劉 麗，張倩文，農(nóng) 程，張 曦，徐小婷，Mohammed Ismail，肖 莉，江振洲,3，張陸勇,4，孫麗新,3*

（1中國(guó)藥科大學(xué)江蘇省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210009；2湖州師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，湖州313000；3中國(guó)藥科大學(xué)江蘇省藥物動(dòng)力學(xué)研究與評(píng)價(jià)中心，南京210009；4廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院新藥篩選與藥效學(xué)評(píng)價(jià)中心，廣州510006）

肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性臟器，具有多種功能，被稱為“物質(zhì)代謝中樞”、人體內(nèi)最大的“化工廠”和“清潔器”。肝臟是一個(gè)很容易受損的器官，各種損肝因素如病毒、酗酒、脂代謝異常、藥物、自身免疫等，均會(huì)造成肝臟炎癥損傷，這時(shí)肝內(nèi)的物質(zhì)代謝就會(huì)出現(xiàn)障礙，身體的多種功能也會(huì)受到影響，如果炎癥持續(xù)發(fā)展就會(huì)發(fā)展為肝硬化、肝纖維化、肝癌等［1］。肝臟疾病的發(fā)病率逐年上升，由于肝臟疾病復(fù)雜的發(fā)病誘因和尚未闡明的發(fā)病機(jī)制，治愈率仍不夠理想，因此，迫切需要明確其作用機(jī)制以找到更有效的治療靶點(diǎn)與藥物。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA 參與了眾多肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，包括肝癌［2］、肝纖維化［3］、肝硬化［4］、非酒精性脂肪性肝?。?］等，并作為生物標(biāo)記物在肝臟疾病的診斷與預(yù)后中發(fā)揮重要作用。目前研究發(fā)現(xiàn)lncRNA作用肝臟疾病的作用方式多樣，包括通過(guò)調(diào)控各種信號(hào)通路從而參與細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、遷移等多種生理過(guò)程［6］。本文對(duì)近幾年lncRNA 調(diào)控肝臟疾病相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展進(jìn)行歸納總結(jié)，為研究肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展提供新思路，為尋找治療肝臟疾病的新靶點(diǎn)及生物標(biāo)志物提供新的研究方向。

1 LncRNA 及其生物學(xué)功能

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類長(zhǎng)度大于200 個(gè)核苷酸，缺少特異完整的開(kāi)放閱讀框、無(wú)蛋白質(zhì)編碼功能的RNA 分子［7］。同蛋白編碼基因類似，lncRNA 主要由Ⅱ型RNA 聚合酶轉(zhuǎn)錄而來(lái)，具有獨(dú)立的啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)、外顯子及內(nèi)含子。LncRNA 具有較高的組織器官特異性和較低的序列保守性，可以通過(guò)多種機(jī)制在不同水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。根據(jù)lncRNA 在基因組中與蛋白質(zhì)編碼基因的相對(duì)位置，目前將其分為5 類：（1）正義lncRNA（sense lncRNA）：從蛋白質(zhì)編碼基因的正義鏈轉(zhuǎn)錄；（2）反義lncRNA（antisense lncRNA）：從蛋白質(zhì)編碼基因的 反 義 鏈 轉(zhuǎn) 錄；（3）雙 向lncRNA（bidirectional lncRNA）：該類lncRNA 可同時(shí)從與鄰近mRNA 轉(zhuǎn)錄方向相同與相反兩個(gè)方向發(fā)生轉(zhuǎn)錄；（4）基因間lncRNA（intergenic lncRNA）：從兩個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因之間的空間轉(zhuǎn)錄而來(lái)；（5）基因內(nèi)lncRNA（intronic lncRNA）：從編碼基因的內(nèi)含子區(qū)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生。

LncRNA 分布于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核以及細(xì)胞器中，功能較為復(fù)雜，具有多樣性，能夠在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，廣泛參與機(jī)體幾乎所有的生理和病理過(guò)程［8］。研究表明：lncRNAs在X 染色體沉默、基因組印跡、染色體修飾、轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄干擾以及核內(nèi)運(yùn)輸?shù)确矫婢哂兄匾墓δ埽瑓⑴c肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，其主要的調(diào)控機(jī)制如圖1所示。LncRNA這種復(fù)雜精確的調(diào)控功能極大地詮釋了基因的復(fù)雜性，同時(shí)也為人們從基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的維度來(lái)認(rèn)識(shí)生命體的復(fù)雜性開(kāi)啟了新的天地。已證實(shí)lncRNA 參與細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、遷移、細(xì)胞周期、細(xì)胞分化等一系列生物學(xué)過(guò)程［9-10］。

