陳婷妍，周 洋

0引言

年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration,ARMD)是老年人失明最常見(jiàn)的原因，全球患病率為8%[1]。近三分之一的早期ARMD發(fā)展為新生血管性ARMD(nARMD)。衰老、遺傳、飲食、吸煙、肥胖和血管疾病都與ARMD的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[2]。轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)是一種關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，已被確定能夠激活抗氧化反應(yīng)[3]。正常生理情況下，Nrf2與Keap1蛋白存在于細(xì)胞質(zhì)中，處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)。當(dāng)受到氧化應(yīng)激因子等刺激后，Nrf2與Keap1迅速解離，并從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核，與抗氧化反應(yīng)元件(anti-oxidative response element,ARE)結(jié)合[4]。此外，最近的研究還發(fā)現(xiàn)，Nrf2信號(hào)傳導(dǎo)是抗氧化酶去除活性氧(reactive oxygen species,ROS)和其他有害物質(zhì)并保護(hù)身體免受氧化應(yīng)激所必需的關(guān)鍵途徑[5]。槲皮素(Quercetin)為殼斗科植物伊比利亞櫟的皮和葉中提取的苷類化合物，能夠抑制離體惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)、抑制癌細(xì)胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成[6]。同時(shí)還能抑制血小板聚集和5-羥色胺的釋放，對(duì)ADP、凝血酶和血小板活化因子誘導(dǎo)的血小板聚集均有明顯抑制作用。但槲皮素在年齡相關(guān)性黃斑變性治療方面研究甚少。本課題將研究槲皮素是否通過(guò)Nrf2/Keap1/ARE通路對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性小鼠具有保護(hù)作用，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為臨床上治療年齡相關(guān)性黃斑變性提供新的理論依據(jù)。

1材料和方法

1.1材料60只體質(zhì)量18～22g昆明小鼠購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，本研究經(jīng)過(guò)了我院的倫理審查。SOD試劑盒(批號(hào):CSB-E14981r)、GSH-Px試劑盒(批號(hào):CSB-E12146r)、CAT試劑盒(批號(hào):CSB-EL004563PL)、MDA試劑盒(批號(hào):CSB-E08588r)購(gòu)于美國(guó)CUSABIO公司。RIPA裂解液(批號(hào):R0020-100)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。多克隆抗體Nrf2(批號(hào):ab76026)、多克隆抗體Keap1(批號(hào):ab139729)、多克隆抗體LaminB1(批號(hào)：ab16048)、單克隆抗體HO-1(批號(hào):ab1894911)、單克隆抗體NQO-1(批號(hào):ab34173)、單克隆抗體GCL(批號(hào):ab207777)、單克隆抗體GAPDH(批號(hào):ab8245)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。山羊抗兔IgG二抗(批號(hào):2985S)和山羊抗鼠IgG二抗(批號(hào):5873S)購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。PVDF膜(批號(hào):IPVH08130)購(gòu)自Millipore公司。HE試劑盒(批號(hào):ZF-0328)購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。切片機(jī)RM2016(貨號(hào):20160032)購(gòu)自德國(guó)徠卡公司。多功能微孔板讀板機(jī) Molecular Devices(貨號(hào):SpectraMax iD5)購(gòu)自美國(guó)Molecular Devices公司。倒置生物顯微鏡(批號(hào):CKX53)購(gòu)自日本Olympus公司。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組與給藥將60只昆明小鼠在室溫(25℃±2℃)下保持12h黑暗/光照循環(huán)飼養(yǎng)。小鼠喂養(yǎng)適量的水和正常的飼料，并且在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前使小鼠適應(yīng)環(huán)境至少2wk。將小鼠分別隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、模型組和槲皮素組，每組20只。造模3d后，槲皮素組小鼠給予槲皮素200mg/(kg·d)灌胃治療30d，對(duì)照組和模型組則同步給予等體積生理鹽水，每天定點(diǎn)給小鼠灌胃。

