朱亞男 秦寶福

摘要：目的：分析枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物研究及其在枳實(shí)藥材質(zhì)量控制中的運(yùn)用。方法：對(duì)枳實(shí)黃銅中的二氫黃酮類及揮發(fā)油類的分離進(jìn)行分析。根據(jù)蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷的線性關(guān)系，對(duì)其質(zhì)量控制進(jìn)行分析。結(jié)果：通過(guò)枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物的研究分析，蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷在各自范圍內(nèi)的峰面積良好，測(cè)定系數(shù)在0.95以上。結(jié)論：通過(guò)枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物的枳實(shí)質(zhì)量控制方法分析，可以有效提高枳實(shí)藥材質(zhì)量的控制效果，而且也可以為中藥材料的制備及使用提供支持。

關(guān)鍵詞：枳實(shí)黃酮;對(duì)照提取物;枳實(shí)藥材;質(zhì)量控制

枳實(shí)作為傳統(tǒng)的中藥，主要是蕓香料植物酸橙的干燥幼果，其在中醫(yī)范疇中具有治療飲食積滯、直腸或是子宮脫垂的問(wèn)題。而黃酮類化合物作為植物中一類有活性的二級(jí)代謝產(chǎn)物，在蕓香柚皮苷那種廣泛存在，可以對(duì)腸平滑肌有雙向性的調(diào)節(jié)作用，對(duì)維生素C起到保護(hù)作用，而且也會(huì)影響人體的內(nèi)分泌及代謝情況，安全性較高。研究中，為了更好地提高枳實(shí)的質(zhì)量控制，選擇蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷制備柚皮苷黃酮對(duì)照提取物，分析枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物研究及其在枳實(shí)藥材質(zhì)量控制中的運(yùn)用價(jià)值，具體結(jié)果如下：

1 枳實(shí)黃酮及提取方法

1.1 枳實(shí)黃酮

所謂枳實(shí)黃酮主要是指含有脂溶性柑橘類的生物黃銅，其中的脂溶性柑橘類黃酮存在著柑橘類所特有的聚甲氧基類黃酮類，其比其他類的黃酮活性強(qiáng)，將其運(yùn)用在中醫(yī)領(lǐng)域治療中，可以達(dá)到積滯內(nèi)停、痞滿脹痛、瀉痢后重、大便不通的目的。其理化性質(zhì)如下：第一，黃酮類化合物多數(shù)為結(jié)晶性的物質(zhì)，少數(shù)為無(wú)定型的粉末，大部分中含有酚羥類物質(zhì)，而且，在分子中通常存在著碳基，其位置與交叉共軛，構(gòu)成了黃酮類的化合物質(zhì)。第二，對(duì)于枳實(shí)黃酮中的黃酮苷元物質(zhì)，分子成分中含有雙氫黃酮、黃烷醇等。第三，由于黃酮類化合物存在著較強(qiáng)的熒光特點(diǎn)，在紫外燈的環(huán)境下呈現(xiàn)出黃綠以及暗棕色的特點(diǎn)。第四，枳實(shí)中的二氫黃酮類以及揮發(fā)油類具有一定的抗抑郁以及促進(jìn)胃動(dòng)力的作用，將這種物質(zhì)運(yùn)用在中藥療中，會(huì)實(shí)現(xiàn)抗菌、抗病毒，以及抗炎等治療的目的，充分滿足中藥使用及治療的需求。

1.2 枳實(shí)黃酮的提取方法

1.2.1水提法

在黃酮類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提取中，通過(guò)水提法可以提高物質(zhì)的提取質(zhì)量。在水提法使用中，應(yīng)該充分考慮到水量、提取溫度以及提取時(shí)間等。對(duì)于該種提取方法而言，存在著工藝成本低以及安全性高的優(yōu)勢(shì)，但是，由于水的極性大，容易將物質(zhì)中的蛋白質(zhì)以及糖類溶解，容易出現(xiàn)腐蝕的問(wèn)題。因此，在枳實(shí)黃酮提取中，應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)以及操作環(huán)境，合理選擇提取技術(shù)。

