吳娜　柯敏清　楊新周

摘 要： 采用高效液相色譜法建立食用螞蟻指紋圖譜，考察提取方法、提取溶劑和高效液相色譜的流動相、流動相比例、檢測波長、柱溫等因素對螞蟻指紋圖譜的影響，建立了東北黑螞蟻、長白山紅螞蟻和永德黃螞蟻三個地區(qū)特色食用螞蟻的高效液相色譜指紋圖譜。通過實(shí)驗(yàn)得出，實(shí)驗(yàn)最佳條件為：以甲醇作為提取溶劑，回流提取2 h，色譜柱（島津Shim-pack XR-ODSⅢ， 2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流動相：甲醇， 0.02%磷酸;柱溫35℃;檢測波長：254 nm;進(jìn)樣量10 μL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：通過對三個不同地區(qū)食用螞蟻高效液相色譜指紋圖譜分析，其相似度差異較大，可以鑒別出不同產(chǎn)地的食用螞蟻。

關(guān)鍵詞： 食用螞蟻;指紋圖譜;高效液相色譜

螞蟻是人們最熟悉和常見的昆蟲之一，數(shù)量龐大，分布廣泛。全世界有15000種，我國大約有2000種，具有較大食用、藥用價(jià)值的螞蟻主要有：擬黑多刺蟻、雙齒多刺蟻、黃猄蟻、黃蟻、日本木工蟻、北方蟻、橫紋猛蟻、巨頭切葉蟻、紅尾猛蟻、雙隆骨鋪道蟻等，大多屬蟻亞科種類。

國內(nèi)外很多研究資料表明，食用螞蟻營養(yǎng)價(jià)值很高。螞蟻體內(nèi)含有大量氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和微量元素，且具有多種保健功能，如抗炎、平喘、護(hù)肝、增強(qiáng)人體免疫力等作用。螞蟻中含有20多種氨基酸，其中異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸等含量較高，且屬于人體必需氨基酸。螞蟻中還含有鐵、鈣、鋅、錳、硒、銅等十幾種微量元素，其中鋅、錳、硒的含量合理，極易被人體吸收。

隨著新資源食品推廣，人們逐漸認(rèn)識到食用螞蟻的功效及保健作用，越來越多食用螞蟻?zhàn)呦蚴袌?，許多不良商家為賺取利潤開始以次充好;但目前對食用螞蟻質(zhì)量控制方面的具體標(biāo)準(zhǔn)還有很大空缺，建立指紋圖譜進(jìn)行質(zhì)量控制方面的研究較少。文中利用高效液相色譜儀建立食用螞蟻的液相指紋圖譜，對食用螞蟻的質(zhì)量控制提供參考的基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要材料

本實(shí)驗(yàn)所采用的樣品是東北黑螞蟻（聚源山珍東北特產(chǎn)店）、長白山紅螞蟻（延邊曦寶土特產(chǎn)銷售有限公司）和永德黃螞蟻。

1.2 儀器和試劑

超高效液相色譜儀（LC-20A，日本島津公司）;電子分析天平（CP224C，奧豪斯儀器有限公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELAOSB-2100，上海和杰科技有限公司）;甲醇（GR，賽默飛世爾科技有限公司）;乙腈（GR，上海斯信生物科技有限公司）;磷酸（GR，山東西亞化學(xué)股份有限公司）。

1.3 高效液相色譜條件

紫外檢測器（SPD-20A），色譜柱（島津Shim-pack XR-ODSⅢ，2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流動相：A相甲醇，B相0.02%磷酸;柱溫35℃;檢測波長：254 nm;進(jìn)樣量10 μL。

洗脫程序：0 min（98磷酸/0.02%+2甲醇）;10min（95磷酸/0.02%+5甲醇）;15min（85磷酸/0.02%+15甲醇）;30min（（65磷酸/0.02%+35甲醇）;45min（65磷酸/0.02%+35甲醇）.

