摘要：細(xì)胞學(xué)檢查是診斷漿膜腔積液的重要手段，不僅可以評(píng)估疾病的良惡性，還可以用于判斷腫瘤的類型、來(lái)源、預(yù)后等方面的信息。本文主要從制片技術(shù)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、DNA倍體分析、免疫組化和分子病理在漿膜腔積液中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，旨在為漿膜腔積液的臨床診治提供參考。

關(guān)鍵詞：漿膜腔積液;腫瘤標(biāo)志物;免疫細(xì)胞化學(xué);DNA倍體

中圖分類號(hào)：R446.8? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.13.009

文章編號(hào)：1006-1959（2020）13-0030-05

Application Status of Cytological Diagnosis in Serous Cavity Effusion

LIANG Hai-hong

（Department of Pathology，Tianjin Port Hospital，Tianjin 300456）

Abstract：Cytological examination is an important method for diagnosing serous cavity effusion. It can not only evaluate the benign and malignant diseases， but also be used to judge the type， source， and prognosis of tumors. This article mainly reviews the application of preparation technology， tumor marker detection， DNA ploidy analysis， immunohistochemistry and molecular pathology in serous cavity effusion， aiming to provide reference for clinical diagnosis and treatment of serous cavity effusion.

Key words：Serous cavity effusion;Tumor markers;Immunocytochemistry;DNA ploidy

漿膜腔積液（serous effusion）是指胸腔、腹腔和心包腔內(nèi)過(guò)多液體積聚形成，是臨床上常見的良性或惡性疾病的并發(fā)癥。漿膜腔積液良、惡性的診斷及鑒別診斷是臨床的一個(gè)難題，細(xì)胞病理學(xué)檢查是其診斷的重要方法。細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)方法在不斷改進(jìn)，每種方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，近幾年DNA倍體分析方法的應(yīng)用可以發(fā)現(xiàn)早期病變的腫瘤細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)可以幫助判斷腫瘤的類型及來(lái)源，分子病理可以幫助基因診斷及治療，多種方法聯(lián)合應(yīng)用可提高診斷的準(zhǔn)確率。本文對(duì)近年來(lái)漿膜腔積液診斷方法作一綜述，旨在為該病的診斷與鑒別診斷提供參考。

1傳統(tǒng)涂片和液基薄層制片

合格的細(xì)胞涂片是細(xì)胞病理學(xué)診斷的基礎(chǔ)，細(xì)胞涂片的主要制備方法包括兩種：傳統(tǒng)涂片法和液基薄層制片法。將送檢積液標(biāo)本離心后手工制成傳統(tǒng)細(xì)胞涂片HE染色;也可以上機(jī)進(jìn)行液基薄層制片，巴氏染色;兩種方法均可通過(guò)顯微鏡觀察初步做出有無(wú)惡性細(xì)胞或非典型細(xì)胞存在的診斷。傳統(tǒng)涂片法是簡(jiǎn)單易行的一種方法，省時(shí)，成本低，基層醫(yī)院即可實(shí)行;缺點(diǎn)：由于是人工涂片，會(huì)出現(xiàn)厚薄不均、大量紅細(xì)胞及黏液混雜，造成背景不清晰，陽(yáng)性檢出率低。在整個(gè)制作涂片過(guò)程中，取樣最為重要，根據(jù)標(biāo)本性質(zhì)的不同采用不同的處理方式是制作優(yōu)質(zhì)涂片的關(guān)鍵[1]。有研究認(rèn)為固定是制備合格細(xì)胞涂片的前提條件，涂片后即使在空氣中暴露短短30s，足以使部分細(xì)胞發(fā)生變性、腫脹，染色質(zhì)不清，若干燥后再固定則所有細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)退變。因此需要及時(shí)濕固定，即涂片后立即置入95%乙醇中，且涂片過(guò)程要迅速，不宜在空氣中暴露[2]。液基薄層細(xì)胞涂片是對(duì)傳統(tǒng)涂片的一種改進(jìn)，成本相對(duì)較高，但是制片過(guò)程采取了濕固定，具有細(xì)胞核、漿結(jié)構(gòu)清晰，均勻分布于玻片，薄層，巴氏染色鮮艷，血液和粘液成分少，背景清晰等優(yōu)點(diǎn)，利于顯微鏡觀察診斷。禹樂等[3]研究顯示，液基薄層細(xì)胞涂片法惡性腫瘤確診率為30.8%，高于傳統(tǒng)細(xì)胞涂片法的11.2%，其在胸腹水診斷中可以提高惡性腫瘤的確診率，且涂片質(zhì)量、染色效果均優(yōu)于常規(guī)涂片法。

2腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)

腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的一些物質(zhì)，可以在惡性腫瘤患者的血液、尿液、糞便或其他體液中檢出。腫瘤標(biāo)志物在腫瘤中的檢測(cè)和治療中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[4]。血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是最常用的方法，近年來(lái)漿膜腔積液腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)也越來(lái)越受重視。有研究比較患者血清及漿膜腔積液中腫瘤標(biāo)志物的的含量，發(fā)現(xiàn)漿膜腔積液中腫瘤標(biāo)志物明顯高于血清中含量[5]。

癌胚抗原（CEA）是一種臨床上常用的腫瘤標(biāo)志物，常見于胃腸道惡性腫瘤，也見于乳腺癌、肺癌、宮頸癌、卵巢癌及其他一些非惡性病變，屬于廣譜腫瘤標(biāo)志物。有研究顯示惡性組胸腔積液及血清腫瘤標(biāo)志物均高于良性組和對(duì)照組，CEA是敏感性最高（41.6%），特異性最高（100%），準(zhǔn)確率最高（74.1%）[6];胸腔積液CEA診斷非小細(xì)胞肺癌的敏感性為100%，胸腔積液和陰性胸腔細(xì)胞學(xué)患者胸腔積液CEA水平升高提示需要更具侵襲性的手術(shù)（如VATS引導(dǎo)的活檢），而低胸腔積液CEA可能支持隨訪[7]。有研究指出CEA是區(qū)分良惡性胸腔積液的最佳單一指標(biāo)，CEA和CA15-3比CA125和CA19-9更可靠地鑒別良惡性胸腔積液[8]。CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的片段，臨床上主要用于非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的診斷[9]，研究顯示胸腔積液CYFRA 21-1加CEA、胸腔積液CYFRA21-1加血清CYFRA21-1的并行診斷大大提高了惡性胸腔積液診斷的敏感性和準(zhǔn)確性[10]。胸腔積液腫瘤標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1和CA19-9聯(lián)合應(yīng)用可將診斷肺腺癌敏感性提高到95.06%[11]。CYFRA21-1與CA125聯(lián)合應(yīng)用診斷惡性腹水的敏感性為65.5%，特異性為96.5%，提高了惡性腹腔積液的診斷準(zhǔn)確性[12]。sB7-H4即可溶性B7-H4（Soluble B7-H4）屬于B7家族成員，主要通過(guò)負(fù)向調(diào)控相關(guān)T細(xì)胞免疫過(guò)程而誘發(fā)癌變[13]。有研究表明sB7-H4是鑒別良性胸腔積液和惡性胸腔積液的一個(gè)有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物并且sB7-H4與CEA聯(lián)合檢測(cè)胸腔積液的敏感性為90.91%，特異性為97.62%[14]。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4（CTLA-4）作為T細(xì)胞活化的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，與許多惡性疾病有著密切的關(guān)系。研究表明CTLA-4診斷惡性胸腔積液的敏感性和特異性分別為58.30%和83.30%，CTLA-4、CEA和CYFRA 21-1聯(lián)合應(yīng)用可使診斷敏感性提高到88.89%[15]。

因此早期進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)惡性漿膜腔積液的診斷有重要意義，多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用可相互補(bǔ)充，從而提高良惡性漿膜腔積液鑒別診斷的敏感性和特異性。最新研究認(rèn)為腹腔積液CEA對(duì)大腸癌患者的患腹膜癌幾率和預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值[16]。有學(xué)者對(duì)10836名乳腺癌婦女進(jìn)行隊(duì)列研究，發(fā)現(xiàn)術(shù)前檢測(cè)CA15-3和CEA水平可能有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的生存率，并為luminal A和基底樣亞型患者提供個(gè)性化的治療策略[17]。可見腫瘤標(biāo)志物不僅輔助病理診斷，而且對(duì)惡性腫瘤的預(yù)后和治療有重要意義。