1.2.2模型制作參照Sykes等[7]和Hansson[8]方法制作光損傷裝置。光照箱的上方安裝排風(fēng)孔，下方安裝排氣孔，并且在箱內(nèi)放置兩個(gè)有機(jī)玻璃透明箱，其體積為40cm×25cm×25cm。光照箱的每個(gè)面都安裝白色熒光燈管，且箱內(nèi)中心向各方向照度2000Lx，箱內(nèi)的溫度應(yīng)與動(dòng)物房間內(nèi)的溫度一致，控制在23℃～27℃。小鼠均在12h明(20～50Lx)和12h暗(0～12Lx)的循環(huán)光環(huán)境中適應(yīng)7d，在玻璃乙醚麻醉缸中逐只放入小鼠約3min進(jìn)行吸入麻醉，待小鼠麻醉后，縫線開(kāi)瞼。小鼠清醒后逐只進(jìn)入光照箱，接受12h持續(xù)光照射。光照結(jié)束后立即拆除開(kāi)瞼縫線，送回暗環(huán)境中。實(shí)驗(yàn)前預(yù)留出正常小鼠。在造模過(guò)程中，模型組死亡1只小鼠。造模結(jié)束后進(jìn)行眼底照相檢查：小鼠眼底出現(xiàn)大量黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)，說(shuō)明造模成功，可進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

1.2.3小鼠眼底檢查和OCT檢查小鼠用戊巴比妥鈉麻醉后，用Retina Imaging System給小鼠眼底照相。使用SD-OCT檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜厚度。

1.2.4 HE染色觀察小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)的改變?nèi)⌒∈笠暰W(wǎng)膜標(biāo)本，在4%多聚甲醛溶液中固定過(guò)夜。脫水后，石蠟包埋，切片，厚度為4μm，并在65℃下烘烤1h。接下來(lái)，將切片脫蠟并用蘇木精和曙紅染色。最后，在倒置顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)的改變情況。

1.2.5 FFA觀察小鼠眼底血管完整性小鼠麻醉后用復(fù)方托吡卡胺滴眼液進(jìn)行散瞳，腹腔注射熒光素溶液，在注射5min后定量熒光素滲漏斑點(diǎn)。

1.2.6小鼠視網(wǎng)膜電圖使用Espion視覺(jué)電生理系統(tǒng)記錄視網(wǎng)膜電圖。將小鼠暗適應(yīng)過(guò)夜，用強(qiáng)度為600(cd·s)/m2的Ganzfeld光刺激器通過(guò)閃光刺激引發(fā)視網(wǎng)膜電圖。記錄并分析雙眼中的a波和b波振幅。

1.2.7小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組小鼠眼球采血于離心管中，待凝固后，3000r/min，離心15min，分離血清，采用ELISA試劑盒測(cè)定各組小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量，ROS檢測(cè)采用Fenton反應(yīng)及Griess試劑顯色法測(cè)定。

1.2.8 Western blot檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜組織中Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白的表達(dá)取小鼠視網(wǎng)膜組織于離心管中，加入1mL制備好的RIPA裂解液提取蛋白，用BCA法測(cè)定總蛋白含量。取等量蛋白質(zhì)樣品上樣，SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白質(zhì)后轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂奶粉封閉1h，之后加入稀釋后的Nrf2、Keap1、LaminB、HO-1、NQO-1、GCL和GAPDH一抗，4℃搖床上孵育過(guò)夜。用TBST洗膜3次，每次10min，加入對(duì)應(yīng)于一抗種屬來(lái)源的HRP標(biāo)記的二抗，在室溫?fù)u床上孵育1h，用TBST洗膜3次，每次10min。使用ECL化學(xué)發(fā)光液顯色發(fā)光，凝膠成像系統(tǒng)拍照，Image Pro Plus圖像分析系統(tǒng)對(duì)蛋白條帶進(jìn)行分析。

圖1各組小鼠眼底照相及OCT檢查結(jié)果A：各組小鼠眼底照相結(jié)果，紅色箭頭指向黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)；B：各組小鼠OCT檢查結(jié)果。aP<0.05vs對(duì)照組，cP<0.05vs模型組。

