張楚潔 劉慧萍 楊璐瑜 張思敏 張韞玉 張國民

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)方證研究轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室， 湖南 長沙410208）

歸脾湯首見于《濟(jì)生方》，為宋代嚴(yán)用和所著，用于治療思慮過度、勞傷心脾、健忘怔忡之癥，后由歷代名醫(yī)大家臨證實(shí)踐，不斷補(bǔ)充，添入當(dāng)歸、遠(yuǎn)志等藥材，治療范圍擴(kuò)展到心脾氣血兩虛、脾不統(tǒng)血、血不養(yǎng)心等證，現(xiàn)代亦可應(yīng)用于心腦血管、肝、胃、腫瘤、婦科等疾病。因此，研究歸脾湯傳統(tǒng)功效和現(xiàn)代藥理，并探究其有效成分之間的關(guān)聯(lián)性，有利于構(gòu)建該方與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之間的橋梁，更能促進(jìn)臨床推廣應(yīng)用。

目前，關(guān)于歸脾湯的計(jì)算機(jī)生物學(xué)研究活躍，通過應(yīng)用大量數(shù)據(jù)分析和基礎(chǔ)理論、大規(guī)模數(shù)學(xué)建模、計(jì)算機(jī)仿真技術(shù)等，對該方組方原理和規(guī)律、相關(guān)作用靶點(diǎn)生物序列的片段拼接及序列對接進(jìn)行分析，以尋求治療新病癥和藥物組合的新途徑。本文借助數(shù)據(jù)庫資料，收集挖掘歸脾湯傳統(tǒng)功效及其有效成分發(fā)揮藥效作用的關(guān)聯(lián)性，利用Cytoscape 軟件進(jìn)行分析；基于歸脾湯有效成分的類型和含有量，對歸脾湯臨床應(yīng)用進(jìn)行二次挖掘；根據(jù) “君、臣、佐、使” 原則對歸脾湯組成藥物進(jìn)行分類；采用GEO 數(shù)據(jù)庫在線分析工具CEO2R 進(jìn)行分析；應(yīng)用DAVID（http：／ ／david.abcc.ncifcrf.gov／） 數(shù)據(jù)庫中KEGG 篩選出相關(guān)信號通路；根據(jù)“疾病-藥物-有效成分-信號通路-靶點(diǎn)” 的網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)，利用Cytoscape 構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)分析其相互作用，對歸脾湯有效成分、主要功效及體內(nèi)作用過程中主要影響靶點(diǎn)進(jìn)行專業(yè)綜合地分析，將中藥傳統(tǒng)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)信息學(xué)研究相結(jié)合以加快中醫(yī)藥理論→驗(yàn)證→實(shí)踐進(jìn)程，為相關(guān)臨床應(yīng)用提供參考。

1 傳統(tǒng)功效及應(yīng)用

歸脾湯現(xiàn)由白術(shù)、茯神、黃芪、龍眼肉、酸棗仁、人參、木香、甘草、當(dāng)歸、遠(yuǎn)志10 味藥材組成，可用于心脾氣血兩虛證、脾不統(tǒng)血證。心藏神而生血，脾藏意而統(tǒng)血，思慮太過則兩臟受傷，心血虛而火動(dòng)，則心悸怔忡，健忘不安，夜寤不寐，脾不統(tǒng)血而血不歸經(jīng)，上下妄行，脾血不足，見倦怠嗜睡、面色萎黃，勞倦太過，損傷脾臟，氣機(jī)不暢，則見少食肢痛。方中黃芪味甘性溫，補(bǔ)脾益氣，而龍眼肉甘平，補(bǔ)脾氣，養(yǎng)心血，二者共為君藥；人參、白術(shù)皆為益氣補(bǔ)脾之要藥，與黃芪相伍可助益氣補(bǔ)脾之功；當(dāng)歸補(bǔ)血養(yǎng)心，酸棗仁寧心安神，二者與龍眼肉相伍時(shí)補(bǔ)心血、安神定志之力更強(qiáng)，均為臣藥；佐以茯神、遠(yuǎn)志，奏養(yǎng)心安神，交通心腎之效；更佐以木香，理氣醒脾，與諸補(bǔ)氣養(yǎng)血藥相伍，可使其補(bǔ)而不滯；炙甘草補(bǔ)益心脾之氣，并調(diào)和諸藥，用為佐使；引用生姜、大棗調(diào)和脾胃，以資化源，諸藥配伍，使心脾得補(bǔ)，氣血得養(yǎng)，諸癥自除。