LncRNA 作為生物標(biāo)記物在肝臟疾病的診斷和預(yù)后中發(fā)揮了重要作用。例如Liu 等［11］對(duì)1 300例HBV陽(yáng)性肝癌患者、1 344例HBV持續(xù)攜帶者和1 344 例HBV 受試者進(jìn)行病例對(duì)照研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)lncRNA HULC 中rs7763881 的變異基因型可能有助于降低HBV 攜帶者對(duì)肝癌的易感性。臨床肝癌患者的雙盲實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示HULC 在診斷肝癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移方面具有良好的預(yù)測(cè)作用，可以作為預(yù)測(cè)肝癌的新型生物標(biāo)志物［12］。MALAT-1在肝癌細(xì)胞系和112 例臨床組織樣本中表達(dá)上調(diào)；沉默MALAT-1 可抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；因此，MALAT-1 可能是預(yù)測(cè)肝移植后肝癌復(fù)發(fā)的新型生物標(biāo)志物。HOTAIR（一種lncRNA）在多種腫瘤例如乳腺癌、大腸癌、肝癌中高度表達(dá)并與其不良預(yù)后相關(guān)。Gao 等［13］通過(guò)檢測(cè)60 組肝癌患者臨床組織樣本和正常肝組織樣本中HOTAIR 的表達(dá)水平，并分析HOTAIR表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)聯(lián)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HOTAIR的表達(dá)水平與腫瘤的分化，轉(zhuǎn)移以及早期復(fù)發(fā)顯著相關(guān)，是診斷肝癌發(fā)生和腫瘤復(fù)發(fā)的重要標(biāo)志物。最近研究報(bào)道，在人類原發(fā)性肝硬化膽管炎患者中，作為肝癌預(yù)后標(biāo)記物的H19 的表達(dá)水平與肝纖維化的嚴(yán)重程度顯著相關(guān)［14］；此外，H19 還可以通過(guò)促進(jìn)肝臟脂肪生成從而可能成為治療非酒精性脂肪性肝病的潛在靶點(diǎn)。由此可見(jiàn)，靶向lncRNA 治療肝臟疾病具有廣闊的應(yīng)用前景。因此，明確lncRNA 作用肝臟疾病的分子機(jī)制將為闡明肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制以及治療肝臟疾病帶來(lái)新的希望和突破點(diǎn)。目前研究表明，lncRNA 作用肝臟疾病的作用機(jī)制是多種多樣的，不僅可以干擾下游基因的表達(dá)，也能影響特定蛋白質(zhì)的活性以及在細(xì)胞中的定位。LncRNA 可以通過(guò)調(diào)控各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，因此明確lncRNA 與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系對(duì)肝臟疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)和理解十分必要。

圖1 長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）的調(diào)控機(jī)制

2 LncRNA 對(duì)肝臟疾病相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控作用

2.1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β通路

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與調(diào)控眾多細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡以及細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡等其他細(xì)胞功能［15］。TGF-β 超家族包括TGFβ1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1是最主要的促纖維化因子。Smad蛋白質(zhì)作為TGF-β家族受體下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，具有轉(zhuǎn)錄激活作用，是TGF-β基因信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

2.1.1 LncRNA 調(diào)控肝癌中的TGF-β 信號(hào)通路TGF-β 在腫瘤中發(fā)揮雙相調(diào)節(jié)作用。在腫瘤的早期階段，TGF-β通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡發(fā)揮腫瘤抑制作用；隨著腫瘤的惡性進(jìn)展，TGF-β通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，遷移和侵襲來(lái)發(fā)揮促腫瘤轉(zhuǎn)移作用。EMT 已被證明有助于腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲。肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）作為全球第六大常見(jiàn)腫瘤，具有高復(fù)發(fā)率和預(yù)后差的特點(diǎn)［16］，其中不良預(yù)后和高復(fù)發(fā)率很大程度與肝癌細(xì)胞的遷移和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。已有報(bào)道TGF-β 通過(guò)與lncRNA 相互作用促進(jìn)肝癌的發(fā)生發(fā)展。幾種與TGF-β1 相互作用的lncRNA，包括MALAT1、PVT1、UCA1 在肝癌組織中表達(dá)異常，并與臨床病理因素和預(yù)后顯著相關(guān)［17-18］。Yuan 等［19］發(fā)現(xiàn)TGF-β 誘導(dǎo)lncRNAATB 在肝癌中表達(dá)上調(diào)，lncRNA-ATB 隨之競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-200 家族成員來(lái)上調(diào)E 盒結(jié)合鋅指蛋白（zinc finger E-box binding homeobox，ZEB）家族中ZEB1 和ZEB2 的表達(dá)，最終促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT 而獲得侵襲能力。Shi 等［20］發(fā)現(xiàn)在肝癌患者中l(wèi)ncRNA snaR 和TGF-β1 的表達(dá)均顯著增加且snaR 在血漿中的表達(dá)水平與TGF-β1 呈正相關(guān)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA snaR 可能作為TGF-β1 的上游激活劑，上調(diào)TGF-β1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲與遷移，加重肝癌發(fā)展。Yang 等［21］發(fā)現(xiàn)，lncRNA NORAD 充當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA（competing endogenous RNAs，ceRNA）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-202-5p，激活TGF-β 通路，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖與侵襲。此外，最近有研究表明，TGF-β 可以降低lncRNA H19 的表達(dá)，H19 的低表達(dá)抑制腫瘤起始肝細(xì)胞（TICs）的祖細(xì)胞特性和致瘤作用，從而介導(dǎo)肝癌的發(fā)生發(fā)展［22］。

