何宗桃 肖成忠 鄧軍?

摘 要：應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）建立了啶蟲脒、吡蟲啉、甲霜靈、多效唑和氯蟲苯甲酰胺5種農(nóng)藥在青錢柳茶中的殘留分析方法。樣品用乙腈勻漿提取，Carbon/NH2小柱凈化，UPLC-MS/MS檢測，外標(biāo)法（ESTD）定量。在0.005～0.500 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，5種農(nóng)藥的儀器響應(yīng)值與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系（線性回歸系數(shù)R>0.99）;在3個添加水平下（0.01、0.05和0.10 mg/kg）的平均回收率為79.3%～102.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為1.18%～9.28%，定量限為0.1～0.5 μg/kg。該方法簡便快速、靈敏度高、重復(fù)性好，適用于檢測青錢柳茶中5種農(nóng)藥的殘留量。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;青錢柳茶;農(nóng)藥殘留

中圖分類號：S481.8文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1006-060X（2020）05-0072-03

Determination of 5 kinds of Pesticide Residues in Cyclocarya paliurus Drink by UPLC-MS/MS

HE Zong-tao，XIAO Cheng-zhong，DENG Jun

（Zhangjiajie Inspection and Testing Center for Agro-Products Quality Safety， Zhangjiajie 427000， PRC）

Abstract： An analytical method using ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS） was adopted for the analysis of 5 kinds of pesticide residues i.e. acetamiprid， imidacloprid， metalaxyl， paclobutrazol， chlorantraniliprole in Cyclocarya paliurus tea-like drink.? Samples were extracted by acetonitrile， and cleaned up with Carbon/NH2， external standard method was used for the quantitative determination. The instrumental response values of these 5 kinds of pesticide residues satisfied a good linear relationship （R>0.99） in the mass concentration range of 0.005～0.5 mg/L.The average recoveries obtained from 3 spiked concentrations （0.01， 0.05 and 0.10 mg/kg） were 79.3%～102.6% with relative standard deviations （RSDs， n=5） ranging from 1.18% to 9.28%. The limits of quantitation were from 0.1 to 0.5 μg /kg.This method is characterized by simple and rapid sample processing， high sensitivity and good repeatability， which is suitable for the detection of these 5 kinds of pesticide residues in Cyclocarya paliurus tea-like drink.

