韓秀敏 李廷 李德輝

據(jù)相關數(shù)據(jù)統(tǒng)計，弱視兒童發(fā)病率為3%左右[1]。其致病機制較為復雜，且尚未完全清楚。炎性因子是細胞中較為重要的生物大分子活性蛋白，可調(diào)控多種疾病的病理過程，研究報道，炎性因子在眼部疾病的發(fā)病過程中也有著重要意義[2,3]。目前治療兒童弱視常采用西醫(yī)治療，但是達不到理想效果。熱敏灸是臨床上常用的中醫(yī)治療方法，在消化系統(tǒng)及骨科疾病中廣泛應用，通過燃著的艾材所產(chǎn)生的艾熱作用對穴位作用來發(fā)揮治療的作用，具有生肌去腐、化瘀消腫、活血止痛的功效，可促進局部組織新陳代謝，加快血液循環(huán)[4,5]。本研究探討熱敏灸對弱視患兒淚液中VEGF及C-Fos、CREB蛋白表達水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年11月至2018年10月青島市婦女兒童醫(yī)院眼科收治的92例弱視兒童作為研究對象，按照治療方式不同分觀察組和對照組，每組46例。觀察組：男22例，女24例；年齡5～8歲，平均年齡(5.14±1.23)歲。對照組：男23例，女23例；年齡4～7歲，平均年齡(5.16±1.01)歲。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標準 納入標準：(1)患兒經(jīng)相關檢查確診為弱視，且符合西醫(yī)診斷標準[5]；(2)神經(jīng)發(fā)育完善者；(3)患者以及家屬簽署知情同意書。排除標準：(1)眼部發(fā)生器質(zhì)性病變者；(2)有手術史。

1.3 治療方法 對照組：采取傳統(tǒng)西醫(yī)治療，給予患兒光柵、紅光閃爍、后像及光刷，1次/d，30 min/次，持續(xù)治療10 d。觀察組：傳統(tǒng)西醫(yī)治療+熱敏灸。采取雙側(cè)風池穴熱敏灸治療，風池穴區(qū)附近熱敏探查，回旋灸施行于距離皮膚3 cm左右。熱敏風池穴施灸需每位患兒家屬掌握，可進行相關培訓，1次/d，20～40 min/次，持續(xù)治療20 d。

1.4 觀察指標 分析縫隙連接蛋白(Cx)45、43及30蛋白水平、蛋白激酶A(PKA)、CREB、腦源性神經(jīng)生長因子( BNDF)、降鈣素基因相關肽(CGRP)、C-Fos、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素(IL1-β、IL-6和IL-9)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)。Elab Sciences公司提供CGRP試劑盒；Abcam公司提供Cx45試劑盒；R&D公司提供PKA試劑盒；Sigma公司提供TGF-β試劑盒；Abcam公司提供CREB和BNDF試劑盒；南京建成生物工程研究所提供iNOS試劑盒；羅氏公司提供VEGF試劑盒；武漢博士德生物工程有限公司提供C-Fos和白細胞介素試劑盒；Cx43：試劑盒由R&D公司提供；Cx30：試劑盒由Omega公司提供。檢測所有蛋白，采取酶聯(lián)免疫吸附法，β-actin蛋白水平作為參照。

1.5 療效標準 臨床療效[6]可分為治愈、有效和無效。治愈：矯正視力≥0.9；無效：矯正視力退步、不變后提高1行；有效：矯正視力提高≥2行。

2 結果

2.1 2組患兒臨床療效比較 觀察組治愈率41.30%和有效率58.70%明顯高于對照組的21.74%和47.83%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患兒臨床療效比較 n=46，例(%)

2.2 2組患兒治療前后PKA、BNDF和CREB蛋白水平比較 2組治療前PKA、CREB和BNDF蛋白水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后觀察組PKA、CREB水平下降程度高于對照組，BNDF水平上升程度高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

組別PKA/β-actin治療前治療后CREB/β-actin治療前治療后BNDF/β-actin治療前治療后對照組0.50±0.920.42±0.09*0.28±0.080.34±0.09*0.49±0.070.42±0.08*觀察組0.50±0.930.38±0.07*#0.28±0.070.40±0.08*#0.49±0.090.38±0.04*#t值<0.0012.379<0.0013.380<0.0013.033P值1.0000.0201.000<0.0011.0000.003

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.3 2組患兒治療前后C-Fos、iNOS和CGRP水平比較 2組治療前C-Fos、iNOS和CGRP水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后觀察組C-Fos、iNOS和CGRP水平下降程度高于對照組(P<0.05)。見表3。

組別CGRP/β-actin 治療前治療后C-Fos/β-actin 治療前治療后iNOS/β-actin 治療前治療后對照組0.42±0.080.37±0.10*0.37±0.070.32±0.06*0.40±0.070.32±0.06*觀察組0.42±0.070.29±0.06*#0.37±0.080.28±0.04*#0.40±0.090.28±0.06*#t值<0.0014.653<0.0013.762<0.0013.197P值1.000<0.0011.0000.0031.0000.002

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.4 2組患兒治療前后VEGF和TGF-β水平比較 治療前2組VEGF和TGF-β水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后2組VEGF和TGF-β水平明顯低于治療前，且對照組VEGF和TGF-β水平下降程度低于觀察組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

組別TGF-β/β-actin治療前治療后VEGF/β-actin治療前治療后對照組0.46±0.060.41±0.05*0.50±0.070.43±0.06*觀察組0.46±0.070.37±0.04*#0.50±0.080.38±0.06*#t值<0.0014.237<0.0013.997P值1.000<0.0011.000<0.001