計(jì)算機(jī)直接制版(Computer to Plate)最早是由照相直接制版發(fā)展而來(lái)的。所有制版設(shè)備都是采用計(jì)算機(jī)控制的激光掃描成像，然后通過(guò)顯影、定影等工序成印版。這一技術(shù)使文字、圖像轉(zhuǎn)變成數(shù)字，免去了膠片這一中間媒介，減少了中間過(guò)程的質(zhì)量損失和材料消耗。湖北省103個(gè)縣（市、區(qū)）地理國(guó)情普查掛圖采用計(jì)算機(jī)直接制版技術(shù)(CTP技術(shù))，有一下幾點(diǎn)關(guān)鍵技術(shù)：

2結(jié)果

2.1三組小鼠眼底及視網(wǎng)膜厚度的變化眼底照相結(jié)果顯示：對(duì)照組小鼠眼底未見(jiàn)黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)；模型組小鼠眼底出現(xiàn)大量黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)，說(shuō)明造模成功；槲皮素組小鼠眼底出現(xiàn)黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)，但較模型組明顯減少，見(jiàn)圖1A。OCT檢查結(jié)果顯示，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜厚度分別為319.23±12.34、234.46±11.23、300.56±12.12μm，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.082，P<0.05)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠視網(wǎng)膜厚度減少(P<0.05)；與模型組相比，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜厚度增加(P<0.05)，見(jiàn)圖1B。

2.2槲皮素對(duì)小鼠眼底血管完整性的影響FFA結(jié)果顯示：對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜血管滲漏點(diǎn)分別為4.34±0.98、28.56±1.45、17.78±1.23個(gè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=57.367，P<0.001)。對(duì)照組小鼠的視網(wǎng)膜血管無(wú)滲漏現(xiàn)象發(fā)生，與對(duì)照組相比，模型組小鼠的視網(wǎng)膜血管發(fā)生滲漏，可以看見(jiàn)明顯的滲漏點(diǎn)(P<0.001)；與模型組比較，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)生滲漏，但滲漏點(diǎn)較模型組明顯減少(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

2.3槲皮素對(duì)小鼠視網(wǎng)膜電圖的影響視網(wǎng)膜電圖結(jié)果顯示：對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠a波振幅、b波振幅差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.547，P<0.001；F=62.645，P<0.001)。與對(duì)照組比較，模型組小鼠a波振幅、b波振幅均顯著下降(P<0.001)；與模型組比較，槲皮素組小鼠a波振幅、b波振幅均明顯上升(P<0.01)，見(jiàn)圖3，表1。

2.4槲皮素對(duì)小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)改變的影響HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)壞死脫落現(xiàn)象；模型組小鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)不清晰，部分發(fā)生壞死脫落；槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)比較清晰，部分外核層發(fā)生壞死脫落，見(jiàn)圖4。

2.5槲皮素對(duì)小鼠血清中ROS、MDA含量的影響Griess試劑顯色法結(jié)果顯示，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠血清中ROS含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.563，P<0.01)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中ROS含量明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，槲皮素組小鼠血清中ROS含量降低(P<0.05)。ELISA結(jié)果顯示，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠血清中MDA含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=36.678，P<0.001)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中MDA含量明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，槲皮素組小鼠血清中MDA含量降低(P<0.01)，見(jiàn)圖5，表2。

圖2FFA檢查各組小鼠眼底血管完整性bP<0.001vs對(duì)照組，cP<0.05vs模型組。

圖3各組小鼠視網(wǎng)膜a波和b波振幅結(jié)果bP<0.001vs對(duì)照組，dP<0.01vs模型組。

圖4HE染色觀察各組小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)的改變(×100)A:對(duì)照組；B：模型組；C：槲皮素組。

組別na波b波對(duì)照組2098.34±1.87138.23±2.02模型組1918.56±1.01b43.67±1.45b槲皮素組2064.21±1.12d108.98±1.56d

