（上海東富龍科技股份有限公司，上海 201108）

2020年2月20晶，歐盟委員會健康與食品安全局發(fā)布了《EU GMP 指南》附錄1的新一版草案。修訂文件將面向相關(guān)組織和利益相關(guān)方征求意見，為期3個月，按原計劃是到2020年5月20晶征求意見結(jié)束。由于新冠疫情的影響，歐盟委員會5月初發(fā)布了新的公告，歐盟GMP 附錄1 征求意見稿的截止日期延長到2020年7月20晶[1]。

歐盟GMP 附錄1“無菌藥品生產(chǎn)”于1971年首次出版。在往后的數(shù)年間，該附錄進(jìn)行了數(shù)次的更新，例如，分別于2005年和2007年更新潔凈室級別列表，以包含培養(yǎng)基模擬灌裝和生物監(jiān)控，2010年增加關(guān)于西林瓶密封性指南。

2017年底，歐盟發(fā)布第一版GMP 附錄1 征求意見稿，重點(diǎn)加強(qiáng)了結(jié)構(gòu)化的指導(dǎo)，包括最新的原則，如：質(zhì)量風(fēng)險管理、污染控制策略、以及對新技術(shù)和新工藝的考慮。當(dāng)時，草案中包含了一部分新的章節(jié)，如：公用設(shè)施，以及關(guān)于諸如生產(chǎn)和特定技術(shù)或無菌工藝模擬（Aseptic Process Simulation，縮寫為APS）要求的擴(kuò)展。在后續(xù)面向公眾的征求意見過程中，歐盟EMA 收到了超過6 000 份反饋意見，這次的征求意見稿是第二版。最新文件與2017年出版的草案相比，新文件涵蓋了大量的改動，目前文件已超過50頁，分為11個章節(jié)。

1 法規(guī)主要變化點(diǎn)解讀

與2017年草案相比，最新"無菌藥品生產(chǎn)"征求意見稿主要變化點(diǎn)如下。

1.1 規(guī)范適用范圍的改變

范圍的改變，與現(xiàn)行有效的歐盟GMP 附錄1（2008版）以及2017年出版的附錄1 草案最顯著的差異可在標(biāo)題和目錄中看到。附錄1的標(biāo)題由“無菌藥品生產(chǎn)”更名為“無菌產(chǎn)品生產(chǎn)”，即，附錄1 涵蓋的產(chǎn)品范圍已大大擴(kuò)大。原來的附錄1 只適用于無菌生產(chǎn)的藥品，這一版在范圍中規(guī)定“包括可適用該附錄一般原則的其他領(lǐng)域（不僅限于無菌產(chǎn)品）”的描述中也已清晰地表達(dá)了這一要點(diǎn)。第一章“范圍”條款1 規(guī)定：“無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)包括其他更大范圍的無菌產(chǎn)品類型（活性物質(zhì)、無菌輔料、內(nèi)包裝材料以及制劑），包裝規(guī)格（從單個包裝到多個包裝），工藝（高度自動化生產(chǎn)到手動生產(chǎn)）以及技術(shù)（如：生物技術(shù)、經(jīng)典的小分子生產(chǎn)和封閉系統(tǒng)）”。

1.2 關(guān)于質(zhì)量風(fēng)險管理（QRM）

第二章“原則”條款2.2中提到質(zhì)量風(fēng)險管理（Quality Risk Management，縮寫為QRM）的概念，質(zhì)量風(fēng)險管理的重要性也得到了更詳細(xì)的強(qiáng)調(diào)，其中當(dāng)然包括根據(jù)關(guān)鍵性對現(xiàn)有工藝的總體性評估，這一要點(diǎn)在范圍中進(jìn)行說明，“本附錄基于使用質(zhì)量風(fēng)險評估（QRM）的無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)提供了通用性指導(dǎo)，以確保最終產(chǎn)品能夠防止微生物、粒子以及熱源的污染?！绷硪环矫?，QRM 也被視為證明任何必要的偏差所指定要求的依據(jù)。這一點(diǎn)在目前發(fā)布的草案中進(jìn)行了說明：“在采取替代的方法時，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)睦碛珊惋L(fēng)險評估，且應(yīng)符合本附錄要求”。QRM 首先應(yīng)包括廠房、設(shè)備以及工藝的設(shè)計，然后基于良好的設(shè)計程序進(jìn)行實施，監(jiān)測系統(tǒng)是證明設(shè)計和程序得到了正確的執(zhí)行并繼續(xù)按照既定的需求執(zhí)行是最終的要素。僅監(jiān)測和測試并不能保證無菌的要求。