3 DNA倍體分析

每個(gè)正常的體細(xì)胞核內(nèi)有23對(duì)染色體，只有增殖期的細(xì)胞才會(huì)有染色體的復(fù)制。在生理狀態(tài)下，人體絕大多數(shù)的細(xì)胞處于靜止期，除生殖細(xì)胞外，染色體數(shù)均為二倍體，DNA含量恒定。當(dāng)細(xì)胞處于G1/G0期時(shí)，細(xì)胞DNA指數(shù)為1或2C（二倍體細(xì)胞）;當(dāng)細(xì)胞處于增殖期（G2/M期）時(shí)，DNA指數(shù)可倍增，表達(dá)為2或4C（多為四倍體細(xì)胞）。當(dāng)細(xì)胞受到致癌物刺激或DNA損傷時(shí)，導(dǎo)致細(xì)胞基因突變或染色體畸形斷裂，細(xì)胞增殖早期細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)DNA含量，結(jié)構(gòu)及染色體數(shù)量改變，即產(chǎn)生單條或多條染色體，成為異倍體，最終發(fā)展為細(xì)胞形態(tài)異常和惡性腫瘤[18]。因此，DNA異倍體的出現(xiàn)是染色體異常變化的標(biāo)志，對(duì)胸腹水中細(xì)胞進(jìn)行DNA倍體分析，不僅可以觀察正常細(xì)胞的周期變化，還可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)惡性增殖的腫瘤細(xì)胞，可以用來(lái)鑒別診斷胸腹水的良惡性[19]。目前，把DNA倍體分析應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)的方法有兩種：流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析（flow cytometry，F(xiàn)CM-DNA）和細(xì)胞圖像DNA倍體分析（image cytometry，ICM-DNA）。

3.1流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析? 先將積液制成單細(xì)胞懸液，然后加入DNA倍體分析試劑盒中的細(xì)胞膜穿透液，和PIN熒光染色劑，制成符合條件的細(xì)胞懸液，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA細(xì)胞周期分析（G0/G1，S、G2/M期）及DI測(cè)定。利用激光激發(fā)結(jié)合在細(xì)胞核內(nèi)DNA上的熒光染料，通過(guò)自動(dòng)收集并多參數(shù)綜合作用，得到的熒光強(qiáng)度反映DNA的含量，以相對(duì)熒光強(qiáng)度做為橫軸，以細(xì)胞數(shù)為縱軸，即可得到一個(gè)直方圖[20]。測(cè)定結(jié)果以單參數(shù)直方圖表示。FCM檢測(cè)良、惡性漿膜腔積液的判斷標(biāo)準(zhǔn)[21]：正常二倍體細(xì)胞的DI值為0.9～1.1，其余均為異倍體即為惡性;有一個(gè)突出的四倍體峰和大于15%的S期細(xì)胞，并伴有G0/G1期變異系數(shù)（CV）值大于9%為惡性;G0/G1期CV值增大，并伴有大于10%～15%的S期和一個(gè)突出的四倍體峰，為可疑惡性。有研究顯示，用流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析檢測(cè)漿膜腔積液的靈敏度為78.6%，特異性為80.0%，準(zhǔn)確性為79.2%，明顯高于傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡檢查[22]。流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析相對(duì)細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)診斷良惡性漿膜腔積液的靈敏度更高，可作為細(xì)胞學(xué)檢查的補(bǔ)充[13]。但其也有一定的缺點(diǎn)：費(fèi)用較昂貴，需要檢驗(yàn)技術(shù)較高，檢測(cè)后樣本不能保存并進(jìn)行重復(fù)性檢測(cè)，不利于臨床普及。