1.4 樣品溶液的制備及測定

準(zhǔn)確稱取5.00 g螞蟻樣品，充分研碎，轉(zhuǎn)移至250 mL長頸圓底燒瓶中，加入100 mL75%甲醇提取溶劑，加熱回流提取2 h，待液體冷卻過濾，濃縮，用75%甲醇定容至5mL，過0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，得樣品液，備用。將待測樣品于HPLC測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法選擇

本實(shí)驗(yàn)討論了索氏提取和直接回流提取兩種提取方式，索氏提取法HPLC色譜圖。通過色譜圖對比發(fā)現(xiàn)，索氏提取與直接回流提取相比，直接回流提取方式色譜明顯，峰面積大，峰型相比較優(yōu)，所以選用直接回流提取作為實(shí)驗(yàn)提取方法。

2.2 提取溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)分別比較了甲醇和乙醇兩個極性較大的溶劑作為提取劑對樣品的提取效果影響比較，甲醇、乙醇皆為大極性溶劑，與其他溶劑相比可提取出較多不可揮發(fā)性物質(zhì)，通過實(shí)驗(yàn)得出甲醇作為提取溶劑基線較穩(wěn)，峰型好，出峰效果較優(yōu)，所以選用甲醇作為提取溶劑。

2.3 流動相的選擇

取同一試樣，分別采用乙腈（A相）-磷酸（B相）、甲醇（A相）-0.1%磷酸（B相）、甲醇（A相）-0.02%磷酸（B相）等流動相系統(tǒng)對食用螞蟻進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)探究，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究，采用磷酸-甲醇流動體系比磷酸-乙腈流動相體系出峰多，峰型好，且甲醇-0.02%磷酸的基線比甲醇-0.1%磷酸基線穩(wěn)定，所以采用甲醇-0.02%磷酸作為流動相。

2.4 波長的選擇

選擇同一編號樣品，在同一洗脫程序下分別比較了205 nm，210 nm，254 nm，295 nm波長下的色譜圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在254 nm波長下的HPLC色譜圖基線穩(wěn)定，出峰效果較好，所以選擇254 nm作為檢測波長。

2.5 柱溫的選擇

選擇同一編號樣品，在同一洗脫程序下分別比較在25℃、30℃、35℃、40℃不同柱溫下的HPLC指紋圖譜，通過以上四個不同柱溫下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較可得：在35℃下的HPLC圖譜基線穩(wěn)，峰面積大，出峰效果好，所以選擇35℃作為檢測柱溫。

2.6 食用螞蟻HPLC指紋圖譜的建立

在1.2高效液相色譜條件條件下對東北黑螞蟻（S1），長白山紅螞蟻（S2），永德黃螞蟻（S3）建立指紋圖譜，通過相似度評價(jià)進(jìn)行指紋圖譜分析。樣品參照HPLC指紋圖譜見圖3-15，不同地區(qū)樣品HPLC指紋圖譜見圖1。

2.7 食用螞蟻HPLC指紋圖譜相似度比較分析

將不同地區(qū)樣品建立指紋圖譜，以東北黑螞蟻（S1）樣品為參照，作相似度比較分析，不同地區(qū)HPLC樣品相似度比較結(jié)果見表1。

從圖1中可以得出，三個地區(qū)的螞蟻差異較大，東北黑螞蟻主要色譜峰保留時(shí)間為：1.9 min，2.5 min，4.5 min，35.3 min，37.8 min;長白山紅螞蟻主要色譜峰保留時(shí)間為：3.6 min，5.9 min，6.9 min，32 min，44.5 min;永德黃螞蟻主要色譜峰保留時(shí)間為：5.9 min，14.8 min，17.5 min，20.9 min，26.3min。經(jīng)過相似度分析，其對照指紋圖譜相似度在0.0257～0.899之間，三者差異明顯，說明用HPLC能有效鑒別這三個地區(qū)的螞蟻。

3 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)得出，食用螞蟻指紋圖譜最佳條件為：以甲醇作為提取溶劑，回流提取2 h，色譜柱（島津Shim-pack XR-ODSⅢ， 2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流動相：甲醇， 0.02%磷酸;柱溫35℃;檢測波長：254 nm;進(jìn)樣量10 μL。在最佳條件下建立了不同地區(qū)食用螞蟻高效液相色譜指紋圖譜分析，通過分析其相似度差異較大，可以鑒別出不同產(chǎn)地的食用螞蟻。

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