1.3 引入污染控制策略（CCS）的概念

第二章“原則”條款2.3中提到污染控制策略（Contamination Control Strategy，縮寫為CCS）：針對微生物、熱原和微粒的一系列有計劃的控制措施，源于對現(xiàn)有產(chǎn)品和工藝的理解并確保工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量?？刂拼胧┛砂?，原料藥和制劑的物料和組分相關(guān)的參數(shù)和屬性、廠房設(shè)施設(shè)備的操作條件、中間過程控制、成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、以及相關(guān)方法和監(jiān)控頻次。這一概念首次出現(xiàn)在2017年歐盟GMP 附錄1草案中，但是最新的2020版附錄1 草案中“污染控制策略（CCS）”一詞得到了更加強(qiáng)烈的強(qiáng)調(diào)，全文共出現(xiàn)43次，明確需要在整個生產(chǎn)過程和所有相關(guān)領(lǐng)域建立一致概念的原則。污染控制策略（CCS）被定義為一個多元素、正式記錄的文件，原來藥廠好多文件中已經(jīng)包含了許多污染控制策略（CCS）要素 ，但沒有形成系統(tǒng)化的文件。要求藥廠了解微生物、顆粒以及熱原方面的來源和控制污染物的策略（CCS），污染控制策略（CCS）需要考慮的要素主要有：工廠和工藝的設(shè)計、廠房和設(shè)備、人員、公用系統(tǒng)、原輔料控制、產(chǎn)品容器和密封件、供應(yīng)商審批 、對于外包服務(wù)、工藝風(fēng)險評估、工藝驗證、預(yù)防性維護(hù)、清潔和消毒、日常監(jiān)測、糾正和預(yù)防措施（Corrective and Preventive Actions，縮寫為CAPA）、持續(xù)改進(jìn)等。

歐盟法規(guī)首次提出污染控制策略（CCS）的概念，并且給出具體需要考慮（CCS）的范圍，說明從法規(guī)監(jiān)管的角度來講，更多的無菌產(chǎn)品生產(chǎn)污染的控制需要全生命周期的管理，污染控制策略（CCS）是一個不斷更新動態(tài)的管理，污染控制策略（CCS）管理過程如圖1所示。第一步是：從項目的需求分析入手，從各維度識別污染的風(fēng)險；第二步：在已識別污染風(fēng)險的基礎(chǔ)上，在設(shè)計上考慮污染控制策略，并配套控制措施控制風(fēng)險；第三步：在無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中，按照設(shè)計好的污染控制策略進(jìn)行污染的控制應(yīng)對；第四步：根據(jù)先前制定的監(jiān)測頻率做好日常數(shù)據(jù)的監(jiān)測；第五步：根據(jù)歷史監(jiān)測數(shù)據(jù)的整理和分析，最終評價先前制定的污染控制策略的準(zhǔn)確性和適應(yīng)性，不合適的地方及時動態(tài)調(diào)整修正污染控制策略。

圖1 污染控制策略全生命周期管理Fig.1 Contamination control strategy lifecycle management

1.4 強(qiáng)化A級區(qū)和隔離器的定義

第四章“廠房”條款4.4中對于A級區(qū)的定義：“通過確保第一空氣保護(hù)進(jìn)行高風(fēng)險操作或無菌連接的關(guān)鍵區(qū)域（例如，無菌生產(chǎn)線、灌裝區(qū)、膠塞料斗、敞口安瓿瓶和西林瓶）。通常情況下，通過局部氣流保護(hù)提供這種條件，例如單向流操作臺、RABS 或隔離器。應(yīng)證明并確認(rèn)整個A級區(qū)的單向流維護(hù)狀態(tài)。應(yīng)通過廠房、設(shè)備、工藝和程序性設(shè)計盡量減少操作人員對A級區(qū)的直接干預(yù)（例如，沒有隔離屏障和手套箱技術(shù)的保護(hù)）”。這次法規(guī)中首次提出“First air”第一空氣的概念，也就是說對于A級區(qū)的空氣，要求經(jīng)過高效過濾后且在到達(dá)無菌關(guān)鍵區(qū)之前沒有被物體（例如操作工）中斷而不被污染的空氣，如圖2所示，氣流首先保護(hù)的是需要被保護(hù)的工作面，中間不能有阻擋，這對于制藥設(shè)備的結(jié)構(gòu)設(shè)計和藥廠驗證時的氣流煙霧實驗提出了很高的要求。

