盧懿，黃味子，戚建平，吳偉

（復(fù)旦大學(xué)智能化遞藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203）

納米結(jié)晶是粒徑在幾十到幾百納米范圍的藥物晶體[1-2]，由于其顯著地增加了藥物顆粒的比表面積，可以極大地提高難溶性藥物的溶出度[3]，進(jìn)而改善其口服生物利用度，降低個(gè)體差異[2,4-5]。因此，納米結(jié)晶技術(shù)最早被用于解決難溶性藥物的口服給藥難題，并取得了巨大成功[6]，迄今已經(jīng)有10余種藥物的納米結(jié)晶口服制劑上市[7]。納米結(jié)晶也可以混懸于溶液中用于注射給藥，具有類似于納米載體的遞藥性能。此外，由于不使用載體材料，納米結(jié)晶理論載藥量高達(dá)100%，也可避免由載體材料帶來的安全性問題[8]。近年來美國FDA批準(zhǔn)的用于靜注治療惡性高熱的Ryanodex?（丹曲林鈉）即是納米結(jié)晶制劑，一瓶的劑量即可滿足1名成年患者的治療需求，從配制到注射也僅需1 min即可完成，而傳統(tǒng)的丹曲林鈉制劑在使用時(shí)需要將12瓶的劑量混合，配制時(shí)間更是長達(dá)20 min，不利于惡性高熱這種急癥的治療。這些上市藥物制劑的成功推動(dòng)了納米結(jié)晶技術(shù)的迅速發(fā)展，除了口服與注射途徑外，納米結(jié)晶在經(jīng)皮給藥、眼部給藥和肺部給藥方面也表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景[9-12]。

人們對(duì)于納米結(jié)晶的體內(nèi)過程仍然所知有限，甚至可能存在錯(cuò)誤的認(rèn)識(shí)。其中一個(gè)重要的原因在于，納米結(jié)晶不含載體材料，不能像其他載體粒子那樣對(duì)材料進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記，進(jìn)而通過熒光或放射性同位素追蹤其體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。目前，對(duì)納米結(jié)晶體內(nèi)過程的研究主要基于藥物的動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)分布的數(shù)據(jù)，然而這些數(shù)據(jù)并不能解釋納米結(jié)晶的體內(nèi)行為。這是因?yàn)?，這些數(shù)據(jù)的獲得需要從血液或組織中提取藥物分析含量，提取的過程無法區(qū)分完整的納米結(jié)晶和溶解的游離藥物，由此推測得到的納米結(jié)晶體內(nèi)過程可能形成錯(cuò)誤的結(jié)論。

近年來，普渡大學(xué)的Li等[13]成功研發(fā)雜化納米結(jié)晶技術(shù)，通過將熒光探針或顯影分子以物理包合的形式雜化入藥物的晶格，使其發(fā)出熒光。這種技術(shù)可以在不改變藥物的晶體性質(zhì)和理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)納米結(jié)晶的體內(nèi)示蹤，為納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)的研究提供了強(qiáng)有力的工具。本文在簡要介紹當(dāng)前納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)的研究方法基礎(chǔ)上，詳細(xì)介紹雜化納米結(jié)晶技術(shù)的基本概念和發(fā)展過程，并綜述了基于雜化聚集導(dǎo)致淬滅（aggregation-caused quenching，ACQ）熒光探針的納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)最新研究進(jìn)展。

1 納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)研究方法

1.1 透射電子顯微鏡

在組織器官中觀察納米結(jié)晶的結(jié)構(gòu)是研究其體內(nèi)命運(yùn)最直接的方法，常用的觀察工具是透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）。Rabinow等[14]靜脈注射伊曲康唑納米懸液后，通過TEM在大鼠脾臟切片中觀察到了巨噬細(xì)胞內(nèi)的藥物結(jié)晶，據(jù)此推測納米結(jié)晶注射后可能迅速被巨噬細(xì)胞吞噬，進(jìn)而改變其藥動(dòng)學(xué)行為和體內(nèi)分布特征。Fu等[15]對(duì)大鼠灌胃給予尼莫地平納米結(jié)晶制劑后，在大鼠腸系膜淋巴液中觀察到了結(jié)晶顆粒，進(jìn)而推測納米結(jié)晶口服后可以被整體攝取。TEM超高的分辨率是從生物組織背景中識(shí)別細(xì)小的藥物納米結(jié)晶的基礎(chǔ)，但為了分辨納米顆粒，觀察視野往往被限制于非常狹小的區(qū)域之中，無法提供機(jī)體水平的轉(zhuǎn)運(yùn)和分布情況，及其動(dòng)態(tài)過程[16]。更為重要的是，TEM的制樣過程可能嚴(yán)重影響結(jié)果的準(zhǔn)確性；現(xiàn)有研究中均使用乙醇進(jìn)行組織脫水，勢必使得未溶解的藥物納米結(jié)晶溶解，而后續(xù)步驟除去乙醇又會(huì)導(dǎo)致藥物結(jié)晶析出；此外，染色劑引入的結(jié)晶性物質(zhì)也可能干擾對(duì)結(jié)果的判斷。

