徐曉萍，董耀，彭婷婷，梅嬋，周璐

（1.江蘇省生產(chǎn)力促進(jìn)中心，南京 210000； 2.江蘇省理化測試中心，南京 210000）

替比培南酯化學(xué)名稱為（4R，5S，6S）-3-［1-（4，5-二氫-2-噻唑基）氮雜環(huán)丁烷-3-硫醇基］-6-（1R-羥基乙基）-4-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環(huán)［3.2.0］庚-2-烯-2-羥酸特戊酰氧甲酯，是由美國輝瑞公司研發(fā)的一種廣譜類抗生素［1-3］，2009 年4 月由日本明治制果公司研制的替比培南酯顆粒劑正式上市銷 售［4-5］。替比培南酯顆粒是一種用于治療小兒中耳炎、細(xì)菌性肺炎引發(fā)的上呼吸道感染的碳青霉烯類抗生素藥物，抗菌活性突出，安全性高，增加了兒童抗生素藥物的品種［6-8］。目前，國內(nèi)有多家醫(yī)藥公司已取得該藥物的臨床批件。

在替比培南酯合成過程中，需經(jīng)辛酸銠關(guān)環(huán)得到新的化合物，在有機胺的作用下與二苯氧基磷酰氯反應(yīng)，再在鈀碳催化下氫化脫去保護(hù)基，最后與新戊酸碘甲酯縮合得到最終產(chǎn)物替比培南酯［9-11］。因此替比培南酯顆粒劑中會殘留銠和鈀等重金屬元素，影響藥品質(zhì)量，危害人體健康。

目前，郭偉等建立了石墨爐原子吸收分光光度法測定鈀的方法，該方法的線性范圍為10～100 μg／L，但很難準(zhǔn)確測定藥品中痕量鈀［12］。通過查新未見對于該藥品中銠測定方法的相關(guān)報道［13］。等離子體發(fā)射質(zhì)譜法測定金屬元素具有抗基體干擾能力強，線性動態(tài)范圍寬，有靈敏度高，檢出限低,可消除譜線干擾等優(yōu)點［14-15］。筆者采用微波消解法進(jìn)行樣品前處理，建立等離子體發(fā)射質(zhì)譜法測定替比培南酯顆粒劑中銠、鈀含量的方法。該方法檢出限低，精密度與準(zhǔn)確度高，可為該藥品的質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀：M90 型，德國耶拿分析儀器股份公司；

分析天平：BSA224S-CW 型，感量為萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；

微波消解儀：MARS6 型，美國CEM 公司；

超純水儀：MicroPure UV／UF 型，美國賽默飛世爾科技有限公司；

替比培南酯顆粒劑樣品：批號為876139，日本明治制果公司；

硝酸、鹽酸：電子級，蘇州晶銳化學(xué)股份有限公司；

銠元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：編號為NCS 148136，100 μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

鈀元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：編號為GBW(E) 082120，100μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

銦元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：編號為NCS 140335，10 μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

液氬：純度不小于99.99%，南京阿爾麥化工有限公司；

高純氦氣：純度不小于99.99%，南京阿爾麥化工有限公司；

實驗用水為超純水。

1.2 溶液配制

5%硝酸溶液：準(zhǔn)確移取25 mL 硝酸于500 mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，定容搖勻，備用。

銠、鈀混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：1μg／mL，分別準(zhǔn)確移取1 mL 銠、鈀單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，于100 mL 容量瓶中，用5%硝酸溶液稀釋并定容至標(biāo)線。

銠、鈀混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取50，100，200，500，1 500 μL 的銠，鈀標(biāo)準(zhǔn)儲備液于50 mL 容量瓶中，用5%鹽酸溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻，得1，2，5，10，30 μg／L 的銠，鈀系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

銦內(nèi)標(biāo)溶液：取500 μL 的銦標(biāo)準(zhǔn)溶液于500 mL 容量瓶中，用5%硝酸溶液稀釋并定容，得到10 μg／L 的銦內(nèi)標(biāo)溶液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取0.2 g 試樣于微波消解罐中，緩慢加入7 mL 硝酸，靜置1 h 后，旋緊罐蓋，按照表1 微波消解工作條件進(jìn)行消解，消解完畢后，冷卻，取出消解罐，緩慢打開罐蓋排氣，用少量水沖洗內(nèi)蓋，將消解罐放在控溫電熱板上，于140℃趕酸至剩余1 mL溶液，取下冷卻至室溫，將試樣消解液全部轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，定容，混勻備用。同法進(jìn)行空白試驗，配制樣品空白溶液。