Key words： UPLC- MS/MS; Cyclocarya paliurus; pesticide residues

青錢柳（Cyclocarya paliurus）別名搖錢樹、甜茶樹、青錢李等，為我國特有植物，是冰川時代幸存下來的孑遺樹種，被稱為“植物界的大熊貓”，屬于國家二級保護(hù)植物[1]。2013年，原國家衛(wèi)生和計劃生育委員會批準(zhǔn)青錢柳葉為新食品原料。自此，張家界市開始采用人工培育方式大力發(fā)展青錢柳種植，以其嫩葉為原料，經(jīng)茶炒制成青錢柳茶[2]。青錢柳茶含有豐富的多糖類、黃酮類、三萜類化合物，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗氧化、抗腫瘤等效果[3]。目前，關(guān)于青錢柳的研究主要集中在有效成分及其作用方面[4-7]，未見關(guān)于青錢柳農(nóng)殘檢測方面的報道，也尚未出臺青錢柳茶中農(nóng)藥最大殘留限量的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。該研究針對啶蟲脒、吡蟲啉、甲霜靈、多效唑、氯蟲苯甲酰胺5種常見農(nóng)藥，分析了其在青錢柳茶中的基質(zhì)效應(yīng)和檢測方法，以期為青錢柳茶企業(yè)生產(chǎn)過程質(zhì)量控制和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全質(zhì)檢機(jī)構(gòu)檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試青錢柳茶由張家界高手怡韻茶業(yè)有限公司提供。主要試劑：啶蟲脒、吡蟲啉、甲霜靈、多效唑、氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)品（環(huán)境保護(hù)部標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所）100 mg/L，乙腈、甲醇、甲苯（色譜級）。主要儀器與設(shè)備：超高效液相色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（Waters UPLC-Xevo TQD，Maslynx，ESI源，C18柱2.1 mm ×100 mm，1.7 μm）、TG20M高速離心機(jī)、RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、TP2200電子天平、FA25高速組織搗碎機(jī)、Carbon/NH2小柱（Aglilent， 500/500 mg，6 mL）、微孔濾膜（尼龍，13 mm×0.2 μm）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品配置 （1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配置：取1個5 mL容量瓶，將濃度為100 mg/L的5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇定容配置成10 mg/L的混合儲備液。（2）標(biāo)準(zhǔn)工作液配置：將混合儲備液采用逐級稀釋法分別用甲醇和基質(zhì)液配置成濃度為5、10、50、100、500 μg/L的溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.2 基質(zhì)效應(yīng)分析 （1）基質(zhì)效應(yīng)的計算。液相色譜-質(zhì)譜法檢測農(nóng)藥殘留時普遍存在基質(zhì)效應(yīng)[8-10]。該研究采用相對響應(yīng)值法對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評價，公式為ME（%）=（A/B）×100%，式中：ME為基質(zhì)效應(yīng)，A為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液響應(yīng)值，B為甲醇中同濃度標(biāo)樣工作液響應(yīng)值。（2）基質(zhì)效應(yīng)的評價。當(dāng)ME為80%～120%時為弱基質(zhì)效應(yīng);當(dāng)ME為50%～80%或120%～150%時為中等基質(zhì)效應(yīng);當(dāng)ME≤50%或≥150%時為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng);當(dāng)ME<100%時表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，當(dāng)ME>100%時表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

1.2.3 樣品處理 （1）預(yù)處理。將青錢柳茶樣品放入粉碎機(jī)中粉碎，過425 μm網(wǎng)篩并混勻。（2）前處理。準(zhǔn)確稱取10.00 g已處理好的青錢柳茶樣品于100 mL離心管中，加入20 mL乙腈，在高速組織搗碎機(jī)上以15 000 r/min勻漿提取1 min，4 200 r/min離心5 min，移取5 mL上清液（相當(dāng)于2.5 g樣品）于已預(yù)淋洗的Carbon/NH2柱上，用15 mL乙腈與甲苯混合溶液（體積比為3∶1）分3次洗脫凈化柱，收集全部濾液于雞心瓶中，45℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，用甲醇定容至2 mL，過0.22 μm微孔濾膜后待測。

1.2.4 色譜條件 色譜柱：C18柱;柱溫：40℃，流動相A：甲醇;流動相B：水;流速：0.25 mL/min;進(jìn)樣體積：1 μL;洗脫條件見表1。

1.2.5 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源：ESI+;毛細(xì)管電壓：3.0 kV;離子源溫度：110℃;脫溶劑氣溫度：500℃;錐孔氣流量：50 L/h;脫溶劑氣流量：900 L/h;多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）;采用手動調(diào)諧方式，對錐孔電壓和碰撞能量進(jìn)行優(yōu)化。

1.2.6 方法驗證 （1）基質(zhì)標(biāo)的線性范圍：在試驗色譜-質(zhì)譜條件下，測定用青錢柳茶基質(zhì)配置的5、10、50、100、500 μg/L系列基質(zhì)混標(biāo)，以各種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，相對應(yīng)的定量離子對峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）方法的準(zhǔn)確性和可靠性：以青錢柳茶為材料，對5種農(nóng)藥進(jìn)行0.01、0.05、0.10 mg/kg這3個水平的添加回收試驗，每個水平5個重復(fù)，考察優(yōu)化后檢測分析方法的準(zhǔn)確性和可靠程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 分析條件優(yōu)化