1.2 熒光藥物

采用自身具有熒光的藥物制備納米結(jié)晶，可以通過熒光信號(hào)監(jiān)測其體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。比如，通過激光掃描共聚焦顯微鏡研究姜黃素納米結(jié)晶的透皮轉(zhuǎn)運(yùn)[17]；借助熒光分子香豆素6研究納米結(jié)晶在馬丁達(dá)比犬腎上皮細(xì)胞和斑馬魚幼體中的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制[18]；以及用可水解的二乙酸熒光素開展納米結(jié)晶眼部轉(zhuǎn)運(yùn)研究[19]。雖然這些研究對(duì)揭示納米結(jié)晶的體內(nèi)命運(yùn)具有重要參考價(jià)值，但該方式嚴(yán)重依賴藥物的自發(fā)熒光，并不具備普適性。由于藥物自身的理化性質(zhì)（如溶解度、解離常數(shù)、油水分配系數(shù)）對(duì)于其納米結(jié)晶的體內(nèi)命運(yùn)有極大影響，從少量模型藥物中獲得的研究結(jié)果并不能外推到所有藥物的納米結(jié)晶。更為重要的是，這些藥物溶解后也能發(fā)出熒光，研究者所觀察到的熒光信號(hào)實(shí)際是源于完整的納米結(jié)晶和溶解的藥物分子。隨著時(shí)間的延長，更多藥物溶解，熒光信號(hào)更多地呈現(xiàn)出藥物分子的體內(nèi)行為，與納米結(jié)晶的差異越來越大。

2 雜化納米結(jié)晶

2.1 基本概念

雜化結(jié)晶屬于固體化學(xué)中客體包合的范疇[20-21]，是自然界中較為常見的現(xiàn)象，比如，彩鉆、高碳鋼和半導(dǎo)體等。一般地，雜化微量的客分子即可顯著改變主分子的外觀、機(jī)械強(qiáng)度和導(dǎo)電性等性能，但并不會(huì)改變主分子的晶體性質(zhì)。這些現(xiàn)象促進(jìn)了雜化納米結(jié)晶技術(shù)的發(fā)展[22-27]，其初衷在于發(fā)展一種診療一體的藥物遞送技術(shù)，即將顯影劑、配體或生物相容性聚合物雜化在藥物的納米結(jié)晶中，結(jié)晶的溶解使得配體和聚合物暴露于納米結(jié)晶表面，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)長循環(huán)或靶向遞送。顯影劑則可示蹤納米結(jié)晶的體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程及在疾病部位的變化情況（見圖1）。除了熒光探針外，放射性核素或金屬顯影劑也可通過其對(duì)應(yīng)的顯像設(shè)備起到定位作用。

2.2 制備方法

雜化納米結(jié)晶的制備可以采用傳統(tǒng)的納米結(jié)晶制備方法，即由上到下（top-down）或由下到上（bottom-up）工藝[28]，直接在制備過程中引入顯影劑即可實(shí)現(xiàn)雜化。方便起見，雜化納米結(jié)晶的制備多以由下到上工藝為主，即溶劑-非溶劑沉淀的方法，其基本過程為：根據(jù)顯影劑的親疏水性質(zhì)，將其溶解在藥物溶液中或非溶劑中，一定條件下使藥物溶液與非溶劑混合，藥物結(jié)晶析出并將顯影劑雜化入晶格。比如，親水性熒光分子FPR-749、熒光素和羅丹明B水溶性好，可溶解在水中作為非溶劑[23,29-30]；而親脂性熒光分子DiD、DiR、Cy5等則溶解在藥物的有機(jī)溶劑中[31-34]。熒光分子的大小和親疏水等性質(zhì)會(huì)影響其包載效率，但藥物晶體中熒光分子的包載率通常較低，絕大多數(shù)小于1%，平均載量更是低于0.1%[23,30-31,33-34]。有限的熒光包載量使得雜化納米結(jié)晶和純藥物納米結(jié)晶具有相同的粒度、形態(tài)和結(jié)晶度，因此，從雜化納米結(jié)晶中獲得的研究結(jié)果可以反映藥物納米結(jié)晶的性質(zhì)。由上到下工藝也可用于制備雜化納米結(jié)晶，但一般需要先通過由下到上方法將熒光探針雜化到藥物晶體中，再通過高壓乳勻機(jī)等提供的機(jī)械力將雜化結(jié)晶打碎至理想的粒徑[35]。

