對(duì)照組的2.19倍，此時(shí)最高濃度組的種群密度與100、200 mg/L處理組差異不顯著（P>0.05），分別為（21.0±2.0）、（19.9±2.6）、（21.5±2.3） ind./mL，分別較對(duì)照組提高93.6%、82.7%、94.5%。試驗(yàn)第10天，各試驗(yàn)組種群密度保持穩(wěn)定， 增速降低?？傮w而言，在25 ℃溫度條件下，最適添加濃度控制在300～500 mg/L區(qū)間內(nèi)最佳。

2.4 30 ℃時(shí)不同濃度枯草芽孢桿菌聯(lián)合酵母對(duì)輪蟲密度的影響

2.4.1 30 ℃條件下輪蟲種群動(dòng)態(tài) 由圖8可知，30 ℃時(shí)， 對(duì)照組與100、200、300、500、 800 mg/L處理組的最大種群容納量分別為263、509、513、530、587、488 ind.，各處理組與對(duì)照組差異顯著（P<005）。最大種群容納量出現(xiàn)在500 mg/L處理組，其容納量是對(duì)照組的2.23倍。試驗(yàn)組容納量隨枯草芽孢桿菌濃度升高呈先升高后下降趨勢，第10天，800 mg/L試驗(yàn)組與100 mg/L試驗(yàn)組差異顯著（P<0.05）。100、200、300、800 mg/L處理組及對(duì)照組到達(dá)峰值的時(shí)間相同，均在試驗(yàn)第7天，500 mg/L處理組到達(dá)峰值的時(shí)間為第6天，較其他處理組提前1 d達(dá)到容納量峰值。

2.4.2 30 ℃條件下輪蟲種群增長率 由圖9可知，30 ℃條件下，所有組別種群增長率均隨時(shí)間延長呈先快速上升后下降。其中300、500 mg/L處理組最大種群增長率出現(xiàn)在第2天，較對(duì)照組提前 1 d，其中500 mg/L處理組種群增長率高于 300 mg/L 處理組。對(duì)照組與100、200、500 mg/L 處理組的最大種群增長率出現(xiàn)在第3天。在第3天時(shí)，800、300 mg/L處理組種群增長率低于空白對(duì)照組，其他試驗(yàn)組均高于空白對(duì)照組。種群增長率最大的是500 mg/L處理組。

2.4.3 30 ℃條件下輪蟲種群密度 由圖10可知，30 ℃時(shí)，單因素方差分析結(jié)果表明，在種群起始密度均等的情況下，第2天時(shí)對(duì)照組與100、200、300、500 mg/L處理組差異顯著（P<0.05），與800 mg/L處理組差異不顯著，各處理組間種群密度無顯著差異（P>0.05），此時(shí)500 mg/L處理組種群密度為（3.6±0.6） ind./mL，較對(duì)照組種群密度增加565%。第3天時(shí)，500 mg/L處理組與100、200 mg/L 處理組之間差異不顯著（P>0.05），與空白對(duì)照組差異顯著（P<0.05）， 300、800 mg/L試驗(yàn)組保持緩慢增長，與空白對(duì)照組差異不顯著，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。第4天時(shí)，對(duì)照組除與 800 mg/L 對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）外，與100、200、300、500 mg/L處理組均差異顯著。在試驗(yàn)第6天時(shí)，500 mg/L 試驗(yàn)組種群密度達(dá)到所有處理組中最大值，為（19.6±1.0） ind./mL，是此時(shí)空白對(duì)照組的1.96倍，在第6天后呈下降態(tài)勢，其他濃度（100、200、300、800 mg/L）組在第7天達(dá)到各自的最大種群密度，分別為（16.9±1.2）、（17.1±0.9）、（17.6±2.0）、（16.2±2.7） ind./mL，較此時(shí)對(duì)照組種群密度（11.2±1.7） ind./mL 分別上升509%、52.7%、57.1%、44.6%?？傮w而言，添加枯草芽孢桿菌的處理組最大種群密度均高于空白對(duì)照組，在受試濃度范圍內(nèi)，30 ℃條件下最適添加濃度范圍為300～500 mg/L。