注：bP<0.001vs對(duì)照組，dP<0.01vs模型組。

2.6槲皮素對(duì)小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性的影響ELISA結(jié)果顯示，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.457，P<0.01；F=59.487，P<0.001；F=57.452，P<0.001)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性均明顯下降(P<0.01)；與模型組相比，槲皮素組小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性提高(P<0.05，P<0.01，P<0.05)，見(jiàn)圖6和表3。

組別nROS(熒光強(qiáng)度)MDA(nmol/mL)對(duì)照組201502.56±28.5413.45±0.78模型組194001.75±35.67b29.78±0.99b槲皮素組202453.67±29.78c19.87±0.86d

注：bP<0.01與對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

2.7槲皮素對(duì)小鼠視網(wǎng)膜中Nrf2蛋白表達(dá)的影響Western blot結(jié)果表明，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜中Nrf2蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=56.023，P<0.001；F=58.459，P<0.001)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞質(zhì)中Nrf2蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.001)，細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.001)；與模型組相比，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞質(zhì)中Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.05)，見(jiàn)圖7和表4。

圖5各組小鼠血清中ROS、MDA含量的變化A：ROS；B：MDA。bP<0.01vs對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

圖6ELISA檢測(cè)各組小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性的表達(dá)A: SOD； B: GSH-Px； C:CAT。bP<0.01vs對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

圖7Western blot 檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中Nrf2蛋白表達(dá)情況A、C：各組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞質(zhì)中Nrf2蛋白表達(dá)情況；B、D：各組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)情況。bP<0.001vs對(duì)照組，cP<0.05vs模型組。

組別nSODGSH-PxCAT對(duì)照組2037.89±1.76112.56±1.3412.38±1.25模型組1919.04±1.45b53.67±0.89b5.97±1.02b槲皮素組2031.56±1.23c78.96±0.79d8.65±1.03c

注：bP<0.01vs對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

組別nNrf2/GAPDHNrf2/LaminB對(duì)照組200.61±0.130.53±0.09模型組190.28±0.07b0.79±0.07b槲皮素組200.43±0.06c0.63±0.05c

注：bP<0.001vs對(duì)照組，cP<0.05vs模型組。

2.8槲皮素對(duì)小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)的影響Western blot結(jié)果表明，對(duì)照組、模型組、槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=26.621，P<0.01；F=30.421，P<0.01；F=46.785，P<0.001；F=40.123，P<0.001)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)均上調(diào)(P<0.01)；與模型組相比，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)均下調(diào)(P<0.05，P<0.001，P<0.01)，見(jiàn)圖8和表5。

3討論

ARMD是一種復(fù)雜的神經(jīng)退行性疾病，導(dǎo)致老年人視力喪失。ARMD的發(fā)展是基于年齡相關(guān)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)和脈絡(luò)膜毛細(xì)血管的變化，但是從典型的年齡相關(guān)變化向病理過(guò)程的轉(zhuǎn)變的確切機(jī)制仍然知之甚少。ARMD的特征在于神經(jīng)元和光感受器的進(jìn)展性喪失，從而導(dǎo)致失明。視網(wǎng)膜細(xì)胞死亡受復(fù)雜機(jī)制控制，目前尚不清楚。這種狀況阻礙了ARMD有效治療的發(fā)展[9]。

圖8Western blot 檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中Keap-1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)情況bP<0.01vs對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

組別nKeap-1/GAPDHHO-1/GAPDHNQO-1/GAPDHGCL/GAPDH對(duì)照組200.29±0.130.45±0.170.25±0.120.19±0.06模型組190.56±0.14b0.75±0.14b0.58±0.13b0.40±0.09b槲皮素組200.36±0.98c0.61±0.160.32±0.08d0.27±0.07d