2.3 技術(shù)發(fā)展

2.3.1 第一代雜化納米結(jié)晶 第一代雜化納米結(jié)晶處于概念發(fā)展階段，受到當(dāng)時(shí)認(rèn)知的局限，研究者往往使用常規(guī)的熒光探針（即其熒光性質(zhì)不具有環(huán)境響應(yīng)性）制備雜化納米結(jié)晶。Zhao等[29]率先采用親水性熒光分子FPR-749、熒光素和羅丹明B制備雜化納米結(jié)晶，其優(yōu)勢在于可以通過過濾將未雜化的探針分子除去。此外Zhao等[29]對(duì)熒光探針的雜化量進(jìn)行了考察，以熒光素為模型，發(fā)現(xiàn)不同雜化量的雜化納米結(jié)晶都能發(fā)出熒光，但當(dāng)雜化率為0.86%及以下時(shí)，雜化納米結(jié)晶完全溶解時(shí)（對(duì)應(yīng)0.002 mg · L-1及以下的熒光素水溶液）卻不能發(fā)出熒光。據(jù)此，他們確定了熒光素的雜化量。也有研究者采用親脂性熒光探針（如DiD、DiR、Cy5等）制備雜化納米結(jié)晶[32-34]，相對(duì)于親水性熒光分子，其在溶劑-非溶劑沉淀的過程中，未雜化的熒光分子本身也可能結(jié)晶析出形成納米結(jié)晶，將其從藥物雜化納米結(jié)晶中分離出來卻并不容易。

隨著研究的不斷深入，第一代雜化納米結(jié)晶的弊端逐漸顯露，主要在于所采用的熒光探針不具有環(huán)境響應(yīng)性，無論是雜化于納米結(jié)晶中還是由于結(jié)晶溶解而釋放出來的探針均能發(fā)出熒光，基于這些熒光信號(hào)得到的結(jié)論可能造成誤導(dǎo)。Hollis等[30]制備了3H標(biāo)記紫杉醇雜化納米結(jié)晶，通過活體成像觀察荷瘤小鼠中雜化納米結(jié)晶靜脈注射后的熒光分布，同時(shí)通過閃爍計(jì)數(shù)測量紫杉醇的體內(nèi)分布，發(fā)現(xiàn)藥物的體內(nèi)分布與熒光的分布存在差異，且這種差異隨著時(shí)間推移更加明顯。主要原因在于隨著納米結(jié)晶的溶解，更多的探針分子被釋放出來，由于不具備環(huán)境響應(yīng)性，這些探針分子仍然釋放出熒光，由熒光信號(hào)得到的結(jié)果實(shí)際上反映了這些探針分子的體內(nèi)分布情況，而探針分子與紫杉醇的理化性質(zhì)上的差異造成了其體內(nèi)行為及分布上的差異。

2.3.2 第二代雜化納米結(jié)晶 為了準(zhǔn)確地追蹤納米結(jié)晶的體內(nèi)行為，關(guān)鍵問題在于如何區(qū)分雜化納米結(jié)晶信號(hào)和游離探針分子的信號(hào)，這必然要求探針分子具有環(huán)境響應(yīng)性[36]。聚集誘導(dǎo)發(fā)光（aggregationinduced emission, AIE）、ACQ和熒光共振能量轉(zhuǎn)移（f?rster resonance energy transfer, FRET）等熒光探針具有獨(dú)特的環(huán)境響應(yīng)特性，雜化這些熒光探針的第二代雜化納米結(jié)晶獲得了“自我識(shí)別”能力[24-25,37-38]。