圖2 第一空氣示意Fig.2 First air

第四章“廠房”的“屏障技術(shù)”條款4.20 里提到“隔離器Isolator： 一種內(nèi)部工作區(qū)符合A級條件的凈化單元，提供其內(nèi)部環(huán)境與外部環(huán)境（例如周圍潔凈室空氣和人員）的無害的、連續(xù)的隔離”。隔離器Isolator可以分為兩種，封閉式隔離器和開放式隔離器。封閉式隔離器系統(tǒng)通過與輔助設(shè)備的無菌連接而不是對周圍環(huán)境開放來完成物料轉(zhuǎn)移，從而阻斷外部污染物進(jìn)入隔離器內(nèi)部，如圖3所示；開放式隔離器系統(tǒng)的設(shè)計允許操作過程中物料通過一個或多個開口連續(xù)或半連續(xù)進(jìn)出，開口從工程學(xué)上（如使用連續(xù)過壓）阻斷外部污染進(jìn)入隔離器，如圖4所示。

圖3 封閉式隔離器Fig.3 Closed isolator

圖4 開放式隔離器Fig.4 Open isolator

1.5 潔凈室和凈化設(shè)備確認(rèn)

第四章“廠房”的“潔凈室和凈化設(shè)備確認(rèn)”條款4.29中提到，與前版一樣，同樣是參考ISO 14644的標(biāo)準(zhǔn)，考慮了0.5 μm和5 μm 粒子的監(jiān)測：“對于潔凈室和凈化設(shè)備的分類，應(yīng)測量大于或等于0.5 μm和5 μm的懸浮粒子，對于A級和靜態(tài)B級，分級時應(yīng)包括測量大于或等于0.5 μm 以上的粒子，然而，可以考慮監(jiān)測更大的粒子，如：根據(jù)ISO 14644 定義的1 μm的粒子，該監(jiān)測須在靜態(tài)和動態(tài)下分別進(jìn)行”。這個變化反映了此新版法規(guī)與全球其他主要法規(guī)全面對接，特別是ISO 14644-1[2]和FDA法規(guī)。

這次歐盟GMP 附錄1 草案變動比較大的是，不管是非活性微生物還是活性微生物，把潔凈室和凈化設(shè)備的分級標(biāo)準(zhǔn)和日常監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)分開，原來2008版的附錄1 定級和日常監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)是一樣的。這次版本的定級標(biāo)準(zhǔn)在第四章廠房中體現(xiàn)，日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)在第九章活性微生物和非活性微生物的環(huán)境和工藝監(jiān)測中體現(xiàn)。

為了便于對比，把兩張表格放在一起，表1所示為非活性微生物的分級和日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)，表2所示為活性微生物的分級和日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)。

在現(xiàn)行版的GMP中并沒有要求在潔凈室分級時進(jìn)行微生物監(jiān)測，而僅要求在動態(tài)環(huán)境監(jiān)測中進(jìn)行。而在2020版的GMP 草案中明確了在潔凈室分級時也需要進(jìn)行靜態(tài)和動態(tài)的微生物檢測，包括浮游菌，沉降菌和表面取樣。如表2所示，對于活性微生物，分級和日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)別在于分級不需要監(jiān)測手套印。這版草案變動最大是A級區(qū)的活性微生物標(biāo)準(zhǔn)是“無生長”，這個標(biāo)準(zhǔn)是大大提高了，活性微生物不允許有，任何活性微生物的生長都必須觸發(fā)調(diào)查，原來的2008版附錄1和中國GMP 2010版附錄1的標(biāo)準(zhǔn)是小于1，如表3所示。

表1 非活性微生物的分級和日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Classification and daily monitoring standards of non-active microorganism

表2 活性微生物的分級和日常監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Classification and daily monitoring standards of active microorganism

表3 活性微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn) [4-5]Tab.3 Active microorganism action limits for viable monitoring