在ESI+模式下，完善毛細(xì)管電壓、離子源溫度、錐孔氣流量、脫溶劑氣流量、脫溶劑氣溫度等參數(shù)，以全掃描（MS）模式確定母離子峰，以子離子掃描（MSMS）模式確定子離子，采用手動調(diào)諧方式，對錐孔電壓和碰撞能量進(jìn)行優(yōu)化。最后在多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式下對各項參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)到最佳監(jiān)測條件，最終確定質(zhì)譜參數(shù)，具體詳見表2。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)評價

5種農(nóng)藥在青錢柳茶中的基質(zhì)效應(yīng)均小于100%（見表3），按照1.2.2中的評價方法，啶蟲脒、吡蟲啉和甲霜靈的基質(zhì)效應(yīng)在56.7%～84.2%之間，屬于中等基質(zhì)抑制效應(yīng);多效唑和氯蟲苯甲酰胺的基質(zhì)效應(yīng)在28.4%～40.7%之間，屬于強(qiáng)基質(zhì)抑制效應(yīng)。需要采用基質(zhì)匹配標(biāo)液法補償基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.3 方法穩(wěn)定性驗證

2.3.1 基質(zhì)標(biāo)液的線性范圍 由表4可知，啶蟲脒、吡蟲啉、甲霜靈、多效唑和氯蟲苯甲酰胺5種農(nóng)藥的出峰時間分別為5.36、5.05、6.98、7.43和7.07 min;在0.005～0.500 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，5種農(nóng)藥的儀器響應(yīng)值與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系，回歸系數(shù)分別為0.999 8、0.999 5、0.996 5、0.998 1和0.996 9。

2.3.2 方法的回收率、精密度與定量限 由表5可知，5種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率在79.3%～102.6%之間，RSD在1.18%～9.28%之間，滿足青錢柳茶中5種農(nóng)藥殘留量的定性定量分析要求?？瞻讟悠?、基質(zhì)標(biāo)液和添加回收樣品色譜圖見圖1，色譜圖峰形良好，無雜質(zhì)干擾。按色譜峰信噪比（S/N）的10倍計算出各種農(nóng)藥在青錢柳茶中理論的定量限，再根據(jù)理論定量限進(jìn)行相適應(yīng)的添加回收率試驗，結(jié)果證實信噪比均大于10，其中，吡蟲啉、多效唑和氯蟲苯甲酰胺的定量限為0.5 μg/kg，啶蟲脒的定量限為0.2 μg/kg，甲霜靈的定量限為0.1 μg/kg。

3 結(jié)論與討論

研究建立了一種使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同時測定青錢柳茶中5種農(nóng)藥殘留量的分析方法，并對分析方法的穩(wěn)定性進(jìn)行了驗證。樣品用乙腈提取，Carbon/NH2小柱凈化，UPLC-MS/MS檢測。結(jié)果表明，在0.005～0.500 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，5種農(nóng)藥的儀器響應(yīng)值與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)（R）為0.996 5～0.999 8;當(dāng)5種農(nóng)藥的添加水平為0.01～0.1 mg/kg時，回收率在79.3%～102.6%之間，RSD在1.18%～9.28%之間;其中，吡蟲啉、多效唑和氯蟲苯甲酰胺的定量限為0.5 μg/kg，啶蟲脒的定量限為0.2 μg/kg，甲霜靈的定量限為0.1 μg/kg;符合農(nóng)藥殘留分析要求。該方法簡便快速、靈敏度高、重復(fù)性好，可廣泛應(yīng)用于檢測青錢柳茶中啶蟲脒、吡蟲啉、甲霜靈、多效唑、氯蟲苯甲酰胺5種農(nóng)藥的殘留量。

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（責(zé)任編輯：成 平）

收稿日期：2020-03-16

基金項目：張家界市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局科技培育項目（ZJJNY201909）

作者簡介：何宗桃（1984—），男，侗族，湖南芷江縣人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)藥殘留檢測、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和農(nóng)藥監(jiān)管等工作。