2.3.2.1 聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光探針基本原理 AIE是探針分子聚集后發(fā)出熒光的現(xiàn)象 。以典型的四苯基乙烯（tetraphenylethylene, TPE）分子為例，其分子中的4個(gè)苯環(huán)通過剛性的乙烯基連接，處于分子分散狀態(tài)（如溶解在有機(jī)溶劑中）時(shí)，芳香基團(tuán)可以旋轉(zhuǎn)或扭轉(zhuǎn)，激發(fā)態(tài)以熱衰減的形式回到基態(tài)而不發(fā)出熒光；一旦TPE分子聚集（如形成沉淀），分子運(yùn)動(dòng)受阻，激發(fā)態(tài)的耗散只能通過光子發(fā)射來實(shí)現(xiàn)[40]。當(dāng)把TPE分子雜化在藥物納米結(jié)晶中時(shí)，由于分子運(yùn)動(dòng)受到限制，能夠發(fā)出熒光；一旦結(jié)晶溶解釋放出TPE分子，若其能夠保持溶解狀態(tài)，則分子運(yùn)動(dòng)恢復(fù)，熒光淬滅[38]。相對(duì)于傳統(tǒng)的探針分子，AIE可以有更大的使用量，因?yàn)樘结樂肿娱g聚集反而可以增加熒光強(qiáng)度，不用擔(dān)憂熒光淬滅的現(xiàn)象發(fā)生[41]。但其用量也不能無限制增加，過載也會(huì)導(dǎo)致和常規(guī)熒光基團(tuán)類似的熒光衰減甚至完全淬滅[42]。需要注意的是，由于疏水性較強(qiáng)，納米結(jié)晶溶解后釋放的AIE分子可能沉淀析出，從而帶來熒光干擾[43]。而且，AIE探針的發(fā)射波長通常小于600 nm，限制了其在體內(nèi)研究的應(yīng)用，目前主要用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，研究納米結(jié)晶與細(xì)胞間相互作用機(jī)制[41]。

2.3.2.2 聚集導(dǎo)致淬滅熒光探針基本原理 ACQ現(xiàn)象正好與AIE相反，其廣泛存在于具有芳香共軛結(jié)構(gòu)的熒光分子中，由于這些熒光分子具有強(qiáng)疏水性的平面結(jié)構(gòu)，在水環(huán)境中易受到疏水力作用發(fā)生π-π堆疊，分子聚集導(dǎo)致熒光淬滅[44]。ACQ被普遍認(rèn)為是熒光探針的缺點(diǎn)，并在新探針的研發(fā)中極力避免，但是，ACQ性質(zhì)卻在納米粒的自我識(shí)別方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。最近，一系列具有氟化硼二吡咯（BODIPY）或氮雜氟硼二吡咯（aza-BODIPY）母體結(jié)構(gòu)的ACQ近紅外探針在納米粒的體內(nèi)命運(yùn)研究中嶄露頭角[45-54]。它們以分子形式包載于納米粒的疏水骨架中時(shí)，可以發(fā)出強(qiáng)烈的近紅外熒光，一旦骨架破裂，探針釋放遇水，則發(fā)生分子間聚集，導(dǎo)致熒光完全淬滅。由于水在機(jī)體內(nèi)無處不在，可以通過熒光信號(hào)準(zhǔn)確地追蹤納米載體的體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程[45-53]。類似地，這些ACQ探針也可以被用于實(shí)現(xiàn)納米結(jié)晶的“自我識(shí)別”。但是，聚集的ACQ探針也可能在體內(nèi)重新溶解于內(nèi)源性的磷脂/膽鹽膠束或囊泡，以及脂肪組織，從而出現(xiàn)熒光復(fù)現(xiàn)干擾檢測。因此，采用ACQ熒光探針時(shí)往往需要設(shè)計(jì)探針的水溶液淬滅組作為對(duì)照，以評(píng)估熒光復(fù)現(xiàn)的強(qiáng)度。