3.2細(xì)胞圖像DNA倍體分析? 取漿膜腔積液標(biāo)本液基制片，應(yīng)用Feulgen染色法對(duì)細(xì)胞核染色，其中的Schiff試劑可與DNA分子特異性結(jié)合而著色，從而根據(jù)染色深淺及著色顆粒在核內(nèi)分布等因素衡量DNA含量。細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)可對(duì)每例標(biāo)本中4000個(gè)以上細(xì)胞核進(jìn)行自動(dòng)聚焦，測(cè)定每個(gè)細(xì)胞核的132個(gè)核特征，自動(dòng)進(jìn)行細(xì)胞分類和計(jì)數(shù)，計(jì)算出細(xì)胞核的DNA倍體變化，確定是否有病變細(xì)胞及其所占比例。當(dāng)DI值在1.1～1.9，2.1～2.8的細(xì)胞被認(rèn)為是異倍體細(xì)胞，當(dāng)異倍體細(xì)胞DI值在1.1～1.9形成峰值，或有3個(gè)以上細(xì)胞DI值>2.5（除外整倍體）;或細(xì)胞DI=2的細(xì)胞數(shù)占被測(cè)細(xì)胞總數(shù)10%以上時(shí)，即可診斷為惡性[23]。所有被檢測(cè)細(xì)胞中DNA倍體異常細(xì)胞，必須由人工對(duì)每一個(gè)異倍體細(xì)胞進(jìn)行仔細(xì)核實(shí)，以排除系統(tǒng)將重疊的細(xì)胞核或垃圾誤認(rèn)為異常細(xì)胞。有研究表明，在可疑性滲出液中，ICM-DNA的靈敏度可能高達(dá)87.5%，在惡性腫瘤的檢測(cè)中，ICM-DNA優(yōu)于流式細(xì)胞術(shù)[24]。也有研究表明細(xì)胞圖像DNA倍體分析對(duì)惡性積液的診斷敏感性為88.3%，特異性為100%，是一種簡(jiǎn)單、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)的惡性積液輔助診斷方法[25]。因此DNA倍體分析可作為漿膜腔積液良惡性分析的重要指標(biāo)，其陽(yáng)性結(jié)果可為以作為臨床診療依據(jù)。與流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析比較，細(xì)胞圖像DNA定量分析具有細(xì)胞玻片可長(zhǎng)期保存并重復(fù)檢測(cè)、檢測(cè)敏感性更高、操作簡(jiǎn)單且人為因素影響小、價(jià)格適中、利于臨床普及等優(yōu)點(diǎn)。

4免疫組織化學(xué)

免疫組織化學(xué)是組織病理學(xué)最常用的輔助診斷技術(shù)，可以幫助判斷腫瘤的良惡性、組織來(lái)源及組織學(xué)亞型。近幾年越來(lái)越多的研究集中在把免疫組織化學(xué)應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)上。常用免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）檢測(cè)的抗體有：上皮源性標(biāo)記CK（Pan）、EMA、MOC-31、BerEP4等;間皮細(xì)胞標(biāo)記CK5/6、WT-1、Calretinin、HBME-1、MC和D2-40等;淋巴細(xì)胞來(lái)源標(biāo)記LCA、CD3、CD20等;肺源性腫瘤CK7、TTF-1、NapsinA等;卵巢來(lái)源PAX-8、CK7、CA125、WT-1等;乳腺源性GATA3、GCDFP-15、Mammaglobin、E-cadherin等;胃腸道來(lái)源CEA、CDX-2、CK20等。目前為止沒有一種抗體對(duì)間皮或上皮細(xì)胞完全敏感或特異，在判斷每種細(xì)胞來(lái)源中，至少需兩種抗體聯(lián)合應(yīng)用。解建軍等[26]研究得出D2-40、Calretinin、MOC-31和CEA四種抗體聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)于間皮性病變和轉(zhuǎn)移腺癌診斷的靈敏度和特異度分別達(dá)到99.2%和100.0%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于任何一種抗體的單獨(dú)應(yīng)用或其他抗體的組合應(yīng)用，可作為一線抗體聯(lián)合應(yīng)用。目前為止把免疫組織化學(xué)應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)主要有三種方法：①細(xì)胞涂片退染后，行ICC染色;②同時(shí)制備多張涂片進(jìn)行ICC染色;③細(xì)胞塊加ICC染色。

