林 強(qiáng),張靜瑜,秦小金,王景杰*,李 冀

(1空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院消化內(nèi)科,西安 710038;2西安市第六醫(yī)院消化內(nèi)科;*通訊作者,E-mail:jingjie@fmmu.edu.cn;#共同通訊作者,E-mail:827537844@qq.com)

慢傳輸型便秘(slow transit constipation,STC)是由于結(jié)腸功能紊亂、傳導(dǎo)功能失常造成的排便困難、排便時(shí)間延長(zhǎng),常見癥狀以大便干燥、排便次數(shù)減少、腹脹等。STC患者就診人數(shù)逐漸增多,發(fā)病率逐年上升,嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量[1]。目前治療慢傳輸型便秘經(jīng)常使用的藥物為促胃腸動(dòng)力藥物,中藥在慢傳輸型便秘的治療作用和藥理機(jī)制是臨床和基礎(chǔ)研究的一個(gè)重要的方向。番瀉葉是尖葉番瀉或狹葉番瀉的干燥小葉[2],其性味甘、苦、寒,歸大腸經(jīng),具有瀉熱行滯,利腸腑,通大便之功效[3],有明確的促胃腸動(dòng)力作用,是臨床應(yīng)用最廣泛的導(dǎo)瀉藥之一。大量的臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn),番瀉葉可促胃腸蠕動(dòng),對(duì)胃腸道動(dòng)力障礙性疾病的治療效果顯著[4-6]。番瀉苷A是番瀉葉的有效成分之一[6-8],但是關(guān)于番瀉苷A在STC中的作用及其機(jī)制目前研究尚不明確。

目前研究認(rèn)為,STC的病因及發(fā)病機(jī)制與腸道動(dòng)力異常密切相關(guān)[9]。在胃腸道中,廣泛分布Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC),它是胃腸道平滑肌慢波的發(fā)起者和傳播者,被視為胃腸動(dòng)力的起搏細(xì)胞[10]。我們前期研究結(jié)果表明,ICC表面的超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels 1,HCN1)是其節(jié)律電活動(dòng)的始發(fā)離子通道[11,12],目前尚不清楚ICC以及HCN1蛋白在慢傳輸型便秘形成中的作用。

我們課題組根據(jù)目前國(guó)內(nèi)外研究基礎(chǔ),提出如下假說:Cajal間質(zhì)細(xì)胞數(shù)目減少以及功能蛋白HCN1異常在慢傳輸型便秘發(fā)生發(fā)展中具有重要作用,而番瀉苷很有用可能通過激活I(lǐng)CC細(xì)胞膜上的HCN1通道蛋白促進(jìn)腸動(dòng)力,進(jìn)而改善慢傳輸型便秘的臨床癥狀。針對(duì)以上的假說,本研究擬在成功制作STC動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,采用免疫組織化學(xué)、藥理學(xué)等方法研究ICC及其功能蛋白HCN1在慢傳輸型便秘形成過程中的作用及其機(jī)制,同時(shí)研究番瀉苷A在慢傳輸型便秘中的藥理作用以及藥理機(jī)制,為進(jìn)一步闡明慢傳輸型便秘發(fā)病機(jī)制以及后續(xù)研究番瀉葉治療STC奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

7周齡SD大鼠30只,SPF級(jí),雌雄各半,體質(zhì)量(220±30)g,由空軍軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(生產(chǎn)許可證號(hào):SYXK(軍)-2012-0023,動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(軍)-2012-0007)。將SD大鼠30只隨機(jī)分為正常組、模型組、ZD7288+番瀉苷A組、番瀉苷A組和莫沙必利組,每組6只;除正常組外,其余各組采用冰水灌胃法,灌胃給予大鼠0-4 ℃生理鹽水2 ml/只，1次/d，14 d，建立慢傳輸型便秘大鼠模型。

1.2 主要試劑、儀器

番瀉苷A由陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥物研究所提供,根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)[3]計(jì)算番瀉苷A大鼠與人體等效劑量。ZD7288(HCN1阻斷劑)為美國(guó)Abcam公司產(chǎn)品;山羊抗兔FITCt購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;驢抗鼠Texas-red購(gòu)自美國(guó)Molecular Probes公司;兔抗c-kit多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;鼠抗HCN1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。FV1000激光共聚焦顯微鏡(日本Olympus公司);恒冷箱切片機(jī)(德國(guó)Leica公司);多導(dǎo)生理記錄儀RM6280B(成都儀器廠)。