1.6 熔封產(chǎn)品的完整性測試

第八章“生產(chǎn)和特定技術(shù)”的“無菌產(chǎn)品最終處理”條款8.21中提到“應(yīng)采用經(jīng)過驗證的適當(dāng)方法完成容器的密封。對熔封容器應(yīng)進(jìn)行 100%完整性測試，如吹-灌-封（BFS）、成型-灌-封（FFS）、小容量注射用（SVP）&大容量注射用（LVP）軟袋、玻璃安瓿瓶或是塑料安瓿瓶?！痹瓉淼臍W盟GMP 附錄1 對于熔封產(chǎn)品的定義僅限于玻璃安瓿瓶和塑料安瓿瓶，而這一版的范圍除了玻璃安瓿瓶和塑料安瓿瓶外，還包括軟袋大輸液，這個條款對于現(xiàn)有的軟袋大輸液生產(chǎn)廠家來講影響很大，需要改造現(xiàn)有的生產(chǎn)線。目前100%在線自動無損檢測方法主要有：頂空氣體分析法、壓力衰減法（正壓、負(fù)壓）、高壓放電法等，圖5為高壓放電法在線對塑料安瓿瓶檢漏。

圖5 高壓放電檢漏Fig.5 High voltage leak detection

1.7 液體過濾器的完整性測試

第八章“生產(chǎn)和特定技術(shù)”的“非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌”條款8.88中提到“滅菌后的過濾器組件的完整性應(yīng)在使用前通過完整性測試進(jìn)行驗證，以檢查由于過濾器使用前的準(zhǔn)備造成的完整性破壞或降低。用于進(jìn)行液體除菌的除菌級濾器應(yīng)當(dāng)在使用后進(jìn)行無損完整性測試，隨后再將濾器從濾殼中取出?！?滅菌后使用前的完整性測試（PUPSIT）要求非常高，現(xiàn)行2008版歐盟GMP 對于液體過濾器的完整性檢測要求為使用前和使用后檢測，現(xiàn)在改為滅菌后使用前和使用后檢測，給實際操作帶來了難度，滅菌后的系統(tǒng)是無菌的，需要考慮在過濾器的完整性檢測時必須污染過濾器系統(tǒng)，原來可以考慮使用前先檢測過濾器的完整性，檢測合格后系統(tǒng)再滅菌，新的草案要求是滅菌后檢測，現(xiàn)有的液體過濾器完整性檢測方法必須調(diào)整，避免完整性檢測時造成二次污染，這也是污染控制策略CCS 需要考慮的重點(diǎn)要素。

2 對國內(nèi)無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的影響

這次2020版歐盟GMP 附錄1 草案相比以往改動非常大，附錄1所指“無菌”的范圍從“無菌藥品”放大到“無菌產(chǎn)品”，監(jiān)管的范圍變大，涵蓋了無菌原料、輔料、內(nèi)包裝材料以及最終成品制劑。引入或強(qiáng)化了很多新概念，如質(zhì)量風(fēng)險管理（QMS）、污染控制策略（CCS）等。污染控制策略（CCS）被定義為一個多元素、正式記錄的文件，并且在無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中進(jìn)行全生命周期的管理，不斷糾正和更 新。

不管是非活性微生物還是活性微生物，把定級和日常監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)分開設(shè)定。并且，對于確效時A級區(qū)的活性微生物濃度測試的限度為“無生長“，而現(xiàn)行GMP中規(guī)定為每單位＜1 cfu，也就是我們經(jīng)常講的小于四個“1”。2017版草案規(guī)定為每單位1 cfu并進(jìn)行備注A級區(qū)應(yīng)當(dāng)不能有任何微生物回收。此次的“無生長”描述更加清晰，能夠避免歧義。不難發(fā)現(xiàn)，2020版的歐盟GMP 附錄1的草案已經(jīng)反映了全球監(jiān)管趨勢。在環(huán)境監(jiān)測方面，著重強(qiáng)調(diào)了無菌生產(chǎn)企業(yè)的污染控制策略（CCS）要基于科學(xué)依據(jù)和可靠的歷史數(shù)據(jù)分析，采用的方法要基于風(fēng)險評估。隨著此次草案的發(fā)布，國內(nèi)的制藥企業(yè)如果能夠通過掌握適當(dāng)?shù)臒o菌工藝知識和風(fēng)險評估工具，并通過有效的數(shù)據(jù)分析軟件和方法 ，對采樣數(shù)據(jù)進(jìn)行持續(xù)有效的評估和分析，能夠改善環(huán)境監(jiān)測的警戒限和行動限，找到污染發(fā)生的根本原因。