4.1細(xì)胞涂片退染? 經(jīng)HE染色的涂片清除蓋玻片，置入二甲苯中脫膠，梯度乙醇（從高濃度至低濃度）水化，蒸餾水洗滌;1%的鹽酸乙醇浸泡3 min，水洗后待用做ICC。趙銀環(huán)等[27]通過(guò)利用唇膏和金剛筆正反劃分區(qū)域在細(xì)胞HE涂片褪色后做ICC標(biāo)記，最多可以用八分格在一張涂片上做8項(xiàng)ICC染色，其定位準(zhǔn)確。但是常規(guī)涂片做ICC時(shí)，常會(huì)出現(xiàn)背景深、非特異性著色、出現(xiàn)假陽(yáng)性，易掉片等缺點(diǎn)，因此操作有一定難度。

4.2制備多張涂片行ICC染色? 在薄層液基制片的基礎(chǔ)上行ICC染色，同一標(biāo)本可制作多張涂片，一張用于HE染色，其余用于ICC染色，先存于-20℃冰箱備用。根據(jù)HE病變特點(diǎn)判斷ICC的抗體的選擇。與常規(guī)涂片相比，液基制片具有背景清晰，細(xì)胞分布均勻，厚薄一致，且同一標(biāo)本可制作多張涂片，便于抗體組合應(yīng)用。趙樂通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用薄層液基涂片及ICC相結(jié)合方法，采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六種抗體組合應(yīng)用對(duì)胸腹水中腺癌細(xì)胞與增生間皮細(xì)胞鑒別診斷很有幫助[28]。但由于液基制片后，每張切片細(xì)胞的種類和分布會(huì)有所差異，可致使抗體的選擇應(yīng)用準(zhǔn)確率降低。

4.3細(xì)胞塊加ICC技術(shù)? 對(duì)胸腹腔積液進(jìn)行離心，然后取沉淀物包埋，對(duì)于肉眼有凝集物者可直接包埋，然后脫水，石蠟包埋成細(xì)胞塊。與傳統(tǒng)涂片制片相比，細(xì)胞塊切片HE染色提供了更好的與組織學(xué)非常相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，從而提高了細(xì)胞診斷的敏感性[29]。細(xì)胞蠟塊能長(zhǎng)期保存及重復(fù)使用，可以繼續(xù)做ICC及基因檢測(cè)，更能有效滿足臨床診斷和確定治療方案的要求。細(xì)胞蠟塊聯(lián)合ICC可以連續(xù)多張切片，有利于多種抗體組合運(yùn)用;背景干凈，細(xì)胞集中，定位準(zhǔn)確，可重復(fù)性高;可以幫助細(xì)胞分型，降低了漏診率。細(xì)胞塊結(jié)合ICC技術(shù)明顯提高了胸水惡性腫瘤的檢出率，同時(shí)為靶向治療尤其是腺癌的分子遺傳學(xué)分析提供了材料[30]。Woo CG等[31]研究得出常規(guī)應(yīng)用細(xì)胞蠟塊和CEA染色結(jié)合液基細(xì)胞學(xué)可提高惡性胸腔積液診斷的敏感性和特異性，提高診斷的準(zhǔn)確性。

林梅英等[32]研究認(rèn)為細(xì)胞蠟塊檢測(cè)雖具有可重復(fù)性和可長(zhǎng)期保存的優(yōu)點(diǎn)，但在實(shí)際工作中常會(huì)遇到細(xì)胞數(shù)量少或者難以發(fā)現(xiàn)涂片中可疑細(xì)胞團(tuán)的情況，這時(shí)就需要使用涂片褪色后行免疫組化染色的方法幫助診斷。因此以上3種方法可以互相配合使用，能夠提取細(xì)胞蠟塊的標(biāo)本首選細(xì)胞蠟塊結(jié)合ICC診斷，若細(xì)胞沉渣過(guò)少，推薦同時(shí)應(yīng)用傳統(tǒng)涂片或TCT退染兩種方法，以提高陽(yáng)性率[33]。