1.2.2堿性水或堿性西醇提取法

通過(guò)對(duì)黃酮類化合物的分析，其存在著較多的酚羥基，通過(guò)堿性水或堿性稀釋提純，可以得到氫氧化鈉以及石灰水氫氧化鈣等水溶液，但是，在該種提純方法使用中，存在著雜質(zhì)較多的問(wèn)題，不利于達(dá)到純化的目的。而通過(guò)石灰水的使用，可以增強(qiáng)物質(zhì)純化的處理效果。

1.2.3有機(jī)溶劑提取方法

對(duì)于這種方法而言，主要利用乙醇，甲醇等物質(zhì)，這些物質(zhì)對(duì)設(shè)備的要求簡(jiǎn)單，而且單率較高，在具體的運(yùn)用中，會(huì)使用冷浸法以及回流法，在不同原料情況下獲取的結(jié)果有所不同。

1.2.4酶法提取工藝

對(duì)于該種技術(shù)而言，主要是在傳統(tǒng)提取工藝上所形成的，利用植物藥材細(xì)胞壁的組成成分以及與酶反應(yīng)高度專一的特點(diǎn)，通過(guò)酶的融合，可以有效將細(xì)胞壁的成分溶解，從而達(dá)到提純的目的。

2 實(shí)驗(yàn)儀器

本次實(shí)驗(yàn)使用的器材包括：循環(huán)水式多用真空泵;數(shù)控超聲波清洗器;高效液相色譜儀;穩(wěn)定性試驗(yàn)箱;Sunfire C18色譜柱（4.6mm250mm，5m）;Sartorious BT25S型十萬(wàn)分之一電子分析天平[1]。

材料包括：蕓香柚皮苷、柚皮苷對(duì)照品、橙皮苷對(duì)照品、甲醇等。

3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

3.1 對(duì)照物提取標(biāo)定

（1）使用Sunfire C18色譜柱，利用流動(dòng)相位甲醇-水-乙醇，流速始終保持在1mL/min，柱溫度為35℃，進(jìn)樣量均為10L。

（2）對(duì)照品的溶液制備中，將不同對(duì)照品種加入甲醇，選擇相通質(zhì)量的對(duì)照品進(jìn)行溶液制備。例如，1ml的蕓香柚皮苷加入甲醇后得到的溶液為20.34g、1ml的柚皮苷加入甲醇后得到的溶液為20.59g[2]。

（3）供試品的溶液制備

選擇枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物（15mg），精密稱定結(jié)束后放在25ml的容量瓶之中，之后利用甲醇進(jìn)行超聲波處理，維持時(shí)間為10min，最后使用甲醇稀釋并搖勻。

4 對(duì)照提取物標(biāo)定

選擇枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物（S1、S2、S3），得到蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷的含量如表1所示[3]。

4.1 對(duì)照提取物在枳實(shí)藥材中的質(zhì)量控制

通過(guò)對(duì)枳實(shí)黃銅對(duì)照提取物對(duì)其在枳實(shí)藥材中的質(zhì)量控制進(jìn)行分析。

（1）對(duì)照提取物溶液制備

選擇枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物，對(duì)其進(jìn)行精密的測(cè)定，將22.50mg的提取物放置在50ml的容量瓶之中，通過(guò)甲醇處理，將溶液稀釋到刻度狀態(tài)并搖勻，之后按照同樣的方法進(jìn)行蕓香柚皮苷以及柚皮苷等溶液的提取。

（2）供試品溶液的制備

通過(guò)對(duì)枳實(shí)藥材制備狀況的分析，應(yīng)該使用50mg的枳實(shí)藥材粉末加入70%的乙醇，之后利用超聲波進(jìn)行處理，之后在進(jìn)行質(zhì)量的稱定。