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.5 2組患兒治療前后IL1-β、IL-9和IL-6比較 2組治療前IL1-β、IL-9和IL-6比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后對照組白介素水平下降程度低于觀察組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表5。

組別IL-9/β-actin 治療前治療后IL-6/β-actin治療前治療后IL1-β/β-actin治療前治療后對照組0.40±0.040.35±0.06*0.52±0.090.47±0.08*0.48±0.060.41±0.07*觀察組0.40±0.080.31±0.03*#0.52±0.100.41±0.08*#0.48±0.080.36±0.05*#t值<0.0014.0444.0443.597<0.0013.942P值1.000<0.001<0.0010.0011.000<0.001

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.6 2組患兒治療前后Cx45、Cx43及 Cx30蛋白比較 治療前2組Cx45、Cx43及 Cx30蛋白比較無差異(P>0.05)；治療后2組Cx45、Cx43及 Cx30蛋白明顯高于治療前，且對照組Cx45、Cx43及 Cx30蛋白水平上升程度低于觀察組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表6。

組別Cx45/β-actin 治療前治療后Cx43/β-actin治療前治療后Cx30/β-actin治療前治療后對照組0.35±0.070.39±0.09*0.30±0.060.38±0.06*0.43±0.050.48±0.09*觀察組0.35±0.100.47±0.08*#0.30±0.070.42±0.07*#0.43±0.080.53±0.10*#t值<0.0014.506<0.0012.943<0.0012.521P值1.000<0.0011.0000.0041.0000.014

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

3 討論

弱視作為影響患兒視功能的一種疾病，其發(fā)病與單眼斜視、屈光參差和高度屈光不正等有關。一般弱視兒童單眼或雙眼最佳矯正視力比相應年齡正常兒童低[7]。資料顯示，弱視患兒可出現(xiàn)異常視覺傳導系統(tǒng)功能，可能與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞到視力中樞的過程受阻有關[8，9]。

熱敏灸針對弱視兒童發(fā)病機制，借助溫熱性刺激和經(jīng)絡腧穴治療。屬足少陽膽經(jīng)風池穴為常用腧穴，可用來治療眼疾。風池穴針灸可使眼部血液循環(huán)明顯改善，大腦皮層興奮性明顯改變，視覺細胞興奮刺激，可滋養(yǎng)視網(wǎng)膜和視神經(jīng)，視覺細胞和視路抑制消除，視路改善和激活，傳導視覺細胞，眼球發(fā)育、視覺和屈光正?；暳μ岣?，雙眼單視功能恢復[10]。本研究弱視兒童采用熱敏灸聯(lián)合西醫(yī)治療，結果顯示觀察組治愈率41.30%和有效率58.70%明顯高于對照組的治愈率21.74%和有效率47.83%。說明熱敏灸治療弱視兒童具有較好治療效果。

視覺可塑性重要作用主要在于神經(jīng)營養(yǎng)因子和N-甲基-D-天冬氨酸受體。CREB可能參與了視覺可塑性過程，原因在于信號傳導通路的下游靶分子CREB在神經(jīng)元生存和分化中起關鍵調(diào)節(jié)作用[11]。有研究報道，分布于全身各個組織器官的縫隙連接蛋白可協(xié)調(diào)細胞間代謝和功能，縫隙連接蛋白可表達于視網(wǎng)膜各層[12]。視皮質(zhì)神經(jīng)元發(fā)育可塑性的程度可被視皮質(zhì)神經(jīng)元興奮標志C-Fos蛋白表達水平反映。本研究結果中，熱敏灸治療后BNDF水平明顯上升，且PKA、CREB、CGRP、C-Fos、iNOS、VEGF、TGF-β、IL1-β、IL-6和IL-9水平下降程度高于對照組，BNDF、Cx45、Cx43及 Cx30蛋白水平上升程度高于對照組。提示弱視兒童采用熱敏灸具有明顯治療效果，其可能與C-Fos和CREB 蛋白被調(diào)控表達有關。

常見炎性因子白細胞介素為藥物干預治療的重要參考標志物，其表達水平在一定程度上可反映眼部疾病嚴重程度[13]。本研究結果中，熱敏灸組治療后IL1-β、IL-6和IL-9明顯低于治療前，且IL1-β、IL-6和IL-9水平下降程度高于西醫(yī)治療組。提示熱敏灸治療弱視兒童與白介素IL1-β、IL-6和IL-9蛋白水平被調(diào)控有關。多種眼部疾病發(fā)病的重要原因在于VEGF，研究發(fā)現(xiàn)，病理性近視脈絡膜血管新生的病理過程有VEGF蛋白表達異常參與其中[13]。糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者行抗VEGF 注射治療聯(lián)合玻璃體切割術可明顯促進視網(wǎng)膜的恢復[14]。本研究結果中，觀察組治療后VEGF水平明顯低于治療前，且VEGF水平下降程度高于對照組。熱敏灸治療弱視兒童與VEGF 蛋白水平被調(diào)控表達有關。本研究結果中，觀察組治療后iNOS水平明顯下降，且iNOS水平下降程度高于對照組。表明熱敏灸治療弱視兒童與熱敏灸治療弱視兒童與VEGF 蛋白水平被調(diào)控表達有關蛋白水平被調(diào)控表達有關。

綜上所述，熱敏灸治療弱視兒童具有較好治療效果，可能與VEGF及C-Fos、CREB蛋白表達水平被調(diào)控有關。