2 有效成分及其現(xiàn)代藥理學(xué)

2.1 單味藥 以蒙古黃芪、龍眼肉、人參、白術(shù)、當(dāng)歸、酸棗 仁、茯 苓、茯 神、遠(yuǎn) 志、木 香、甘 草、炙 甘草、化學(xué)成分、藥理活性為中文檢索詞，Astragalus membranaceusvar.mongholicus、Longan Arillus、Panax、Atractylodes macrocephala、Angelica sinensis、Jujube Seed、Poria、Poria coco、Radix Polygala、Aucklandiae Radix、Glycyrrhizae、Zhigancao、Chemical Composition、Pharmacological Activity 為英文檢索 詞，在維普、CNKI、PubMed 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行文獻(xiàn)篩選。對獲得的文獻(xiàn)［1-22］及中國天然產(chǎn)物化學(xué)成分庫中數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出上述藥材所含具有生物、藥理活性的有效成分，見表1。

表1 單味藥有效成分的生物、藥理活性

2.2 全方 崔景朝等［23］對歸脾湯單煎、合煎后的藥理作用進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)兩者無明顯差異，毒性亦然。由于湯劑貯存時(shí)間短，攜帶不便，故結(jié)合現(xiàn)代科技多將其制成丸劑或超微顆粒［24］。歸脾湯單味藥有效成分或有效部位分別為黃芪中黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪多糖，龍眼肉中龍眼多糖、腺苷，人參中人參皂苷、人參多糖，白術(shù)中蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯、白術(shù)多糖，當(dāng)歸中藁本內(nèi)酯、阿魏酸、當(dāng)歸多糖、二氫山芹醇當(dāng)歸酸酯，酸棗仁中酸棗仁皂苷、酸棗仁黃酮、酸棗仁油，茯神中茯苓多糖、茯神總?cè)啤④蜍咚?，遠(yuǎn)志中遠(yuǎn)志皂苷、遠(yuǎn)志糖脂，木香中木香烴內(nèi)酯、菜薊苦素、去氫木香內(nèi)酯、木香堿，炙甘草中甘草次酸、甘草酸、甘草黃酮。根據(jù)該方主要臨床應(yīng)用，以及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中對其藥理作用的研究結(jié)果［1-22，25-45］，發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術(shù)多糖、阿魏酸、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠(yuǎn)志皂苷、木香烴內(nèi)酯、甘草酸是主要成分。本文對歸脾湯現(xiàn)代藥理學(xué)進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研后發(fā)現(xiàn)，該方對神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等均有影響［25-33］，見表2。

表2 歸脾湯現(xiàn)代藥理作用

3 傳統(tǒng)功效與現(xiàn)代藥理學(xué)的關(guān)聯(lián)性

3.1 脾氣虛與心血虛的機(jī)制 歸脾湯主要治療因久病、情志失常、勞傷心脾、損耗氣血導(dǎo)致的心脾氣血兩虛證，以及因脾虛日久、不能統(tǒng)攝血液、血行脈外的脾不統(tǒng)血證。脾旺則氣血生化有源，氣旺則血自生，心得所養(yǎng)［34］，故該方傳統(tǒng)功效的實(shí)質(zhì)是以健脾益氣、養(yǎng)心補(bǔ)血，健脾益氣為主。

3.1.1 脾氣虛《靈樞·本藏篇》有“脾堅(jiān)，則臟安難傷” 之說，脾為后天之本、氣血生化之源，脾旺可扶助正氣，維持人體健康。舒晴等［35］認(rèn)為，脾是人體對抗疾病的基礎(chǔ)，脾虛與T 淋巴細(xì)胞減少，淋巴細(xì)胞相關(guān)因子表達(dá)失常，酶母菌紅細(xì)胞C3b 受體花環(huán)率（RBC-C3b-RR） 及紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（RBC-IcRR） 降低，免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、補(bǔ)體（C3、C4）、分泌型IgA（SIgA）水平減少有關(guān)。

脾主運(yùn)化，將飲食水谷精微輸送全身，外養(yǎng)四肢百骸，內(nèi)養(yǎng)五臟六腑?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾氣虛證主要與消化系統(tǒng)功能失常、全身代謝障礙相關(guān)。李思琦等［36］研究表明，脾氣虛證與消化道黏膜損傷，結(jié)構(gòu)、運(yùn)動(dòng)異常，吸收功能障礙，胰酶活性降低，糖耐量降低，細(xì)胞線粒體功能異常，機(jī)體抗氧化能力降低相關(guān)。