5分子病理

隨著分子病理學(xué)的發(fā)展，使得惡性漿膜腔積液患者尤其是晚期不能進(jìn)行手術(shù)的患者的對(duì)癥治療得以實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞蠟塊成為能進(jìn)一步進(jìn)行分子檢測(cè)，明確治療方案，判斷預(yù)后，可進(jìn)行回顧性研究的材料?，F(xiàn)就目前常用的分子檢測(cè)技術(shù)總結(jié)如下。

5.1 FISH技術(shù)? 是利用已知核酸序列制備探針，先以非放射性物質(zhì)標(biāo)記或用熒光素直接標(biāo)記探針，探針與靶DNA進(jìn)行雜交，再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)連接上熒光素標(biāo)志物，然后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號(hào)，對(duì)標(biāo)本中待測(cè)核酸進(jìn)行定性、定量和定位分析的方法。有學(xué)者用FISH檢測(cè)了137例NSCLC患者胸腔積液細(xì)胞蠟塊間變性淋巴瘤激酶（ALK）基因重排情況，結(jié)果有11.7%發(fā)生了ALK重排，認(rèn)為FISH檢測(cè)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中的ALK基因重排是篩選NSCLC適合靶向治療晚期患者的敏感方法[34]。

5.2 RT-PCR? 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄（RT）將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，然后通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增cDNA。常見應(yīng)用包括表達(dá)基因檢測(cè)、轉(zhuǎn)錄物變異檢測(cè)，以及克隆和測(cè)序用cDNA模板制備。Nakamichi S等[35]采用RT-PCR方法對(duì)肺癌患者的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行間變性淋巴瘤激酶（ALK）易位分析，發(fā)現(xiàn)3%陽(yáng)性，RT-PCR陽(yáng)性的4份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行IHC和FISH檢測(cè)，均為陽(yáng)性，認(rèn)為RT-PCR是檢測(cè)原發(fā)性肺癌細(xì)胞ALK易位的一種有效方法。ALK抑制劑克唑替尼和阿來(lái)替尼均可用于晚期ALK陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌患者的一線治療，客觀緩解率和無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間顯著優(yōu)于含鉑化療，并改善患者的生活質(zhì)量[36]。

5.3第二代測(cè)序（NGS）? 利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補(bǔ)的拷貝。在每個(gè)反應(yīng)中，一個(gè)可以特異性識(shí)別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動(dòng)DNA合成，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，脫氧核糖核苷酸或簡(jiǎn)單的核苷酸是一個(gè)接一個(gè)的與模版配對(duì)。Gornjec A等[37]用第二代測(cè)序-NGS法研究輸卵管卵巢高級(jí)別漿液性癌BRCA1/2基因突變中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)標(biāo)本BRCA1/2突變檢測(cè)結(jié)果一致性為100%，具有足夠比例腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本可用于HGSC患者BRCA1/2基因突變分析，并能更快地處理基因分型，而BRCA突變的患者可以用聚（ADP-核糖）聚合酶抑制劑（PARPI）治療。

6總結(jié)

對(duì)良惡性漿膜腔積液的診斷及鑒別診斷是細(xì)胞學(xué)研究的重點(diǎn)課題，單靠一項(xiàng)指標(biāo)對(duì)惡性漿膜腔積液的診斷都存在誤診和漏診的問題，為提高對(duì)惡性漿膜腔積液的診斷率，一般提倡多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)并綜合分析。因此在細(xì)胞學(xué)檢測(cè)作為基礎(chǔ)，聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、DNA倍體分析，細(xì)胞蠟塊和免疫組化多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可達(dá)到提高診斷準(zhǔn)確率的目的。分子技術(shù)的發(fā)展有效指導(dǎo)了腫瘤的分子靶向治療，為惡性腫瘤患者提供了一條新的診斷和治療途徑。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳肖霞.探討如何制作優(yōu)質(zhì)胸腹水涂片[J].醫(yī)學(xué)信息，2015，28（21）：337.