2.1.2 LncRNA 調(diào)控肝纖維化中的TGF-β 信號(hào)通路 肝纖維化作為肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生的過(guò)程，其主要特征是細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）蛋白的產(chǎn)生和沉積增加。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSC）是影響纖維化產(chǎn)生的最主要細(xì)胞，在其活化的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的Ⅰ型膠原α1（collagen type I collagenα1，COL1α1），ɑ 平滑肌動(dòng)蛋白（ɑ-smooth actin，ɑ-SMA）以及促纖維化因子。TGF-β 信號(hào)通路是肝纖維化過(guò)程中重要的參與者，可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，促進(jìn)炎癥因子和促纖維化因子表達(dá)增加，進(jìn)而加重肝纖維化，其中TGF-β/Smad 是調(diào)控肝纖維化的典型信號(hào)通路。TGF-β1 作為最主要的促纖維化細(xì)胞因子，與其受體TGF-βR1 和TGF-βRII 結(jié)合導(dǎo)致異四聚體復(fù)合物的形成和Smad2的磷酸化；磷酸化Smads易位進(jìn)入細(xì)胞核從而促進(jìn)HSC 活化和膠原合成。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)lncRNA通過(guò)介導(dǎo)TGF-β/Smad信號(hào)通路進(jìn)而調(diào)控肝纖維化。例如lncRNA-ATB 通過(guò)與miR-425-5p 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合來(lái)上調(diào)TGF-βRII 和Smad2的表達(dá)，從而促進(jìn)HSC 的活化和增殖，發(fā)揮促纖維化作用［23］；lnc-LFAR1 在肝纖維化中上調(diào)Smad2/3的表達(dá)并促進(jìn)其磷酸化，進(jìn)而激活TGF-β 信號(hào)通路，誘導(dǎo)COL1α1 和α-SMA 表達(dá)增加，ECM 蛋白產(chǎn)生增多，HSC活化，肝纖維化加重［24］；MALAT1可以通過(guò)阻斷SIRT1 對(duì)TGF-β 信號(hào)通路的抑制進(jìn)而促進(jìn)HSC 活 化；H19 充 當(dāng)ceRNA 競(jìng) 爭(zhēng) 性 結(jié) 合miR-148a，上調(diào)泛素特異性蛋白酶4（USP4）的表達(dá)，從而激活TGF-β 信號(hào)通路，誘導(dǎo)HSC 活化，加重肝纖維化［25］。

2.2 Notch信號(hào)通路

Notch 信號(hào)通路是一個(gè)高度保守的信號(hào)通路，參與調(diào)控多種生物進(jìn)程，包括細(xì)胞增殖、分化、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和血管生成等。在哺乳動(dòng)物中，Notch信號(hào)通路有4 個(gè)受體（Notch1-4）和5 個(gè)Notch 配體（Delta-like 1，Dll1；Delta-like 3，Dll3；Delta-like 4，Dll4；Jagged-1 and Jagged-2）。當(dāng)Notch 受體與相鄰細(xì)胞上的相應(yīng)配體相互結(jié)合時(shí)，ADAM 家族對(duì)Notch 受體進(jìn)行兩步蛋白水解，釋放Notch 細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（notch intracellular domain，NICD）；NICD 易位至細(xì)胞核并與DNA 結(jié)合蛋白CSL 作用以促進(jìn)靶基因的轉(zhuǎn)錄，包括Hes 和與Hes 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子［26］。Notch 通路已被報(bào)道參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展，包括腫瘤、肝臟疾病、自身免疫性疾病等。