1.3 胃腸道組織標(biāo)本制備

腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉大鼠,先給予靜滴生理鹽水100 ml。隨后用溫度為4 ℃、濃度為40 g/L多聚甲醛磷酸鹽(0.1 mol/L)緩沖液500 ml(PB,pH7.4),經(jīng)靜脈先快后慢灌流約2 h,將固定好的結(jié)腸組織置于25%蔗糖溶液,4 ℃浸泡過夜，待組織沉底后，恒冷箱切片機(jī)上連續(xù)切片，切片厚12 μm，風(fēng)干，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 免疫熒光雙標(biāo)染色檢測(cè)結(jié)腸c-kit陽性細(xì)胞數(shù)目和HCN1蛋白表達(dá)情況

將制備好的腸道組織冰凍切片或者全層鋪片用含1% BSA+0.3%Triton的PBS液封閉1 h，入一抗(HCN1抗體按1 ∶500稀釋，c-kit按1 ∶1 000稀釋，GFAP抗體按1 ∶500稀釋)。一抗孵育12 h(4 ℃)。經(jīng)PBS漂洗后入二抗(羊抗兔FITC二抗，驢抗鼠Texas-red二抗均按1 ∶500稀釋)室溫孵育2 h，DAPI襯核。PBS漂洗，50%緩沖甘油封片，鏡下觀察組織。

1.5 大鼠結(jié)腸推進(jìn)速度測(cè)定

實(shí)驗(yàn)前30 min,正常組和模型組均給予生理鹽水灌胃,番瀉苷A組給予1.0 mg/ml番瀉苷A灌胃,ZD7288+番瀉苷A組大鼠尾靜脈給予0.5 ml HCN1的特異性阻斷劑ZD7288(0.5 mmol/L)同時(shí)灌胃給予1.0 mg/ml番瀉苷A干預(yù),莫沙比利組給予灌胃給予0.05 mg/ml莫沙比利;以上各組均灌服同體積液體(0.1 ml/100 g)。各組大鼠用30%水合氯醛麻醉,待麻醉成功后,將直徑3 mm玻璃小球用細(xì)的塑料軟管推入距肛門3 cm直腸處?；\內(nèi)墊清潔濾紙,待大鼠蘇醒后迅速移至籠內(nèi)喂食飲水,并開始計(jì)時(shí),記錄直腸內(nèi)玻璃小球排出的時(shí)間。

1.6 結(jié)腸離體肌條制備

將20只SD大鼠在室溫(20±2)℃的環(huán)境中飼養(yǎng)，其中15只SD大鼠給予0-4 ℃生理鹽水2 ml灌胃，每日1次，共14 d，建立慢傳輸型便秘大鼠模型，隨機(jī)分成正常組、模型組、番瀉苷A組、ZD7288+番瀉苷A組，每組各5只。將大鼠脫頸椎處死，從腹部正中剖開腹腔，取結(jié)腸，在距離肛門約5 cm處截取一段結(jié)腸，長(zhǎng)4-5 cm，放入盛有4 ℃ Krebs液的培養(yǎng)皿中，持續(xù)通入5%二氧化碳和95%氧氣的混合氣體，保持標(biāo)本活性；用濕棉簽擦破結(jié)腸系膜，用眼科鑷剔除漿膜，沿結(jié)腸系膜縱行剪開腸腔，用Krebs液洗凈結(jié)腸內(nèi)容物，將腸管黏膜層朝上鋪平固定在硅膠板上，用眼科鑷和玻棒剝除黏膜層及黏膜下層組織，觀察結(jié)腸環(huán)行肌走行，將兩個(gè)刀片固定刀片架上，刀片之間距離設(shè)定為3 mm，沿結(jié)腸環(huán)行肌走行方向切取3 mm×8 mm的肌條，再沿著縱行平滑肌纖維的方向切取3 mm×8 mm的肌條。