（3）線性分析

在枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物的質(zhì)量控制中，需要精密提取36.75mg的對(duì)照物放在25ml的容器瓶之中，并加入甲醇，將其溶解到固定刻度之后搖勻處理。之后按照同樣的方法制備對(duì)照提取物溶液[4]。

蕓香柚皮苷的線性回歸方程為：Y=1.584106X-1.152104，r=0.9999，其中的線性范圍在0.0358-0.2760g的范圍內(nèi)。

橙皮苷的線性回歸方程為：Y=1.6847106X+4.060103，r=0.9995。其中的線性范圍在0.1072-0.5360g的范圍內(nèi)。

（4）精密度分析

枳實(shí)藥材粉末50mg，對(duì)其進(jìn)行精密稱定，之后計(jì)算色譜峰峰面積，結(jié)果分別為0.82%、1.08%以及1.22%。

（5）重復(fù)性考察

在重復(fù)性考察及實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，應(yīng)該按照蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷測(cè)定含量，同RSD計(jì)算方法的運(yùn)用，得到重復(fù)性的考察結(jié)果為1.95%、1.74%以及1.88%。

（6）枳實(shí)藥材含量的測(cè)定

在枳實(shí)藥材測(cè)定中，需要對(duì)精密度進(jìn)行稱定處理，并按照植被供試品對(duì)枳實(shí)黃銅進(jìn)行對(duì)照，利用OriginPro9.1統(tǒng)計(jì)軟件可以發(fā)現(xiàn)，蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷的系數(shù)均大于0.95，表面該種測(cè)定方法具有一致性。因此，在枳實(shí)黃銅對(duì)照物提取物分析中，可以代替單體對(duì)照品評(píng)價(jià)枳實(shí)藥材的質(zhì)量。

5 結(jié)果

通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的分析可以發(fā)現(xiàn)，70%的乙醇提取物加水分散后存在著不溶物，通過(guò)HPLC含量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)水不溶物中的柚皮苷含量相對(duì)較高。在對(duì)單體對(duì)照品以及枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物的對(duì)比中，通過(guò)對(duì)不同色譜柱Sunfire C18的分析，不同流動(dòng)相中的枳實(shí)黃酮色譜峰值的影響結(jié)果不同，在使用HPLC含量測(cè)定中，具有準(zhǔn)確度高以及穩(wěn)定性強(qiáng)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)。

6 結(jié)語(yǔ)

枳實(shí)運(yùn)用在中醫(yī)范疇中，可以治療積滯內(nèi)停以及大便秘結(jié)的問(wèn)題，枳實(shí)中的二氫黃酮類以及揮發(fā)油類具有一定的抗抑郁以及促進(jìn)胃動(dòng)力的作用，因此，在枳實(shí)藥材質(zhì)量控制的過(guò)程中，應(yīng)該根據(jù)枳實(shí)藥材的特點(diǎn)，仔細(xì)分析藥物的屬性及基本特征，將二氫黃酮類成分的含量作為核心標(biāo)準(zhǔn)，以便更好地控制藥材的質(zhì)量，規(guī)范中藥管理的可行性及質(zhì)量性，充分發(fā)揮枳實(shí)藥材的安全價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]賈富霞，王秀娟，羅容.酸橙枳實(shí)HPLC指紋圖譜方法研究及6種黃酮類藥效組分的含量測(cè)定[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016（12）：103-106.

[2]王章偉，王振，邱小燕.HPLC法同時(shí)測(cè)定枳實(shí)總黃酮苷提取物中3個(gè)香豆素類成分含量[J].江西中醫(yī)藥，2018，（11）：57-60.

[3]李曉婷，李純.基于有效物質(zhì)基礎(chǔ)的枳實(shí)藥材的質(zhì)量控制體系研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013（10）：696-700.

[4]陳建真，袁華，陳彬.枳實(shí)和枳殼中黃酮苷類成分的比較研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2015（5）：53-54.