2.2.1 LncRNA 調(diào)控肝癌中的Notch 信號(hào)通路肝癌細(xì)胞的高轉(zhuǎn)移是肝癌預(yù)后差和術(shù)后復(fù)發(fā)率高的重要原因。大量研究表明，Notch 通路在腫瘤中異常激活并與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，例如已證實(shí)Notch1 的激活有助于肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，但Notch 通路如何介導(dǎo)肝癌細(xì)胞的侵襲機(jī)制仍不明確，目前研究報(bào)道lncRNA 可能通過(guò)調(diào)控Notch 通路進(jìn)而介導(dǎo)這一過(guò)程。例如：在肝癌組織和細(xì)胞系中顯著下調(diào)的lincRNA-p21 被認(rèn)為在肝癌中發(fā)揮抗腫瘤作用，其可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移；對(duì)lincRNA-p21 的作用機(jī)制進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)的lincRNA-p21 通過(guò)介導(dǎo)Notch 信號(hào)通路誘導(dǎo)的EMT 進(jìn)程來(lái)抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移；激活Notch通路可以逆轉(zhuǎn)pcDNA-lincRNA-p21的肝癌細(xì)胞抑制作用，提示Notch 通路參與lincRNA-p21 的抑 癌 作 用［27］。Zhang 等［28］發(fā) 現(xiàn) 在 肝 癌 中 上 調(diào)LINC00261 的表達(dá)，可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、集落形成、侵襲和EMT，這一結(jié)果可能與LINC00261下調(diào)Hes-1和Notch1的表達(dá)進(jìn)而抑制Notch信號(hào)通路有關(guān)。此外，最近有報(bào)道表明，Notch1 可以調(diào)控lncRNA AK022798的表達(dá)，后者進(jìn)一步誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，介導(dǎo)肝癌的發(fā)生發(fā)展［29］。

2.2.2 LncRNA 調(diào)控肝纖維化中的Notch 信號(hào)通路 Notch 通路已被報(bào)道通過(guò)各種途徑與方式參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。例如：敲低Notch3 可以抑制ɑ-SMA 和COL1α1 的表達(dá)，進(jìn)而介導(dǎo)HSCs 活化［30］；Notch 誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生EMT，進(jìn)而加重肝纖維 化；Notch 與TGF-β/Smad 信 號(hào) 通 路 協(xié) 同 調(diào) 節(jié)HSCs 的 活 化；Notch 與Wnt 信 號(hào) 通 路 協(xié) 同 調(diào) 節(jié)HSCs［31］。越來(lái)越多的證據(jù)表明lncRNA 可以通過(guò)調(diào)控Notch 通路調(diào)節(jié)HSCs 的活化進(jìn)而介導(dǎo)肝纖維化。

Zhang 等［24］發(fā) 現(xiàn) 沉 默lnc-LFAR1 可 以 抑 制HSCs 的激活，減少體外TGF-β 誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡并減弱CCl4和膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化。對(duì)lnc-LFAR1 作用機(jī)制進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)在lnc-LFAR1表達(dá)下調(diào)的HSC 中，Notch2、Notch3、Hes1 和Hey2的表達(dá)水平均降低；在lnc-LFAR1表達(dá)上調(diào)的HSC中，表達(dá)結(jié)果相反；敲低lnc-LFAR1 的表達(dá)導(dǎo)致Notch2、Notch 3、Hes1 和Hey2 的表達(dá)也降低，α-SMA表達(dá)水平下降；以上結(jié)果表明lnc-LFAR1通過(guò)激活Notch 通路促進(jìn)肝纖維化和HSC 活化。Zhang等［32］發(fā)現(xiàn)lnc-Hser 發(fā)揮抗纖維化的作用機(jī)制與其通過(guò)Notch 途徑抑制肝細(xì)胞EMT 過(guò)程有關(guān)。另有研究表明Meg8 通過(guò)抑制Notch 通路抑制了HSC 活化和EMT，從而抑制激活的HSC 中促纖維化和增殖基因的表達(dá)。

2.3 PI3K/AKT信號(hào)通路

PI3K/AKT 信號(hào)通路是蛋白質(zhì)合成的重要通路，可以調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物進(jìn)程。磷脂酰肌醇-3 羥基激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）可以被G 蛋白偶聯(lián)受體、蛋白酪氨酸激酶受體或Ras 蛋白激活；激活的PI3K 通過(guò)激活蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）即AKT，進(jìn)而激活下游信號(hào)分子mTOR。mTOR 作為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，負(fù)責(zé)對(duì)氨基酸、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、葡萄糖等刺激產(chǎn)生應(yīng)答，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活等生物進(jìn)程。