3 討論

針對(duì)單胞藻生產(chǎn)不穩(wěn)定以及藻相突變引起的輪蟲餌料不足等問題，為短時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定輪蟲產(chǎn)量，本試驗(yàn)對(duì)枯草芽孢桿菌配合酵母進(jìn)行研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，在酵母作為主體餌料濃度一定的情況下，溫度和枯草芽孢桿菌濃度是影響褶皺臂尾輪蟲種群數(shù)量增長的主要因素。

3.1 枯草芽孢桿菌濃度對(duì)褶皺臂尾輪蟲的影響

枯草芽孢桿菌是水體中重要的微生態(tài)環(huán)境因子之一，在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)活動(dòng)中起著對(duì)水體生物殘留物及殘餌分解轉(zhuǎn)化的調(diào)節(jié)作用。用酵母培養(yǎng)輪蟲是向水體內(nèi)添加活酵母來保證輪蟲攝食，在生產(chǎn)中隨著酵母的投喂量增加，單位水體中的有機(jī)含量也逐漸增高，所以在輪蟲生長過程中用酵母液培養(yǎng)輪蟲，常常出現(xiàn)殘?jiān)^多水質(zhì)惡化的問題。酵母培養(yǎng)液中添加一定量枯草芽孢桿菌后，枯草芽孢桿菌可在水體中快速繁殖，同時(shí)產(chǎn)生大量的胞外酶類（如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等），消耗水體中的生物殘留物，改善水質(zhì)降低化學(xué)需氧量和氨氮水平，同時(shí)分解出多種氨基酸和維生素類物質(zhì)等代謝產(chǎn)物，為輪蟲生長提供可利用的營養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)輪蟲種群增長起著促進(jìn)功能。本試驗(yàn)的結(jié)果顯示，輪蟲酵母培養(yǎng)液中添加枯草芽孢桿菌的效果表現(xiàn)明顯，各溫度條件下，處理組中輪蟲種群最大容納量和密度顯著高于空白對(duì)照組。溫度設(shè)置在20、25、30 ℃，在枯草芽孢桿菌設(shè)置的0～500 mg/L濃度區(qū)間內(nèi)，褶皺臂尾輪蟲的種群數(shù)量增長效果明顯。在各個(gè)溫度節(jié)點(diǎn)之間，當(dāng)超過一定濃度的時(shí)候，設(shè)置過高的枯草芽孢桿菌濃度并不利于繼續(xù)擴(kuò)大種群容納量，尤其最高濃度 （800 mg/L） 的生長效果均明顯低于 500 mg/L 試驗(yàn)組，這與預(yù)試驗(yàn)得出當(dāng)枯草芽孢桿菌濃度超過 1 000 mg/L 時(shí)對(duì)褶皺臂尾輪蟲的生長是有明顯抑制作用的結(jié)論相符合。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析，在以酵母液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液的情況下，活酵母菌進(jìn)入水體之后，在水體中的繼續(xù)擴(kuò)大繁殖消耗大量氧氣，當(dāng)過量的枯草芽孢桿菌加入酵母基礎(chǔ)培養(yǎng)液后則進(jìn)一步導(dǎo)致水體中氧氣不足，同時(shí)枯草芽孢桿菌因?yàn)榉N群繁殖優(yōu)勢取代酵母菌成為水體優(yōu)勢種，抑制酵母菌的生長，而枯草芽孢桿菌本身無法作為主體餌料滿足輪蟲生長營養(yǎng)需要，從而直接影響輪蟲攝食生長，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致輪蟲在短時(shí)間內(nèi)因濃度和饑餓雙重脅迫而快速死亡。在各溫度條件下，在以活酵母液為主體餌料的情況下，枯草芽孢桿菌最適添加濃度為500 mg/L。