[2]王全志，丁偉，田少華.漿膜腔脫落細(xì)胞學(xué)制片方法質(zhì)量控制的對(duì)比研究[J].診斷病理學(xué)雜志，2015，22（1）：60-62.

[3]禹樂，孟加榕，朱啟淦，等.液基薄層細(xì)胞涂片在胸腹水診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，48（2）：149-152.

[4]Faria SC，Sagebiel T，Patnana M，et al.Tumor markers：myths and facts unfolded[J].Abdominal Radiology，2018（44）：1575-1600.

[5]張盟，王宗蘭，楊東昌，等.腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在良惡性胸腹水鑒別價(jià)值研究[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志，2015，38（4）：340-342.

[6]Pasaoglu G，Zamani A，Can G，et al.Diagnostic Value Of CEA，CA19-9，CA125 And CA15-3 Levels In Malignant Pleural Fluids[J].European Journal of General Medicine，2015，4（4）：165-171.

[7]Tozzoli R，Basso SM，D'Aurizio F，et al.Evaluation of predictive value of pleural CEA in patients with pleural effusions and histological findings：A prospective study and literature review[J].Clin biochem，2016，49（16-17）：1227-1231.

[8]Zhai K，Wang W，Wang Y，et al.Diagnostic accuracy of tumor markers for malignant pleural effusion：a derivation and validation study[J].J Thorac Dis，2017，9（12）：5220-5229.

[9]Kanaji N，Kadota K，Tadokoro A，et al.Serum CYFRA 21-1 but not Vimentin is Associated with Poor Prognosis in Advanced Lung Cancer Patients[J].Open Respir Med J，2019（13）：31-37.

[10]Gu Y，Qiao X，Wang L，et al.The diagnostic value of parallel detection of cytokeratin 19 fragment-based tumor markers in malignant pleural effusion：a systematic review and metaanalysis[J].Biomedical Research，2017，28（18）：8105-8114.

[11]Feng M，Zhu J，Liang L，et al.Diagnostic value of tumor markers for lung adenocarcinoma-associated malignant pleural effusion：a validation study and meta-analysis[J].Int J Clin Oncol，2017，22（2）：283-290.

[12]Trapé J，Gurt G，F(xiàn)ranquesa J，et al.Diagnostic Accuracy of Tumor Markers CYFRA21-1 and CA125 in the Differential Diagnosis of Ascites[J].Anticancer research，2015，35（10）：5655-5660.

[13]Sica GL，Choi IH，Zhu G，et al.B7-H4，a molecule of the B7 family，negatively regulates T cell immunity[J].Immunity.2003，18（6）：849-861.

[14]Jing X，Wei F，Li J，et al.Diagnostic value of soluble B7-H4 and carcinoembryonic antigen in distinguishing malignant from benign pleural effusion[J].Clin Respir J，2018，12（3）：986-990.

[15]Chen M，Xie S，Wan C，et al.Diagnostic performance of CTLA-4，carcinoembryonic antigen and CYFRA 21-1 for malignant pleural effusion[J].Postgrad Med，2017，129（6）：644-648.

[16]Kim BC，Bae JH，Park SM，et al.Is ascites CEA a risk factor for peritoneal carcinomatosis in colorectal cancer：a long-term follow-up study[J].Int J Colorectal Dis，2020，35（1）：147-155.

[17]Li J，Liu L，F(xiàn)eng Z，et al.Tumor markers CA15-3，CA125，CEA and breast cancer survival by molecular subtype：a cohort study[J].Breast Cancer，2020，27（4）：621-630.

[18]Gordon DJ，Resio B，Pellman D.Causes and consequences of aneuploidy in cancer[J].Nat Rev Genet，2012，13（3）：189-203.

[19]王應(yīng)霞，張旋，吳瑩瑩，等.液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)聯(lián)合DNA倍體分析在良惡性胸腹水鑒別診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2016，32（10）：1152-1155.

[20]胡艷芬，陳龍，荊超，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DNA倍體數(shù)對(duì)鑒別良惡性腫瘤價(jià)值的Meta分析[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，（2）：136-142.