2.3.1 LncRNA 調(diào)控肝癌中的PI3K/AKT 信號(hào)通路 PI3K/AKT信號(hào)通路已被報(bào)道通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，是腫瘤機(jī)制研究的熱點(diǎn)［33］。目前遏制肝癌細(xì)胞增殖、遷移或侵襲是治療肝癌的有效途徑。研究表明，lncRNA通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路在肝癌中扮演著重要角色。Han 等［34］證實(shí)lncRNA CASC11 在肝癌組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲與遷移；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其致癌機(jī)制和PI3K/AKT 信號(hào)通路的參與有關(guān)。在HepG2 細(xì)胞中給予PI3K/AKT 信號(hào)通路的激活因子IGF-1 或敲除PI3K/AKT 信號(hào)通路的主要負(fù)向調(diào)節(jié)因子PTEN 后，細(xì)胞的遷移和侵襲能力得到提高；沉默CASC11 可以抑制肝癌細(xì)胞的EMT、IGF-1和PTEN 部分逆轉(zhuǎn)這一結(jié)果；以上結(jié)果證實(shí)了CASC11 通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT 信號(hào)通路參與肝癌發(fā)展，其可能是肝癌的潛在治療靶點(diǎn)。最近研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA FER1L4 通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/AKT 信號(hào)通路抑 制 肝 癌 細(xì) 胞 的 增 殖 和 遷 移［35］；lncRNA HAGLROS作為ceRNA 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-5095，靶向ATG12 調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡和自噬，機(jī)制可能與HAGLROS 激活PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)［36］。此外，有報(bào)道表明，lncRNA PTTG3P 作為肝癌預(yù)后的重要標(biāo)記物，可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，具體機(jī)制也與其激活肝癌細(xì)胞中的PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān)［37］。

2.3.2 LncRNA 調(diào)控肝纖維化中的PI3K/AKT 信號(hào)通路 PI3K/AKT信號(hào)通路在肝纖維化中發(fā)揮著重要作用，可以通過(guò)調(diào)節(jié)ECM 的合成與降解，促纖維化因子的表達(dá)以及HSC 的活化參與肝纖維化的形成。激活的PI3K/AKT 信號(hào)通路促進(jìn)HSC 的增殖，也可以通過(guò)調(diào)控c-FLIPL 的表達(dá)，抑制HSC 的凋亡。PTEN 作為PI3K/AKT 信號(hào)通路的主要負(fù)向調(diào)節(jié)因子，可以抑制PI3K 和AKT 磷酸化進(jìn)而抑制HSC 活化與增殖，是治療肝纖維化的有效靶點(diǎn)［38］。研究發(fā)現(xiàn)，有多種lncRNA 通過(guò)與PTEN 相互作用調(diào)控PI3K/AKT 信號(hào)通路進(jìn)而參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。Dong 等［39］研究表明，lncRNA GAS5 在肝纖維化組織和HSC 中表達(dá)均下調(diào)；過(guò)表達(dá)lncRNA GAS5 可以抑制HSC 的活化。研究表明，GAS5 充當(dāng)ceRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-23a，增強(qiáng)PTEN的表達(dá)，抑制PI3K磷酸化，使AKT、mTOR以及Snail的表達(dá)水平降低，從而抑制PI3K/AKT/mTOR/Snail 信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致E-鈣黏著蛋白表達(dá)水平升高，α-SMA 和COL1α1 表達(dá)降低，最終抑制肝纖維化，提示lncRNA GAS5/miR-23a 可能成為治療肝纖維化的有效分子靶標(biāo)。Yu等［40］發(fā)現(xiàn)HOTAIR 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-29b，使miR-29b 的表達(dá)降低，促使PTEN 甲基化增強(qiáng)，介導(dǎo)PI3K/AKT 信號(hào)通路從而加重肝纖維化。另外最近有研究發(fā)現(xiàn)H19 可以通過(guò)PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路促進(jìn)IGFBPrP1誘導(dǎo)的HSC活化，具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探究［41］。