2.3.2.3 熒光共振能量轉(zhuǎn)移熒光探針基本原理 FRET是發(fā)生在供體分子熒光團(tuán)和受體分子熒光團(tuán)的非輻射能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。當(dāng)供體分子的發(fā)射光譜與受體分子的激發(fā)光譜重疊，且2分子距離很近時(shí)，F(xiàn)RET效應(yīng)發(fā)生，該效應(yīng)的熒光強(qiáng)度與2個(gè)生色團(tuán)之間的距離的6次方成反比[55]。因此，當(dāng)FRET熒光對(duì)被包載于納米載體中時(shí)，分子間距離較近，以供體分子激發(fā)光激發(fā)時(shí)，可以發(fā)出FRET熒光（FFRET），而一旦熒光對(duì)從納米載體中釋放出來，分子間距離增加，F(xiàn)RET效應(yīng)消失，只能發(fā)出供體分子的熒光（F供體）。不同于AIE和ACQ的熒光消失，F(xiàn)RET通過發(fā)射光波長的轉(zhuǎn)變實(shí)現(xiàn)納米載體的“自我識(shí)別”。將DiO/DiI熒光對(duì)雜化于五味子甲酯納米結(jié)晶，通過FFRET/F供體或FFRET/（FFRET+ F供體）的變化可實(shí)現(xiàn)對(duì)納米結(jié)晶的細(xì)胞攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)過程及胞內(nèi)溶解動(dòng)力學(xué)等的監(jiān)測[40]。不過FRET的受體-供體體系對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和后續(xù)分析提出了額外的挑戰(zhàn)。為了實(shí)現(xiàn)定性和半定量納米結(jié)晶的行為，需要謹(jǐn)慎挑選熒光分子對(duì)使FRET熒光穩(wěn)定性最大化且具有一定強(qiáng)度，并保證2種生色團(tuán)的熒光強(qiáng)度具有可比較性[56-57]。另一個(gè)挑戰(zhàn)來自FRET熒光自身不夠理想的環(huán)境穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性[58-59]。不同波長熒光對(duì)的組織穿透能力差異對(duì)納米結(jié)晶體內(nèi)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性也存在一定影響[60]。

3 雜化ACQ探針納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)研究進(jìn)展

鑒于目前第二代雜化納米結(jié)晶中，雜化AIE和FRET探針的結(jié)晶主要用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，本部分介紹通過雜化ACQ探針研究納米結(jié)晶體內(nèi)命運(yùn)的進(jìn)展情況。

3.1 口服給藥

將藥物晶體粉碎至納米尺度，可以顯著增加其比表面積，進(jìn)而顯著促進(jìn)難溶性藥物的溶出和口服生物利用度。體外溶出和體內(nèi)生物利用度的研究結(jié)果無不證明了這些特點(diǎn)，因而，人們推測納米結(jié)晶口服后在體內(nèi)迅速溶解[61-63]。但是，體外溶出條件與體內(nèi)實(shí)際情況存在明顯差異，比如，胃腸道的蠕動(dòng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于體外溶出攪拌的劇烈程度，另外，胃腸道中的水分也極為有限，這些因素并不利于納米結(jié)晶的迅速溶解。如果納米結(jié)晶在胃腸道中可以滯留一定時(shí)間，則可能與小腸細(xì)胞產(chǎn)生相互作用。

Xie等[25]和Shen等[24]分別以雜化ACQ探針的環(huán)孢素A納米結(jié)晶和槲皮素納米結(jié)晶為模型進(jìn)行了系列研究。2種藥物雜化納米結(jié)晶的溶出過程和熒光淬滅是一致的。圖2展示了2種粒徑（250和550 nm）環(huán)孢素A雜化納米結(jié)晶體外溶出過程殘余納米結(jié)晶含量和殘余熒光強(qiáng)度的經(jīng)時(shí)變化曲線，相關(guān)性分析表明兩者具有很好的相關(guān)性。因此，ACQ熒光信號(hào)可以準(zhǔn)確示蹤完整納米結(jié)晶的體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。2種藥物雜化納米結(jié)晶灌胃給藥后，其胃腸道中熒光滯留時(shí)間均長達(dá)12 ～ 18 h，表明納米結(jié)晶口服后并不會(huì)迅速溶解。此外，口服后大鼠肝臟和肺部等主要器官均發(fā)現(xiàn)了熒光信號(hào)，這為雜化納米結(jié)晶的整體吸收提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察小腸組織的冷凍切片，通過ACQ探針信號(hào)，也證實(shí)了完整的納米結(jié)晶可以跨小腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至基底側(cè)。

