劉 虹，楊 杰，李素玲

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西太原030031）

2019 年8 月，筆者在研究考察山西毒蘑菇資源時，在山西南部沁水縣中條山地區(qū)櫟樹（Quercus sp.）林內(nèi)地上采到一些黃色的鵝膏屬物種樣本。這些蘑菇樣本宏觀形態(tài)特征類似于黃蓋鵝膏菌（Amanita subjunquillea S.Imai）。黃蓋鵝膏菌是一種劇毒蘑菇[1-3]，含有鵝膏肽類（amanitin）毒素，誤食后肝臟損害嚴重，死亡率很高[1]。該物種在我國分布廣泛，但是此前在山西省沒有記錄[4-5]。為準確弄清這些樣本是否為這個劇毒蘑菇物種，本研究采用形態(tài)學(xué)特征和DNA 片段分析相結(jié)合的方法對其進行了研究。

1 材料和方法

1.1 標本采集

本研究依據(jù)的擔(dān)子果樣本于2019 年8 月采自山西省南部沁水縣中條山地域的櫟樹林（Quercus sp.）林內(nèi)地上。樣本在野外采集時拍攝照片，記錄生境信息和主要宏觀形態(tài)學(xué)特征，包括擔(dān)子果菌蓋的表面特征、菌柄有無菌環(huán)、菌托及菌褶顏色、氣味和味道等表面特征情況。新鮮的擔(dān)子果標本經(jīng)45 ℃烘干后，用作憑證標本，保存于山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所標本館（HSA）和首都師范大學(xué)生命科學(xué)院標本館（BJTC）。

1.2 形態(tài)學(xué)鑒定

采用體視顯微鏡和手持放大鏡結(jié)合野外采集時拍攝的照片對擔(dān)子果的結(jié)構(gòu)大小、色澤、質(zhì)地等宏觀特征進行觀察并描述，主要包括對菌蓋顏色、直徑及表面鱗片形態(tài)，菌褶密度、顏色、與菌柄的著生方式，菌柄顏色、形狀及菌環(huán)、菌托形狀、質(zhì)地、表面條紋還是鱗片、中實還是中空，菌肉顏色及傷變色等的特征觀察記錄。

用手術(shù)刀對標本菌蓋表皮和菌柄表皮等組織進行徒手切片，用以蒸餾水、3%KOH 作為浮載劑制作水封片在光學(xué)顯微鏡下對擔(dān)子果的顯微結(jié)構(gòu)特征進行觀察并描述，如擔(dān)子、擔(dān)孢子形狀、大小以及囊狀體的有無等。

1.3 分子鑒定

標本烘干后采用CTAB 法提取、擴增核糖體DNA 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribed spacer，ITS）片段[6-7]，PCR 擴增引物采用擔(dān)子菌通用引物ITS1/ITS4[8-9]。將上述PCR 產(chǎn)物經(jīng)純化和測序（北京中科希林生工生物技術(shù)有限責(zé)任公司）獲得的序列經(jīng)手工校對后，所得的2 份ITS 序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫上用Blast 工具進行比對，其結(jié)果用于本研究比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 ITS-DNA 比對結(jié)果

表1 本研究引證的山西樣本的ITS 片段在NCBI 上Blast 結(jié)果

ITS 片段比對結(jié)果顯示，本研究引證樣本高度匹配黃蓋鵝膏菌（Amanita subjunquillea）（表1）。

2.2 形態(tài)學(xué)結(jié)果

擔(dān)子果（圖1）蘑菇狀，小到中型，菌蓋幼時扁半球形，成熟時扁平，直徑3～8 cm，黃色至芥黃色，中央平坦或稍凸起，顏色稍深。邊緣無溝紋，表面平滑。菌肉白色，較薄或中等厚度。菌褶白色，較密，離生，有小菌褶。菌柄近圓柱形，長5～12 cm，粗0.5～1.0 cm，白色至淡黃色，表面被有纖毛狀或反卷的淡黃色鱗片，基部通常膨大至球形；菌環(huán)白色，生菌柄上部或頂部；菌托白色至污白色，膜質(zhì)，淺杯狀，高2～3 cm，寬1～2 cm。擔(dān)孢子球形至近球形，偶見寬橢圓形，（6.5～8.5）μm×（6～8）μm。

引證標本：山西省沁水縣中村鎮(zhèn)，櫟樹林內(nèi)地上，單生或群生，2019 年8 月22 日，劉虹（LH726）；山西省沁水縣中村鎮(zhèn)，櫟樹林內(nèi)地上，單生或群生，2019 年8 月22 日，徐語言（XYYM057）。

3 結(jié)論與討論

本研究采用形態(tài)學(xué)方法和ITS 分子鑒定方法比對均支持本研究引證樣本為黃蓋鵝膏菌（Amanita subjunquillea S.Imai）。文獻研究分析顯示，黃蓋鵝膏菌此前在山西真菌專業(yè)文獻中沒有記載[2-5]，本研究結(jié)果為該種在山西的首次報告。

黃蓋鵝膏菌在分類學(xué)上隸屬于鵝膏屬（Amanita），是一種誤食后有致人死亡能力的劇毒蘑菇。除去該種之外，該屬尚有多個能致人死亡的毒蘑菇物種，代表性物種如分布于我國廣東等地的致命鵝膏（Amanita exitialis Zhu L.Yang&T.H.Li），該毒蘑菇在廣東省至少發(fā)生過22 起誤食中毒事件，導(dǎo)致89 人中毒，45 人死亡[1]；分布于湖南、廣西等地的灰花紋鵝膏（Amanita fuligineo Hongo），該毒蘑菇在上述地區(qū)有記錄的中毒事件至少有33 起，導(dǎo)致350 人中毒，其中79 人死亡[1]。此外還有廣泛分布于我國東北、華北等地的淡紅鵝膏（Amanita phllidorosea P.Zhang&Zhu L.Yang）于2011 年在山東泰安導(dǎo)致7 人中毒3 人死亡的中毒事件[1]等等。事實上到目前為止，鵝膏菌屬劇毒種類是引起我國蘑菇中毒并致死的主要物種來源。

筆者在近3 a 對山西省野生食用菌資源調(diào)查中雖然發(fā)現(xiàn)有鵝膏屬物種存在，但均為無毒或低毒種類，如發(fā)生在云杉、落葉松林內(nèi)的Amanita glarea 和發(fā)生在楊樹林內(nèi)的Amanita simulans 等，沒有在該地區(qū)發(fā)現(xiàn)鵝膏屬劇毒物種存在[10-14]。

本研究發(fā)現(xiàn)的黃蓋鵝膏菌是山西省發(fā)現(xiàn)的第1 個有劇毒的鵝膏屬物種，2018 年在河北省一起誤食黃蓋鵝膏中毒事件的調(diào)查報告中報道，誤食該物種導(dǎo)致中毒事件發(fā)病11 人，死亡3 人[15]。但值得一提的是，黃蓋鵝膏在山西的發(fā)生地沁水縣中村鎮(zhèn)附近幾年前有過當?shù)厝苏`食山上采集的野生蘑菇中毒死亡事件，但是否是該物種導(dǎo)致尚不得而知，但是該劇毒物種在上述地區(qū)出現(xiàn)應(yīng)該引起人們的高度警惕，以防止惡性中毒事件發(fā)生。