1.7 離體結(jié)腸肌條收縮頻率和幅度測(cè)定

將制備好的環(huán)行肌肌條、縱行肌肌條標(biāo)本移入持續(xù)通以95%氧氣和5%二氧化碳混合氣體,盛有37 ℃ Krebs液中的恒溫肌槽中,含鈣Krebs液:NaCl 6.75 g/L,CaCl20.28 g/L,KCl 0.344 g/L,NaHCO31.84 g/L,MgSO47 g/L,NaPO40.18 g/L,H2O 0.28 g/L,葡萄糖2.0 g/L,維持pH值于7.3-7.5;在肌條兩端分別用醫(yī)用絲線扎牢,一端固定在平滑肌槽下端的彎鉤,另一端固定于張力換能器,在前負(fù)荷為1.0 g狀態(tài)下,孵育肌條1 h,每15 min更換新鮮Krebs液1次,待肌條自發(fā)收縮活動(dòng)平穩(wěn)后,通過多導(dǎo)生理記錄儀,記錄縱行肌肌條和環(huán)行肌肌條的收縮振幅和頻率,描記活動(dòng)曲線3-5 min。番瀉苷A組給藥的方法,先給予番瀉苷A(1.0 mg/ml)0.5 ml,觀察肌條收縮振幅和頻率,描記給藥后肌條活動(dòng)曲線3-5 min;ZD7288+番瀉苷A組給藥的方法,加入HCN1阻斷劑ZD7288(0.5 mmol/L)0.5 ml,觀察肌條收縮和頻率,同時(shí)記錄給藥后肌條活動(dòng)曲線3-5 min,5 min后加入番瀉苷A(1.0 mg/ml)0.5 ml,再次觀察肌條收縮和頻率,并描記給藥后肌條活動(dòng)曲線。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 慢傳輸型便秘大鼠胃腸道c-kit陽性細(xì)胞ICC數(shù)目和HCN1蛋白表達(dá)的變化

免疫組織化學(xué)熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示,在慢傳輸型便秘大鼠胃腸道中,c-kit免疫熒光強(qiáng)度及光密度值與對(duì)照組相比均顯著下降,即c-kit陽性ICC細(xì)胞數(shù)目顯著減少(P<0.05,見圖1,2);同樣,在慢傳輸型便秘大鼠胃腸道中HCN1免疫熒光密度值和對(duì)照組相比亦均顯著下降,即HCN1蛋白表達(dá)水平顯著下降(P<0.05,見圖1,2)。

2.2 在體阻斷離子通道HCN1對(duì)番瀉苷A促結(jié)腸蠕動(dòng)作用的影響

特異性阻斷HCN1通道蛋白,觀察HCN1被阻斷劑阻斷后番瀉苷A對(duì)結(jié)腸蠕動(dòng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:模型組結(jié)腸推進(jìn)速率低于正常組(P<0.05);番瀉苷A組和莫沙比利組結(jié)腸推進(jìn)速率明顯高于模型組(P<0.05),而ZD7288+番瀉苷A組結(jié)腸推進(jìn)率和模型組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05,見圖3)。同時(shí),番瀉苷A組結(jié)腸推進(jìn)速率略高于莫沙必利組(P<0.05),即番瀉苷A促結(jié)腸動(dòng)力效果優(yōu)于莫沙必利；而ZD7288+番瀉苷A組結(jié)腸推進(jìn)率顯著低于番瀉苷A組(P<0.05，見圖3)。

圖1 大鼠近端結(jié)腸c-kit陽性細(xì)胞數(shù)目和HCN1蛋白表達(dá)變化情況Figure 1 The number of c-kit positive ICC and the expression of HCN1 in the proximal colon of rats

與正常組比較,*P<0.05圖2 兩組大鼠近端結(jié)腸c-kit陽性細(xì)胞密度和HCN1蛋白表達(dá)水平比較Figure 2 Comparison of the density of c-kit positive ICC and expression of HCN1 in the proximal colon of rats between normal group and model group

2.3 番瀉苷A和ZD7288干預(yù)對(duì)結(jié)腸縱行平滑肌肌條收縮情況的影響

模型組慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸縱行肌收縮幅度和頻率明顯小于正常組大鼠結(jié)腸縱行肌收縮幅度和頻率(P<0.05);番瀉苷A組與模型組相比,大鼠縱行肌收縮頻率和收縮幅度均明顯升高(P<0.05)。但是ZD7288+番瀉苷A組大鼠結(jié)腸縱行肌收縮頻率和收縮幅度與模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見圖4),即番瀉苷A組促結(jié)腸縱形肌收縮作用可以被HCN1阻斷劑所阻斷。

與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與番瀉苷A組比較,△P<0.05圖3 在體阻斷HCN1對(duì)番瀉苷A促結(jié)腸蠕動(dòng)作用的影響Figure 3 Effect of blocking HCN1 in vivo on the role of sennoside A in promoting colon peristalsis

2.4 番瀉苷A和ZD7288干預(yù)結(jié)腸環(huán)行平滑肌肌條收縮情況的影響

模型組慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸環(huán)行肌收縮幅度和頻率明顯小于正常組大鼠結(jié)腸環(huán)行肌收縮幅度和頻率(P<0.05)。給予番瀉苷A干預(yù)的慢傳輸型便秘模型大鼠環(huán)行肌收縮頻率和收縮幅度與模型組大鼠環(huán)行肌收縮頻率和收縮幅度相比,兩個(gè)指標(biāo)均明顯升高(P<0.05)。但是ZD7288+番瀉苷A組大鼠結(jié)腸環(huán)行肌收縮頻率和收縮幅度與模型組大鼠結(jié)腸環(huán)行肌收縮頻率和收縮幅度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見圖5),即番瀉苷A組促結(jié)腸環(huán)形肌收縮作用可以被HCN1阻斷劑所阻斷。