3.1.2 心血虛《素問·靈蘭秘典論》云：“心者，君主之官也，神明出焉”。心能統(tǒng)帥協(xié)調(diào)人體生命活動(dòng)，主宰精神意識；心主血脈，可推動(dòng)全身血液運(yùn)行，若心血不足則失于濡養(yǎng)。扈新剛等［37］通過文獻(xiàn)調(diào)研認(rèn)為，情志與EPO、miR 191、Riok3、Mxi1 等變化有關(guān)，心血不足，心失所養(yǎng)，則情志、EPO 等變化異常。

3.2 關(guān)聯(lián)分析 本文根據(jù)前期研究資料，結(jié)合脾氣虛、心血虛相關(guān)機(jī)制考察，發(fā)現(xiàn)有效成分具有健脾益氣、養(yǎng)心補(bǔ)血的作用，并收集歸納有效數(shù)據(jù)［1-4，9-11，13-20］，見表3。

除了白術(shù)多糖、木香烴內(nèi)酯外，其他有效成分均增強(qiáng)SOD 活性；黃芪甲苷、人參皂苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖增加GSH 水平；黃芪甲苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖提高CAT 活性；黃芪甲苷上調(diào)VEGFR2 表達(dá)，與人參皂苷、木香烴內(nèi)酯調(diào)節(jié)VEGF 水平。以上成分共同作用，發(fā)揮補(bǔ)血功效。

黃芪甲苷、茯苓多糖增加ATP、ADP、cAMP 水平；黃芪甲苷上調(diào)GLUT3 表達(dá)；黃芪甲苷、人參皂苷、阿魏酸上調(diào)BDNF 水平；阿魏酸、酸棗仁皂苷抑制5-HT 釋放；阿魏酸抑制TXA2、FGFR1 生成；酸棗仁皂苷降低DA、NE 水平；茯苓多糖提高TXB2水平；遠(yuǎn)志皂苷抑制β-淀粉樣蛋白產(chǎn)生。以上成分通過各自作用機(jī)制，發(fā)揮養(yǎng)心安神功效。

黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠(yuǎn)志皂苷、甘草酸抑制MDA 生成；黃芪甲苷、龍眼多糖、白術(shù)多糖、茯苓多糖、遠(yuǎn)志皂苷、甘草酸調(diào)節(jié)NO水平；黃芪甲苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖增強(qiáng)AOC 能力；人參皂苷、阿魏酸抗血小板凝聚；黃芪甲苷、人參皂苷、茯苓多糖減少NF-κB 核轉(zhuǎn)位；阿魏酸降低LPO 水平。以上成分共同作用，發(fā)揮益氣活血功效。

茯苓多糖提高 IL-2、TFN-β 水 平，抑 制 HBsAg、HBeAg、IL-10 分泌，并調(diào)節(jié)Th1、Th2 比例；黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、甘草酸調(diào)節(jié)IL-1β 水平；黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術(shù)多糖調(diào)節(jié)TNF-α 水平；龍眼多糖刺激IL-6 分泌；龍眼多糖、人參皂苷、白術(shù)多糖、茯苓多糖刺激IFN-γ 分泌；人參皂苷降低IL-4 水平；人參皂苷降低組胺水平；龍眼多糖、人參皂苷、白術(shù)多糖增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬作用；白術(shù)多糖、茯苓多糖上調(diào)Bcl-2／Bax 比值；黃芪甲苷抑制MPO 活性，抑制JNK1／2 磷酸化。以上成分共同作用，發(fā)揮健脾功效。

此外，部分有效成分發(fā)揮其各自臨床作用。黃芪甲苷降低ICAM-1、AngⅡ、Ald 水平，與遠(yuǎn)志皂苷作用后減少ACE 表達(dá)；龍眼多糖提高NOS、LDH 活性，降低BUN、BLA 水平；人參皂苷降低TSLP 水平，抑制AchE 活性；白術(shù)多糖促進(jìn)細(xì)胞遷移；阿魏酸上調(diào)NGF 水平；茯苓多糖、甘草酸共同抗纖維化；茯苓多糖降低XOD 活性。

表3 有效成分與健脾益氣、養(yǎng)心補(bǔ)血中藥的關(guān)聯(lián)