3.2 注射給藥

納米結(jié)晶注射后的體內(nèi)行為存在較大的爭議。有研究者認(rèn)為，由于具有較快的溶出速度，納米結(jié)晶注射后在血中迅速溶解，呈現(xiàn)類似于藥物溶液的動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)分布特征[64-65]。也有學(xué)者認(rèn)為納米結(jié)晶注射后能夠在一定時(shí)間內(nèi)保持其結(jié)構(gòu)完整性，可能被巨噬細(xì)胞迅速識(shí)別和攝取，從而在單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（mononuclear phagocyte system，MPS）的器官和組織蓄積[66-67]。

Wang等[35]將ACQ熒光探針雜化到姜黃素納米結(jié)晶中，研究其注射后的體內(nèi)行為。結(jié)果發(fā)現(xiàn)姜黃素納米結(jié)晶注射進(jìn)入人體48 h后血液中熒光存留量仍有9.0%±1.3%，表明納米結(jié)晶注射后并不能夠迅速溶解。同時(shí)在大鼠各個(gè)器官中均發(fā)現(xiàn)了ACQ熒光信號(hào)，其在各臟器中的滯留時(shí)間由長到短依次為：肝、肺、脾、腎、心和腦，但主要的分布器官為肝和肺，這二者中的熒光占了臟器總熒光的90%以上。另外，600 nm組的熒光強(qiáng)度幾乎在所有器官中都顯著高于300 nm組，究其原因，除了小粒徑組溶出速率快以外，也說明大粒徑結(jié)晶更易被MPS識(shí)別、吞噬。

3.3 滴眼給藥

納米結(jié)晶載藥量高、刺激性低，巨大的比表面積也使其具有一定的生物黏附力，進(jìn)而延長其在角膜的滯留時(shí)間，有利于藥物在眼部滲透[68-69]。為了研究納米結(jié)晶的眼部給藥后命運(yùn)，Liu等[53]將ACQ探針雜化于環(huán)孢素A納米結(jié)晶，發(fā)現(xiàn)部分納米結(jié)晶能以整體形式滲透進(jìn)入角膜，不過在基質(zhì)和內(nèi)皮中觀察到的熒光信號(hào)微乎其微，說明納米結(jié)晶眼用制劑無法以整體形式穿透角膜，僅能作為藥物貯庫釋放活性分子。

4 結(jié)語與展望

雜化納米結(jié)晶不僅為納米結(jié)晶的體內(nèi)示蹤提供了強(qiáng)有力的工具，也可以發(fā)展成為診療一體化的藥物遞送平臺(tái)技術(shù)。熒光探針的雜化并不需要額外的處理，在納米結(jié)晶制備的同時(shí)即可實(shí)現(xiàn)。由于藥物晶格結(jié)構(gòu)的限制，熒光探針的雜化量往往較低，雖然保證了納米結(jié)晶的理化性質(zhì)不受影響，但對(duì)探針分子的熒光量子效率提出了較高的要求。通過活體成像和激光共聚焦顯微鏡可以從動(dòng)物活體、離體或細(xì)胞層面全面解析雜化納米結(jié)晶的體內(nèi)命運(yùn)和作用機(jī)制。環(huán)境響應(yīng)探針的使用為雜化納米結(jié)晶的準(zhǔn)確示蹤提供了保障，但也需注意熒光復(fù)現(xiàn)等現(xiàn)象對(duì)結(jié)果的干擾。發(fā)展新型的環(huán)境響應(yīng)探針，徹底避免熒光復(fù)現(xiàn)等干擾問題，才能完善雜化納米結(jié)晶技術(shù)。值得注意的是，目前的研究以定性結(jié)果為主，如果能夠通過熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)完整納米結(jié)晶的定量測定，再結(jié)合藥物分子的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，基于這兩點(diǎn)來定量描繪完整納米結(jié)晶粒子和藥物在機(jī)體內(nèi)的時(shí)空命運(yùn)，才能真正揭示納米結(jié)晶制劑的體內(nèi)命運(yùn)，這也是雜化納米結(jié)晶技術(shù)的重要研究方向。隨著越來越多的難溶性備選化合物的發(fā)現(xiàn)，納米結(jié)晶技術(shù)將具有更為廣闊的應(yīng)用前景，對(duì)于納米結(jié)晶的體內(nèi)命運(yùn)及影響因素全解析，對(duì)于納米結(jié)晶制劑的發(fā)展具有非常重大的指導(dǎo)意義。