2.3.3 LncRNA 調(diào)控非酒精性脂肪性肝病中的PI3K/AKT信號(hào)通路 非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是慢性肝病的最常見(jiàn)病因，后期可能發(fā)展為肝硬化或肝癌，是世界性的健康問(wèn)題［42］。NAFLD 通常與不健康的飲食、肥胖、高脂血癥和2 型糖尿病等有關(guān)。目前對(duì)NAFLD 的發(fā)病機(jī)制知之甚少。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT 信號(hào)通路是胰島素作用的主要信號(hào)傳導(dǎo)途徑之 一。胰 島 素 抵 抗（insulin resistance，IR）與NAFLD 的病因及病情發(fā)展密切相關(guān)，當(dāng)IR 發(fā)生時(shí)，胰島素對(duì)脂肪代謝的調(diào)節(jié)作用減弱，使血液中游離脂肪酸的攝取和三酰甘油合成增加，肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，肝細(xì)胞變性腫大從而導(dǎo)致脂肪肝形成。最近研究發(fā)現(xiàn)，IR 發(fā)生時(shí)，AKT 的蛋白表達(dá)水平失調(diào)；磷酸化AKT 被激活后，可以激活下游信號(hào)分子mTOR，mTOR 進(jìn)一步激活下游效應(yīng)蛋白S6K1，磷酸化S6 核糖體蛋白，促進(jìn)細(xì)胞蛋白合成以及誘發(fā)IR 的發(fā)生。LncRNA 之前已被報(bào)道在NAFLD 中表達(dá)失調(diào)，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT 信號(hào)通路可能與lncRNA 作用NAFLD 的機(jī)制相關(guān)。Wang 等［43］發(fā)現(xiàn)在NAFLD 大鼠中，lncRNA NEAT1的表達(dá)水平顯著升高。敲除NEAT1后可以抑制肝細(xì)胞中ACC 和FAS 的表達(dá)水平；抑制mTOR/S6K1信號(hào)通路后可以得到同樣的抑制效應(yīng)，提示NEAT1 可能通過(guò)mTOR/S6K1 信號(hào)通路介導(dǎo)大鼠NAFLD 發(fā)病過(guò)程。此外，最近有報(bào)道MEG3 通過(guò)LRP6 與miR-21 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，抑制mTOR 途徑，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積，加重NAFLD 病情［44］。由于目前關(guān)于lncRNA 作用NAFLD 的研究尚在起步階段，對(duì)其調(diào)控信號(hào)通路更是知之甚少，未來(lái)需要找到更多l(xiāng)ncRNA作用于NAFLD的信號(hào)通路。

2.4 Wnt/β-catenin信號(hào)通路

2.4.1 LncRNA 調(diào)控肝癌中的Wnt/β-catenin 信號(hào)通路 Wnt/β-catenin信號(hào)通路與肝癌的增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲密切相關(guān)。β-catenin 作為該通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力呈正相關(guān)；β-catenin 可以促進(jìn)腫瘤血管生成等方式參與肝癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移；Wnt/β-catenin信號(hào)通路還可通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡參與惡性腫瘤的發(fā)展。LncRNA 已被報(bào)道參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、遷移、侵襲、凋亡等過(guò)程。越來(lái)越多的證據(jù)表明，lncRNA 可能通過(guò)作用于Wnt/β-catenin 信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)肝癌。例如：Liang 等［45］發(fā)現(xiàn)lncRNANEF 可以與β-catenin 相互作用，增加GSK3β 與βcatenin 的結(jié)合，促進(jìn)β-catenin 抑制性磷酸化，從而抑制Wnt/β-catenin 信號(hào)通路并激活FOXA2 的表達(dá)，進(jìn)而拮抗肝細(xì)胞EMT 和肝癌細(xì)胞的遷移。Zhang 等［46］發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)lncRNA HOTAIRM1 可以抑制肝癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡啟動(dòng)子Bax 的表達(dá)，抑制凋亡抑制因子Bcl-2 和Bid 的表達(dá)從而誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。機(jī)制研究表明，Wnt 通路相關(guān)蛋白，包括 Akt1、pGSK-3β 和 β -catenin 在 lncRNA HOTAIRM1 過(guò)表后表達(dá)顯著下降；結(jié)合Wnt 通路可以調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用，提示lncRNA HOTAIRM1 可能通過(guò)抑制Wnt 信號(hào)通路促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而調(diào)控肝癌進(jìn)程。Zhu等［47］發(fā)現(xiàn)敲除lncRNA CRNDE 可以在體內(nèi)抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲；體外抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)揭示CRNDE 通過(guò)激活Wnt/β-catenin 信號(hào)通路促進(jìn)肝癌細(xì)胞的EMT 過(guò)程從而在肝癌中發(fā)揮作用。TICs 具有自我更新和分化特性，有助于腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。Fu 等［48］發(fā)現(xiàn)，lncRNA linc00210在肝臟TICs 中高表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)lncRNA linc00210 通 過(guò) 與 CTNNBIP1 相 互 作 用 使CTNNBIP1與β-catenin 的結(jié)合受抑，從而激活Wnt/β-catenin 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)肝臟TICs 的自我更新，加快肝腫瘤發(fā)展進(jìn)程。以上結(jié)果提示W(wǎng)nt/βcatenin 信號(hào)通路是lncRNA 調(diào)節(jié)肝癌的一個(gè)重要途徑，靶向Wnt/β-catenin 信號(hào)通路可能成為治療肝癌的新方向。