3.2 溫度調(diào)控對(duì)褶皺臂尾輪蟲的影響

溫度是影響輪蟲種群動(dòng)態(tài)的一個(gè)重要影響因子，不同溫度對(duì)影響輪蟲的種群動(dòng)態(tài)產(chǎn)生顯著影響[10-12]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)溫度的逐漸升高，輪蟲的最大種群增長率出現(xiàn)的時(shí)間縮短。說明，提高溫度可以有效地加快輪蟲的繁殖，在一定范圍內(nèi)繁殖速度與溫度呈正比，這與鄭樂云的試驗(yàn)結(jié)果[13]相符。鄭樂云對(duì)超小型輪蟲生長繁殖情況進(jìn)行研究，結(jié)果表明，在25～38 ℃溫度內(nèi)超小型輪蟲繁殖速度與溫度呈正相關(guān)關(guān)系，溫度越高，繁殖速度越快[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，最大種群密度和最大容納量總體表現(xiàn)出隨著溫度的升高呈先增大后減小的趨勢。在實(shí)際生產(chǎn)中為了加快輪蟲繁殖，往往須要設(shè)置高溫，但繁殖速度不代表繁殖能力，溫度越高并不代表種群容納量越大，孫迪杰等探究溫度對(duì)褶皺臂尾輪蟲壽命與繁殖的影響，結(jié)果表明，溫度越高繁殖速度越快，但就繁殖能力而言，輪蟲在高溫區(qū)和低溫區(qū)區(qū)別并不顯著[14]，本試驗(yàn)結(jié)果與之相符。本試驗(yàn)在以酵母為基礎(chǔ)餌料的情況下，種群容納量在20～30 ℃條件下并非溫度越高越好，原因可能是溫度越接近30 ℃，就越接近2種菌類最適宜的繁殖溫度，在自然生態(tài)環(huán)境下，藻類通過光合作用可產(chǎn)生溶解氧補(bǔ)充水體中的氧氣，供有機(jī)物分解以及水中微生物消耗。而在沒有藻類植物產(chǎn)生光合作用的酵母培養(yǎng)液中，升溫后的枯草芽孢桿菌和酵母菌的快速繁殖會(huì)大量消耗氧氣，在沒有采取任何增氧措施的情況下，升高水體溫度后，枯草芽孢桿菌憑借種群繁殖優(yōu)勢再次成為優(yōu)勢種，輪蟲在營養(yǎng)液中唯一的飲食來源被限制，在沒有外界藻類持續(xù)供應(yīng)的情況下，升溫導(dǎo)致水體菌群的改變，從而會(huì)對(duì)輪蟲的生長和攝食產(chǎn)生影響。總體而言，20、25、30 ℃濃度處理組輪蟲最大密度較對(duì)照組分別上升24%、153%、74%，若在生產(chǎn)周期內(nèi)需要在最快速度最短時(shí)間內(nèi)得到足量輪蟲，仍然可盡量將溫度控制在高溫（30 ℃）區(qū)，若想得到最大生產(chǎn)潛力，則將溫度適當(dāng)降低以獲得最大種群容納量。

4 問題與展望

生物餌料高密度生產(chǎn)過程中，輪蟲從投喂小球藻轉(zhuǎn)移到投喂人工餌料后會(huì)大量死亡，其死亡原因與水體中菌落生態(tài)系統(tǒng)突變相關(guān)，生物餌料對(duì)不同菌類的營養(yǎng)需求以及菌類和主要餌料品種的協(xié)調(diào)作用須要進(jìn)一步探索與研究。本試驗(yàn)從宏觀角度證實(shí)添加枯草芽孢桿菌能明顯提高輪蟲產(chǎn)量，酵母與枯草芽孢桿菌之間的協(xié)同機(jī)制尚不明確，從營養(yǎng)強(qiáng)化角度來分析，長時(shí)間食用酵母配合枯草芽孢桿菌能否提高輪蟲體內(nèi)高度不飽和脂肪酸含量還須要進(jìn)一步檢測。其次，輪蟲高密度養(yǎng)殖過程中，水體中菌落生態(tài)較復(fù)雜，單一有益菌種想要形成優(yōu)勢種須要達(dá)到一定數(shù)量，具有一定的難度，所以如何在大水體環(huán)境下確保濃度與活菌數(shù)是生產(chǎn)中的關(guān)鍵，同時(shí)對(duì)于菌類繁殖環(huán)境的控制也是重點(diǎn)，須要盡可能地營造適合菌種的生長環(huán)境，保持養(yǎng)殖水體內(nèi)溶氧環(huán)境，定向培育優(yōu)勢菌群并發(fā)揮其作用，以達(dá)到預(yù)期的效果。如今在高密度養(yǎng)殖導(dǎo)致水體環(huán)境日益惡化的背景下，水產(chǎn)科研人員須要開發(fā)出更多益生菌和微生態(tài)制劑，向水產(chǎn)行業(yè)從業(yè)者傳播健康的微生態(tài)協(xié)調(diào)理念，擴(kuò)大經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)保效益，促進(jìn)我國水產(chǎn)育苗行業(yè)的健康發(fā)展。

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