熔封容器應(yīng)進(jìn)行100%完整性測試，這次法規(guī)中明確規(guī)定玻璃安瓿瓶、塑料安瓿瓶、軟袋大輸液等必須進(jìn)行100%完整性檢測。這條對于國內(nèi)藥廠的影響很大，原來軟袋大輸液不在100%檢漏的范圍，這次法規(guī)寫的非常清楚，對于軟袋輸液的生產(chǎn)藥企來講，需要改造現(xiàn)有的工藝、設(shè)施設(shè)備。另外，《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量與療效一致性評價技術(shù)要求》中提到的容器的密閉性完整性檢測需要做全生命周期的管理，“包裝系統(tǒng)密封性驗證，方法需經(jīng)適當(dāng)?shù)尿炞C”、“穩(wěn)定性考察初期和末期進(jìn)行無菌檢查，其他時間點(diǎn)可采用容器密封性替代。容器密封性可采用物理完整性方法（例如壓力/真空衰減等）進(jìn)行檢測，并進(jìn)行方法學(xué)驗證”[6]。

整體看下來，對于無菌產(chǎn)品法規(guī)監(jiān)管的要求越來越嚴(yán)，法規(guī)條款的描述越來越細(xì)，很多的條款類似于操作指南，直接給出了非常具體的范圍和要求。從該法規(guī)看無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的發(fā)展趨勢，主要是兩個方向：一是自動化，二是隔離化。

自動化，草案中第八章“生產(chǎn)和特定技術(shù)”的“無菌制備和處理”條款8.10 提到“可采取機(jī)器人技術(shù)和自動化過程以消除直接的人員重要干擾”和“手動進(jìn)料和出料的凍干機(jī)通常應(yīng)在每次進(jìn)料前進(jìn)行滅菌。對于通過自動密閉系統(tǒng)進(jìn)出料的凍干機(jī)或系統(tǒng)可以排除操作員干擾的凍干機(jī)，其滅菌頻率可以合理說明并在污染控制策略（CCS）中記錄?！庇捎谌耸菬o菌產(chǎn)品最大的污染源，無菌室污染原因80%以上都是由于人員造成的，因此從法規(guī)的角度來看，推薦使用自動化的設(shè)備來減少人的污染風(fēng)險，并且可以防止人為出錯。手動操作帶來很多不確定性因素，造成污染的幾率大，需要匹配污染控制策略。

隔離化，草案中第八章“生產(chǎn)和特定技術(shù)”的“無菌制備和處理”條款8.10 提到“應(yīng)盡可能采用 RABS，隔離器或是其他系統(tǒng)這樣的設(shè)備，以減少對 A級區(qū)的重要干擾并盡可能降低污染風(fēng)險。”隔離屏障系統(tǒng)是在產(chǎn)品和人員之間加個隔離屏障系統(tǒng)，把人和產(chǎn)品隔離開，對于無菌產(chǎn)品來講，可以避免人員對產(chǎn)品造成的污染；對于有毒性或者高致敏性產(chǎn)品來講，在保證藥品無菌性的同時還要保護(hù)人員的安全性。因此，隔離化能防止人和產(chǎn)品之間的污染和交叉污染[7]。

3 結(jié)束語

我國現(xiàn)行的2010版GMP 附錄1 無菌藥品基本等同于歐盟2008版GMP 附錄1，這次歐盟GMP 附錄1的修訂是聯(lián)合WHO和PICS 等組織一同修訂的，中國已經(jīng)加入ICH 組織，相信歐盟GMP 附錄1 正式出臺生效后，中國藥監(jiān)部門也會啟動國內(nèi)GMP 附錄1的修訂工作。通過對2020版歐盟GMP 附錄1 草案的學(xué)習(xí)解讀，有助于我們預(yù)判國際法規(guī)監(jiān)管趨勢，提前做好準(zhǔn)備，從而優(yōu)化無菌產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，提高藥品質(zhì)量。