[21]何秋陽(yáng)，鐘國(guó)梁，楊國(guó)順，等.DNA倍體分析與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)對(duì)良惡性漿膜腔積液診斷的比較[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2018，36（3）：317-319.

[22]He Z，Li Y，Wang W.Combination of flow cytometry and image cytometry for detecting DNA aneuploidy and improving the diagnostic efficiency of effusion（Article）[J].Anal Quant Cytopathol Histpathol，2018，40（2）：85-90.

[23]孫小蓉，汪鍵.DNA定量細(xì)胞學(xué)[M].武漢：湖北科學(xué)技術(shù)出版社，2011：135-148.

[24]AGJM Hanselaar.Additional techniques in serous effusions[J].Anal Cell Pathol，2002，24（1）：1-4.

[25]Meng Z，Shi J，Zhu C，et al.Automated quantification of DNA aneuploidy by image cytometry as an adjunct for the cytologic diagnosis of malignant effusion[J].Anal Cell Pathol（Amst），2013，36（3-4）：107-115.

[26]解建軍，敖騰巴雅爾，張永歡.可疑惡性漿膜腔積液細(xì)胞塊中免疫組織化學(xué)抗體的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志，2018，47（11）：858-860.

[27]趙銀環(huán)，杜蕓，王珩，等.細(xì)胞HE涂片褪色后行免疫細(xì)胞化學(xué)的改良技術(shù)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2016，32（1）：106-107.

[28]趙樂.細(xì)胞學(xué)胸腹水腺癌與間皮細(xì)胞的鑒別診斷[J].遼寧醫(yī)學(xué)雜志，2019（5）：12-14.

[29]Ranade RS，Reddy P，Giriyan SS.Cytological Diagnosis Of Serous Effusion By Comparative Approach Of Routine Staining And Modified Cell Block Technique[J].J Evid Based Med，2018，5（3）：229-232.

[30]Güldaval F，Anar C，Polat G，et al.Contribution of Cell Block Obtained by Thoracentesis in the Diagnosis of Malignant Pleural Effusion[J].J Cytol，2019，36（4）：205-208.

[31]Woo CG，Son SM，Han HS，et al.Diagnostic benefits of the combined use of liquid-based cytology，cell block，and carcinoembryonic antigen immunocytochemistry in malignant pleural effusion[J].J Thorac Dis，2018，10（8）：4931-4939.

[32]林梅英，李偉，王偉源.免疫組化染色在肺腺癌胸水涂片褪色后的應(yīng)用研究[J].臨床肺科雜志，2018，23（3）：410-412.

[33]馬曉燕，王敏，李靜，等.肺癌胸水多種制片法與免疫細(xì)胞化學(xué)的聯(lián)合應(yīng)用[J].診斷病理學(xué)雜志，2018，25（11）：770-775.

[34]Li W，Zhang Z，Guo L，et al.Assessment of cytology based molecular analysis to guide targeted therapy in advanced non-small-cell lung cancer[J].Oncotarget，2016，7（7）：8332-8340.

[35]Nakamichi S，Seike M，Miyanaga A，et al.RT-PCR for detecting ALK translocations in cytology samples from lung cancer patients[J].Anticancer Res，2017，37（6）：3295-3299.

[36]中國(guó)非小細(xì)胞肺癌ALK檢測(cè)模式真實(shí)世界多中心研究專家組，中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)分子病理學(xué)組.中國(guó)非小細(xì)胞肺癌ALK檢測(cè)臨床實(shí)踐專家共識(shí)[J].中華病理學(xué)雜志，2019，48（12）：913-920.

[37]Gornjec A，Novakovic S，Stegel V，et al.Cytology material is equivalent to tumor tissue in determining mutations of BRCA1/2 genes in patients with tubo-ovarian high grade serous carcinoma[J].BMC Cancer，2019，19（1）：296-396.

收稿日期：2020-03-16;修回日期：2020-04-15

編輯/成森

作者簡(jiǎn)介：梁海紅（1981.10-），女，河北肅寧人，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤的病理診斷工作