4 有效成分組方結(jié)構(gòu)及歸類分析

歸脾湯中黃芪、龍眼肉補(bǔ)益心脾為君藥，人參、白術(shù)、當(dāng)歸、酸棗仁為臣藥，佐以茯神、遠(yuǎn)志、木香，炙甘草用為佐使。為了從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析并證明本方組方結(jié)構(gòu)的合理性，本文在 Scifinder 數(shù)據(jù)庫中 10 種有效成分［3，9-13，15，19，38-45］進(jìn)行查詢，并對其進(jìn)行信號通路和第二信使整合，見表4。

表4 有效成分組方結(jié)構(gòu)分析

雖然歸脾湯具有健脾益氣、養(yǎng)心補(bǔ)血的功效，但健脾養(yǎng)心當(dāng)先健脾，而益氣補(bǔ)血當(dāng)先益氣，故該方在臨床應(yīng)用中以健脾益氣為主。

對收集的作用靶點(diǎn)相關(guān)信息進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，歸脾湯中所有有效成分均可作用于NF-κB、NO 信號通路；黃芪甲苷作用的信號通路數(shù)目最多，并與其他有效成分作用的信號通路部分重合，范圍廣泛；人參皂苷、白術(shù)多糖、酸棗仁皂苷、阿魏酸除作用于上述2 條信號通路之外，其他作用的信號通路相互交叉重疊，互相協(xié)助發(fā)揮作用；除人參皂苷、白術(shù)多糖、茯苓多糖外，其他有效成分均可作用于MAPK 信號通路；黃芪甲苷、人參皂苷、白術(shù)多糖、甘草酸能影響消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)，從而發(fā)揮健脾補(bǔ)氣的作用。

人參、黃芪、白術(shù)、甘草為歸脾湯中主要健脾益氣補(bǔ)虛藥材，而龍眼肉、木香、當(dāng)歸、遠(yuǎn)志、酸棗仁、茯苓為輔藥，綜合黃芪甲苷、人參皂苷、白術(shù)多糖、甘草酸作用的信號通路發(fā)現(xiàn)，以上藥材均可共同作用于消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)。其中，黃芪中黃芪甲苷作用數(shù)目最多，范圍最廣，為君藥；人參、白術(shù)中人參皂苷、白術(shù)多糖作用范圍與數(shù)量相對較小，兩者信號通路與黃芪甲苷交錯(cuò)而共同發(fā)揮益氣補(bǔ)虛的作用，為臣藥；甘草中甘草酸作用信號通路范圍廣，發(fā)揮調(diào)和諸藥的作用，為使藥。

5 討論

中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床和傳承的重要組成部分，經(jīng)過數(shù)千年的臨床實(shí)踐、刪減更替，其療效得到廣泛肯定。如今隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，中醫(yī)藥現(xiàn)代化已成為必然趨勢，但如何做好依舊是一條漫長的道路，這不僅需要將古方系統(tǒng)整理歸納，總結(jié)其理、法、方、藥的規(guī)律，更需要將傳統(tǒng)中醫(yī)與現(xiàn)代西醫(yī)相聯(lián)系，探究中醫(yī)方劑與現(xiàn)代藥理學(xué)的關(guān)聯(lián)性。

本文通過對歸脾湯與現(xiàn)代藥理學(xué)的文獻(xiàn)調(diào)研，探究該方及其有效成分與現(xiàn)代藥理學(xué)的臨床關(guān)聯(lián)性，在復(fù)方、單味藥、有效成分、作用部位4個(gè)層次所獲得的的信息進(jìn)行深入挖掘，以探求其作用機(jī)理。

歸脾湯主治心脾氣血兩虛證、脾不統(tǒng)血證，其主要功效為健脾益氣、養(yǎng)心補(bǔ)血，以前者為主。本文經(jīng)過大量文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，歸脾湯主要通過黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術(shù)多糖、阿魏酸、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠(yuǎn)志皂苷、木香烴內(nèi)酯、甘草酸等有效成分之間的相互協(xié)調(diào)來發(fā)揮作用，提示該方與現(xiàn)代臨床藥理之間必定有一定聯(lián)系和規(guī)律。通過分析關(guān)于歸脾湯有效成分及作用部位的文獻(xiàn)，可對該方組方結(jié)構(gòu)和藥材配伍進(jìn)行研究，進(jìn)一步闡明中醫(yī)復(fù)方與現(xiàn)代藥理學(xué)之間的關(guān)聯(lián)性，為中西醫(yī)臨床結(jié)合用藥提供新思路及相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。