注：bP<0.01vs對(duì)照組；cP<0.05，dP<0.01vs模型組。

研究表明，Nrf2/Keap1/ARE信號(hào)通路是細(xì)胞中抗氧化應(yīng)激重要的信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn)，在正常情況下，Nrf2和Keap1結(jié)合在一起并存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)受到氧化應(yīng)激時(shí)，這種穩(wěn)態(tài)狀態(tài)被打破，Nrf2和Keap1形成的二聚體被打破，Nrf2和Keap1分離，Nrf2迅速?gòu)募?xì)胞漿進(jìn)入到細(xì)胞核，與ARE結(jié)合，啟動(dòng)其下游靶基因，調(diào)節(jié)SOD、GSH-Px、CAT、HO-1、NQO-1、GCL等的轉(zhuǎn)錄活性[10]。其中這些酶可降低血清中MDA含量，清除細(xì)胞內(nèi)ROS，從而發(fā)揮抗氧化作用，減輕氧化損傷，降低機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)[11]。氧化應(yīng)激能導(dǎo)致視網(wǎng)膜功能障礙和變性，與ARMD相關(guān)，減輕氧化應(yīng)激是認(rèn)為治療視網(wǎng)膜疾病有效的方法。

槲皮素又名槲皮黃素，是一種黃酮類化合物，其以苷的形式存在于大多數(shù)植物的花、葉、果實(shí)。研究證實(shí)，槲皮素具有抗炎、清除自由基、抗氧化、抑制新生血管生成等作用[12]。Xu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素磷脂復(fù)合物能使氧化損傷的視網(wǎng)膜色素細(xì)胞中Nrf2通路相關(guān)蛋白和其下游抗氧化酶及Ⅱ相代謝酶提高，從而發(fā)揮抗氧化作用，說(shuō)明槲皮素對(duì)于年齡相關(guān)性黃斑變性的治療具有潛在價(jià)值。在本實(shí)驗(yàn)室前期的實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)槲皮素對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性有一定的治療作用，其中當(dāng)槲皮素的劑量為200mg/kg作用效果最佳，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇此濃度。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們先進(jìn)行了眼底照相，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組小鼠眼底出現(xiàn)大量黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)且視網(wǎng)膜厚度減少，然而槲皮素可以減少小鼠眼底的黃白色似玻璃膜疣物質(zhì)減少且增加視網(wǎng)膜厚度，提示造模成功且槲皮素對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性有一定的治療作用。OCT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，模型組小鼠的視網(wǎng)膜血管發(fā)生明顯滲漏，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)生滲漏，但滲漏面積較模型組明顯減少。在小鼠視網(wǎng)膜電圖中我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，模型組小鼠a波振幅、b波振幅均顯著下降，與模型組比較，槲皮素組小鼠a波振幅、b波振幅均明顯上升。HE染色結(jié)果表明，對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)壞死脫落現(xiàn)象，模型組小鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)不清晰，部分發(fā)生壞死脫落，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)比較清晰，部分外核層發(fā)生壞死脫落。ELISA實(shí)驗(yàn)顯示，與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中ROS、MDA含量明顯增加，SOD、GSH-Px、CAT活性明顯下降，與模型組相比，槲皮素組小鼠血清中ROS、MDA含量降低，SOD、GSH-Px、CAT活性提高，提示槲皮素可以減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性有保護(hù)作用。進(jìn)一步探討了槲皮素對(duì)Nrf2/Keap1/ARE信號(hào)途徑的作用，結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，模型組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞質(zhì)中Nrf2蛋白表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)，與模型組相比，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞質(zhì)中Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)下調(diào)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)上調(diào)，與模型組相比，槲皮素組小鼠視網(wǎng)膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達(dá)下調(diào)。因此，槲皮素通過(guò)Nrf2/Keap1/ARE通路對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性具有保護(hù)作用。

綜上所述，槲皮素通過(guò)Nrf2/Keap1/ARE通路，改善視網(wǎng)膜光損傷后的氧化應(yīng)激狀態(tài)，保護(hù)視網(wǎng)膜功能，對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性具有保護(hù)作用。因此，槲皮素在年齡相關(guān)性黃斑變性的治療和預(yù)后方面帶來(lái)新的應(yīng)用。