表1 微波消解工作條件

1.4 儀器工作條件

霧化器：同心圓玻璃；等離子體氣流量（氬氣）：18.0 L／min ；載氣流量（氬氣）：1.50 L／min；輔助氣流量（氬氣）：1.05 L／min；混合氣流量（氬氣）：0.14 L／min；射頻發(fā)射功率：1 400 W；碰撞氣流量（氦氣）：115 mL／min；蠕動泵轉(zhuǎn)速：5 r／min；采樣深度：6.5 mm；樣品測定時間：60 s；穩(wěn)定時間：30 s；采用在線加入115In 內(nèi)標(biāo)溶液法。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

分別采用微波消解、干灰化法及濕法消解3 種不同的前處理方法對試樣進(jìn)行前處理。由試驗結(jié)果可知，干灰化法測定試樣中銠、鈀時，加標(biāo)回收率低于80%，說明灰化過程易造成試樣中待測元素的損失。濕法消解及微波消解均可以得到消解至澄清的試樣溶液。但由于濕法消解酸消耗量大，耗時長且在補酸的過程中易帶入污染。而微波消解酸用量少，試劑空白低，速度快，因此選擇微波消解法進(jìn)行樣品前處理。

2.2 消解液的選擇

微波消解常用試劑有硝酸、鹽酸、氫氟酸、雙氧水，硝酸是一種具有強氧化性的酸，能夠很好的將試樣中的有機物分解，本次實驗分別采用7 mL 硝酸溶液，5 mL 硝酸+2 mL 鹽酸溶液，6 mL 硝酸溶液+1 mL 雙氧水分別對樣品進(jìn)行消解。試驗發(fā)現(xiàn)樣品經(jīng)5 mL 硝酸溶液+2 mL 鹽酸混酸消解后不能得到澄清的溶液，而7 mL 硝酸溶液和6 mL 硝酸溶液+1 mL 雙氧水的消解液均可將樣品消解完全?？紤]到減少試劑的用量，因此最終選擇7 mL 硝酸作為消解酸液。

2.3 儀器干擾的消除

等離子體發(fā)射光譜儀的干擾可以分為兩大類：質(zhì)譜干擾和非質(zhì)譜干擾。質(zhì)譜干擾主要來源于同量異位素重疊、難熔氧化物離子等。在儀器最優(yōu)工作條件下，選擇碰撞／反應(yīng)池技術(shù)，來消除質(zhì)譜干擾。非質(zhì)譜干擾主要來源于樣品的基體效應(yīng)或由高含量總?cè)芙夤腆w引起的物理效應(yīng)，選用在線加入115In 作為內(nèi)標(biāo)物，消除非質(zhì)譜干擾。

2.4 儀器工作條件的優(yōu)化

等離子體發(fā)射光譜儀儀器條件的優(yōu)化有利于提高儀器的靈敏度與精密度，采用5 μg／L 鈹、銦、鉍、鉛、釷及砷混合標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧溶液，將儀器調(diào)至碰 撞／反應(yīng)模式，將溶液導(dǎo)入進(jìn)儀器，通過對等離子體氣流量、射頻發(fā)射功率、碰撞氣流量等參數(shù)的自動優(yōu)化，使得儀器從低質(zhì)量數(shù)到高質(zhì)量數(shù)的測定達(dá)到最佳靈敏度。最終確定的最佳儀器條件，列于1.4。

2.5 線性方程及檢出限

按照1.4 儀器工作條件，分別測定銠、鈀混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各元素的離子信號強度，以元素的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，以離子信號強度與內(nèi)標(biāo)離子信號強度比值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

按1.4 儀器條件重復(fù)測定空白溶液11 次，以3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差計算檢測限。Rh 和Pd 線性方程、線性相關(guān)系數(shù)、儀器檢出限及方法檢出限結(jié)果列于表2。

表2 線性方程及相關(guān)系數(shù)

由表2可知，Rh和Pd的線性范圍為0～30 μg／L，線性關(guān)系良好，可以滿足泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的檢測要求。

2.6 精密度試驗

分別稱取0.2 g 試樣（精確至0.000 1 g）6 份于微波消解罐中，按照1.3 步驟進(jìn)行樣品前處理。消解后的試樣溶液按照1.4 儀器工作條件進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

由表3 可知，試樣中銠、鈀測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.36%和1.98%。表明該方法的精密度和重現(xiàn)性較好，滿足泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的檢測要求。

2.7 加標(biāo)回收試驗

稱取0.2 g 試樣于微波消解罐中，按照測定樣品含量確定低、中、高加標(biāo)濃度進(jìn)行元素加標(biāo)，然后按照1.3 操作步驟進(jìn)行樣品前處理。消解后的試樣溶液按照1.4 儀器工作條件進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表4。由表4 可知，試樣中Rh 與Pd 的加標(biāo)回收率分別為96.8%～100.6%，說明該方法的準(zhǔn)確度較高，適用于泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的測試。

表4 回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定替比培南酯顆粒劑中銠、鈀的方法，采用微波消解進(jìn)行樣品前處理。該方法具有操作快速，檢測方便，靈敏度、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點，可為藥品質(zhì)量、安全提供技術(shù) 支撐。