與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與番瀉苷A組比較,△P<0.05圖4 番瀉苷A和ZD7288對(duì)大鼠結(jié)腸縱行平滑肌肌條收縮的影響Figure 4 Effect of Sennoside A or ZD7288 on the e spontaneous contractile activity of the longitudinal muscle strip isolated from the colon of the adult rat

與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與番瀉苷A組比較,△P<0.05圖5 番瀉苷A和ZD7288對(duì)大鼠結(jié)腸環(huán)行平滑肌肌條收縮的影響Figure 5 Effect of sennoside A or ZD7288 on the spontaneous contractile activity of the circular muscle strip isolated from the colon of the adult rats

3 討論

慢性特發(fā)性便秘(chronic idiopathic constipation,CIC)已經(jīng)成為最常見的胃腸道疾病之一,全球發(fā)病率為14%[13]。其中慢傳輸型便秘(STC)是慢性特發(fā)性便秘最為常見的一種亞型,約占慢性特發(fā)性便秘患者42%[14]。北京地區(qū)在2001年及2010年兩次對(duì)慢性便秘流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果顯示,發(fā)病率分別為6.07%和4.1%,女性多于男性[15,16]。還有廣州、西安、天津、杭州等地也曾進(jìn)行便秘流行病學(xué)調(diào)查,各地的發(fā)病率有很大差異,在3%-17%之間[17-21]。便秘不僅對(duì)患者的身心健康造成長(zhǎng)期的不良影響,同時(shí)也造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。最近的一項(xiàng)研究表明,平均每年為每位便秘患者提供的醫(yī)療費(fèi)用為7 522美元[22]。因此,針對(duì)慢性特發(fā)性便秘尤其是慢傳輸型便秘的發(fā)病機(jī)制和診療策略的研究具有重要的臨床意義。

已經(jīng)有許多研究表明,結(jié)腸動(dòng)力障礙在慢傳輸型便秘的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[14,23]。在胃腸道平滑肌層中,環(huán)行肌和縱行肌協(xié)調(diào)舒縮是胃腸動(dòng)力產(chǎn)生的重要基礎(chǔ)。因此,對(duì)STC疾病模型結(jié)腸環(huán)、縱行肌運(yùn)動(dòng)特征的研究,將有助于我們進(jìn)一步深入理解STC的發(fā)病機(jī)制。本次實(shí)驗(yàn)在體檢測(cè)結(jié)腸排珠時(shí)間,結(jié)果顯示,與正常大鼠相比,慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸傳輸速率均顯著下降;在此基礎(chǔ)上,通過離體肌條實(shí)驗(yàn)探究結(jié)腸環(huán)縱行肌運(yùn)動(dòng)特點(diǎn),結(jié)果顯示,與正常大鼠相比,慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸腸道平滑肌收縮幅度和頻率顯著下降。以上研究結(jié)果提示,慢傳輸型便秘之所以發(fā)生,不但其結(jié)腸的舒縮功能下降(主要是環(huán)形肌的作用),而且其推進(jìn)功能也降低(主要是縱行肌的作用),二者的功能改變,進(jìn)而導(dǎo)致其協(xié)同性的下降,進(jìn)一步導(dǎo)致結(jié)腸舒縮和推進(jìn)的下降,使得結(jié)腸處于一種“無力”的狀態(tài),結(jié)腸運(yùn)動(dòng)障礙,水分過度吸收,進(jìn)而使得大便性狀及在結(jié)腸中被推進(jìn)的速率均產(chǎn)生了變化,患者表現(xiàn)為排便費(fèi)力和大便干結(jié)的情況。