2.4.2 LncRNA 調(diào)控肝纖維化中的Wnt/β-catenin信號(hào)通路 Wnt 信號(hào)通路在肝纖維化中發(fā)揮著重要作用，可以通過(guò)經(jīng)典β-catenin 依賴信號(hào)通路和非經(jīng)典β-catenin 獨(dú)立通路調(diào)節(jié)HSCs 的活化與增殖。當(dāng)Wnt 受體激活時(shí)，與相應(yīng)受體結(jié)合，活化胞內(nèi)Dishevelled 蛋白，促使Axin 結(jié)合LRP，抑制糖原合成激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β）活性，胞漿內(nèi)β-catenin 積累；持續(xù)激增的βcatenin 入核與轉(zhuǎn)錄因子家族TCF/LEF 結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，激活下游纖維化相關(guān)基因，促進(jìn)HSC 活化，進(jìn)而調(diào)節(jié)肝纖維化。LncRNA 在肝纖維化中異常表達(dá)，可以通過(guò)多種機(jī)制作用于肝纖維化。目前研究表明，lncRNA 主要以充當(dāng)ceRNA 的方式調(diào)節(jié)Wnt 信號(hào)通路介導(dǎo)肝纖維化。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，沉默SNHG7 可以抑制HSC 活化和細(xì)胞增殖，減少膠原蛋白生成。機(jī)制研究表明，SNHG7 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-378a-3p，增加DVL2 胞內(nèi)含量，提高TCF 活性，減少磷酸化β-catenin 和GSK-3β 表達(dá)，從而激活Wnt/β-catenin 信號(hào)通路，誘導(dǎo)HSC 活化，調(diào)節(jié)肝纖維化［49］。先前已報(bào)道lncRNA-ATB 可以通過(guò)作用于TGF-β 通路參與肝纖維化的發(fā)展，F(xiàn)u等［50］進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，lncRNA-ATB 還可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-200a，通 過(guò)lncRNA-ATB/miR-200a/β-catenin軸調(diào)控HSC 的激活，進(jìn)而介導(dǎo)HCV 相關(guān)性肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。最近研究表明，lincRNA-p21 通過(guò)MicroRNA-17-5p 介導(dǎo)的Wnt/β-Catenin 通路抑制了HSC的活化［51］。

2.5 MAPK信號(hào)通路

2.5.1 LncRNA 調(diào)控肝癌中的MAPK 信號(hào)通路絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)通路，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、侵襲與遷移等多種生理過(guò)程，其主要的MAPK 成員包括：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）和p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）［52］。已知ERK 信號(hào)通路主要調(diào)控細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移；JNK信號(hào)通路主要調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖與凋亡。MAPK 信號(hào)通路已被發(fā)現(xiàn)參與眾多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，尤其與肝癌密切相關(guān)。已報(bào)道肝癌患者中高表達(dá)的炎癥因子與趨化因子激活ERK 信號(hào)通路，導(dǎo)致肝細(xì)胞異常增殖，加重肝癌的惡性發(fā)展；致癌物多環(huán)芳香烴抑制肝癌細(xì)胞中MAPK5 的表達(dá)，導(dǎo)致p38 MAPK 信號(hào)通路受到抑制，肝癌細(xì)胞凋亡減少，細(xì)胞持續(xù)增殖。已報(bào)道lncRNA 可以通過(guò)調(diào)控MAPK 信號(hào)通路作用于肝癌。Bao 等［53］發(fā)現(xiàn)lncRNA Igf2as 在HCC 細(xì)胞和組織中表達(dá)上調(diào)，敲除Igf2as 可以顯著抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Igf2as的表達(dá)與ERK 激活之間呈正相關(guān)；在被si-Igf2as 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，細(xì)胞外ERK/MAPK 信號(hào)通路受到抑制。以上結(jié)果表明lncRNA Igf2as 可能主要通過(guò)調(diào)控ERK/MAPK 信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的 增 殖 和 侵 襲。此 外，Peng 等［54］發(fā) 現(xiàn)lncRNA CCHE1 在肝癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)與細(xì)胞增殖。進(jìn)一步敲除CCHE1 后，肝癌細(xì)胞中的ERK/MAPK 途徑被抑制，細(xì)胞的生長(zhǎng)與凋亡抑制得到減弱，提示CCHE1 可作為肝癌預(yù)后的生物標(biāo)志物。

2.5.2 LncRNA 調(diào)控非酒精性脂肪性肝病中的MAPK 信號(hào)通路 MAPK 信號(hào)通路除了在肝癌中發(fā)揮作用，在NAFLD的形成、發(fā)展中所起的作用也受到越來(lái)越多的關(guān)注。已報(bào)道游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）、炎癥因子、細(xì)胞內(nèi)的高氧化應(yīng)激水平均可激活JNK 信號(hào)通路，活化的JNK 通路通過(guò)調(diào)節(jié)肥胖，IR 以及細(xì)胞凋亡介導(dǎo)NAFLD 的病程；JNK1 能加重NAFLD 中的肝損傷，且與IR 水平呈正相關(guān)；過(guò)表達(dá)AMPKa1 抑制p38 MAPK 的激活，進(jìn)而可能作為治療NAFLD 的新靶點(diǎn)。研究表明lncRNA 調(diào)控MAPK 信號(hào)通路參與NAFLD 的發(fā)生發(fā)展。Shen 等［55］研究發(fā)現(xiàn)，在NAFLD 大鼠中l(wèi)ncRNA HULC 的表達(dá)顯著上調(diào)，抑制HULC 的表達(dá)可以改善NAFLD 大鼠組織中的肝脂質(zhì)沉積，肝纖維化以及減少肝細(xì)胞凋亡，但調(diào)控HULC的機(jī)制表達(dá)仍然未知。進(jìn)一步對(duì)機(jī)制進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)抑制HULC 可以抑制NAFLD 大鼠肝臟組織中的MAPK 信號(hào)通路；抑制p38 和JNK 可以改善肝臟脂質(zhì)病理狀態(tài)和肝纖維化，減少肝細(xì)胞凋亡，表明HULC通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路參與NAFLD病程。

綜上，肝臟疾病中涉及的信號(hào)通路眾多，lncRNA通過(guò)多種方式調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)而參與調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等多種生物學(xué)進(jìn)程，介導(dǎo)肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展（表1）。明確lncRNA調(diào)控信號(hào)通路機(jī)制將有助于闡明肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制。

3 結(jié)語(yǔ)與展望

肝臟疾病涉及的信號(hào)通路眾多，通路之間的調(diào)控關(guān)系比較復(fù)雜，對(duì)肝臟疾病中的信號(hào)通路進(jìn)行研究，有助于闡明肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制，找到新的作用靶點(diǎn)。近年來(lái)lncRNA 是肝臟疾病的研究熱點(diǎn)，也取得了一定的進(jìn)展。例如研究發(fā)現(xiàn)在H19調(diào)控序列的控制下，構(gòu)建表達(dá)白喉毒素A 鏈基因的單啟動(dòng)子載體可以治療膀胱癌，并完成了Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗(yàn)，這可能同樣適用于高表達(dá)H19 的肝癌治療；促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的lncRNA LALR1 在肝損傷后的肝再生過(guò)程中發(fā)揮治療優(yōu)勢(shì)；人肝纖維化中顯著下調(diào)的MEG3在HSCs活化和肝纖維化發(fā)展中起重要作用，有望成為逆轉(zhuǎn)肝纖維化的新潛在靶點(diǎn)。由此可見(jiàn)，靶向lncRNA 治療肝臟疾病為研究者提供了新方向，需要進(jìn)一步明確lncRNA 作用肝臟疾病的分子機(jī)制。目前研究證實(shí)lncRNA 通過(guò)多種作用機(jī)制包括調(diào)控各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，但是目前對(duì)lncRNA 調(diào)控信號(hào)通路的研究尚在起步階段，尤其在肝癌和肝纖維化中，研究還較為深入，但在非酒精性脂肪性肝病，肝硬化等其他疾病中的研究較少。在未來(lái)分析技術(shù)和實(shí)驗(yàn)條件發(fā)展的基礎(chǔ)上，需要進(jìn)一步探究lncRNA 調(diào)控各種信號(hào)通路的機(jī)制以及不同信號(hào)通路之間的復(fù)雜調(diào)控關(guān)系，以闡明lncRNA 作用肝臟疾病的分子機(jī)制，為臨床診斷治療肝臟疾病提供新的理論基礎(chǔ)。

表1 LncRNA調(diào)控信號(hào)通路介導(dǎo)肝臟疾病