不同于骨骼肌,胃腸道平滑肌存在自發(fā)性、節(jié)律性收縮運(yùn)動(dòng),即慢波節(jié)律;慢波是胃腸運(yùn)動(dòng)的基本節(jié)律,在胃腸動(dòng)力形成過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[24]。本次離體肌條實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,STC模型大鼠結(jié)腸慢波頻率和幅度均下降,這提示慢波節(jié)律的異常是STC形成的重要病理生理機(jī)制。但是,導(dǎo)致STC結(jié)腸慢波節(jié)律異常的潛在細(xì)胞與分子基礎(chǔ)研究尚不明確。大量研究表明,Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal,ICC)作為胃腸道起搏細(xì)胞,是胃腸道慢波的發(fā)起與傳播者,它在胃腸道平滑肌收縮節(jié)律、幅度、方向的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用[10,24]。Cajal間質(zhì)細(xì)胞是廣泛分布于胃腸道肌層一種間質(zhì)細(xì)胞,可以被干細(xì)胞因子受體c-kit特異性標(biāo)記[25]。研究表明，化學(xué)性損害Cajal間質(zhì)細(xì)胞可以導(dǎo)致胃腸慢波節(jié)律明顯異常甚至消失[26]。隨后通過膜片鉗技術(shù)發(fā)現(xiàn),ICC確實(shí)具有自發(fā)性電節(jié)律特點(diǎn)[27]。而且,也有研究報(bào)道運(yùn)用中和性抗體阻斷ICC膜上標(biāo)記分子c-kit或者基因敲除c-kit,可以導(dǎo)致ICC發(fā)育缺陷,同時(shí)導(dǎo)致胃腸道慢波形成障礙[28]。Cajal間質(zhì)細(xì)胞在胃食管反流病、胃輕癱等胃腸動(dòng)力障礙性疾病中均具有重要作用[29,30],但是ICC在慢傳輸型便秘中的作用研究尚不是很明確。為了進(jìn)一步研究Cajal間質(zhì)細(xì)胞在慢傳輸型便秘發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其機(jī)制,我們采用免疫熒光染色觀察胃腸道ICC形態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸c-kit陽性的ICC數(shù)目顯著減少,同時(shí)HCN1蛋白表達(dá)也下調(diào)。HCN1通道蛋白在具有自發(fā)性電節(jié)律的心肌細(xì)胞、神經(jīng)元上有分布,并介導(dǎo)這些細(xì)胞的起搏電流Ih(hyperpolarization-activated current)的形成,該電流又被稱為If(funny current),因此HCN1在這些細(xì)胞的起搏電活動(dòng)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[31,32]。而我們課題組前期研究結(jié)果表明,離子通道HCN1是特異性分布于ICC上的離子通道蛋白,在ICC起搏節(jié)律形成中作為始發(fā)離子通道而發(fā)揮著重要作用[11]。因此,胃腸道ICC數(shù)目降低、功能蛋白HCN1表達(dá)下調(diào)可能是慢傳輸型便秘形成的細(xì)胞和分子基礎(chǔ)。

番瀉葉主要成分為尖葉番瀉葉含有的番瀉苷A、B、C及蘆薈大黃素-8-葡萄糖苷、大黃酸-1-葡萄糖苷、大黃酸-8-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸糖等。番瀉葉主要導(dǎo)瀉成分為番瀉苷A、B、C、D,其中番瀉苷A和B互為同分異構(gòu)體,且番瀉苷A的含量較多,相對(duì)易于提取[7-9]。番瀉葉具有瀉下通便作用,因此被廣泛應(yīng)用于便秘患者的治療中,番瀉苷是番瀉葉導(dǎo)瀉促蠕動(dòng)的有效成分,但是具體的機(jī)制尚不明確。本次在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,番瀉苷A對(duì)慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸促蠕動(dòng)作用優(yōu)于傳統(tǒng)促動(dòng)力藥莫沙比利,而離體肌條實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)番瀉苷A可以顯著提高胃腸道離體肌條收縮頻率和幅度。但是如果選擇性阻斷HCN1可以明顯削弱番瀉苷A在慢傳輸型便秘模型大鼠中的促結(jié)腸動(dòng)力作用。同時(shí)離體肌條實(shí)驗(yàn)也表明選擇性阻斷HCN1確實(shí)可以顯著削弱番瀉苷A促結(jié)腸肌條收縮作用。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,番瀉苷A促進(jìn)慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸蠕動(dòng)的作用有賴于HCN1通道蛋白的存在,但是番瀉苷A是否通過激活HCN1通道蛋白來起促結(jié)腸動(dòng)力作用還需進(jìn)一步深入研究。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞數(shù)目減少、HCN1通道蛋白表達(dá)減少,這構(gòu)成STC形成的細(xì)胞和分子基礎(chǔ);同時(shí)在體和離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明番瀉苷A可以通過促進(jìn)慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸蠕動(dòng)來發(fā)揮對(duì)STC的治療作用,且這種作用有賴于HCN1通道蛋白的存在。但是進(jìn)一步探究番瀉苷A是通過激活HCN1通道蛋白來發(fā)揮藥理作用,還需要開展細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)才能直接驗(yàn)證。