王紀傳，戴英增，王婷婷

淄博市第一醫(yī)院感染性疾病科，山東 淄博 255200

肝癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多步驟的復雜過程，與多種細胞因子密切相關[1]。表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）是由53個氨基酸殘基組成的低分子多肽，可與其受體結合并促進靶細胞DNA的合成及有絲分裂[2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）是酪氨酸激酶受體家族成員，可與EGF結合并啟動細胞核內與有絲分裂相關的基因，最終促進細胞增殖、分裂[3]。雄激素受體（androgen receptor，AR）是核受體超家族成員，可與雄激素結合，結合產物能與特異DNA序列相互作用，并介導靶細胞的雄激素特異反應基因的表達，AR在膀胱癌、前列腺癌中呈高表達。本研究采用免疫組織化學染色法檢測EGF、AR、EGFR在肝癌組織和非肝癌組織中的表達情況，探討EGF、AR、EGFR在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月至2018年8月淄博市第一醫(yī)院收治的肝癌患者。納入標準：年齡≥50歲；經病理檢查確診為肝癌；無其他嚴重基礎疾病。排除標準：臨床資料不全；合并其他免疫系統(tǒng)疾病。根據納入和排除標準，共納入90例患者，其中，男55例，女35例；年齡為53～80歲，平均年齡為（70.47±4.38）歲。取90例肝癌患者的肝癌組織。選取同期接受病理檢查的90例非肝癌患者，年齡為55～73歲，平均年齡為（72.45±4.01）歲；男50例，女40例；均經病理檢查確診為肝良性腫瘤，無其他原發(fā)惡性腫瘤。取90例肝良性腫瘤患者的肝良性腫瘤組織（非肝癌組織）作為對照。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組織化學染色方法

常規(guī)石蠟包埋組織標本，4 μm厚切片，采用免疫組織化學染色方法檢測EGF、AR、EGFR的表達情況，具體方法：脫蠟處理后梯度酒精水化，沖洗2次后，滴入與組織等量的抗原修復液進行抗原修復，取出后沖洗2次，滴入1 ml 3%過氧化氫進行滅活，反應5 min后再次沖洗2次，滴入80 μl山羊血清進行封閉，室溫條件下靜置30 min，選用對應抗體進行一抗，4℃冷藏過夜，取出后沖洗2次，滴入山羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）進行二抗，反應2 h后取出，沖洗2次，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后使用蘇木素復染，隨后封片并進行鏡檢。從每個切片中隨機挑選5個高倍視野并對陽性染色細胞數量進行統(tǒng)計。依據染色強度和陽性細胞所占百分比進行評分。

1.3 觀察指標

觀察兩組患者組織中EGF、AR、EGFR的表達情況，比較不同臨床特征肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR的表達情況，分析肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR表達的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 11.5軟件對數據進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。肝癌患者EGF、AR、EGFR表達的影響因素分析采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中EGF、AR、EGFR 陽性表達情況的比較

肝癌患者肝癌組織中的EGF、AR、EGFR的陽性表達率均明顯高于非肝癌組織，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=48.400、96.800、67.430，P＜0.01）。（表1）

表1 不同組織中EGF、AR、EGFR的陽性表達情況[n（%）]

2.2 不同臨床特征肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR陽性表達情況的比較

有肝炎史、Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移的肝癌患者肝癌組織中EGF的陽性表達率均高于無肝炎史、Ⅰ+Ⅱ期、高分化、無淋巴結轉移的肝癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=6.235、10.368、5.256、3.867，P＜0.05）；有肝炎史、Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移的肝癌患者肝癌組織中AR的陽性表達率均明顯高于無肝炎史、Ⅰ+Ⅱ期、高分化、無淋巴結轉移的肝癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=10.087、15.246、14.052、18.947，P＜0.01）；有肝炎史、Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移的肝癌患者肝癌組織中EGFR的陽性表達率均明顯高于無肝炎史、Ⅰ+Ⅱ期、高分化、無淋巴結轉移的肝癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=8.689、13.097、16.148、24.632，P＜0.01）。不同年齡、性別、腫瘤直徑的肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR的陽性表達情況（n=90）

2.3 肝癌組織中EGF、AR、EGFR 表達影響因素的多因素分析

將單因素分析中有統(tǒng)計學意義的因素作為自變量，將EGF、AR、EGFR表達情況作為因變量進行Logistic回歸分析（賦值：無淋巴結轉移=0，有淋巴結轉移=1；TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期=0，TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期=1），結果顯示，淋巴結轉移、TNM分期是肝癌組織中EGF、AR、EGFR表達的獨立影響因素。（表 3～5）

表3 肝癌組織中EGF表達影響因素的多因素分析（n=90）

表4 肝癌組織中AR表達影響因素的多因素分析（n=90）

表5 肝癌組織中EGFR表達影響因素的多因素分析（n=90）

3 討論

EGF的分子量約為6.040 kD，其分子N端結構域主要負責與受體結合，C端與促細胞生長活性功能有關[4]。EGF可被多種器官合成，其產生、釋放主要受神經及激素的影響，如生長抑素、胃泌素等。EGF可促進多種細胞分裂、增殖，并可促進蛋白合成，改變細胞骨架，誘導C-myc、C-fos等原癌基因的表達。多種惡性腫瘤存在EGF異常表達的情況，且其表達水平與患者的分化程度及預后密切相關。EGFR作為EGF的主要受體，分子量約為170 kD，主要存在于細胞膜表面。EGFR與EGF等配體結合后，可由單體轉化為二聚體，并誘導細胞內Y992、Y1068等激酶路徑活化，促使細胞自磷酸化，并介導下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）以及c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）通路，最終誘導細胞增殖、分裂[5]。研究表明，EGFR是多條信號通路的交匯點，是細胞生長、增殖、分化及黏附等生理活動的重要介質[6-7]。健康組織中的EGFR表達水平較低，而乳腺癌、腎癌、結腸癌和肝癌等腫瘤細胞內的EGFR呈明顯高表達[8]。高表達的EGFR將參與腫瘤細胞增殖、血管新生、細胞凋亡抑制以及腫瘤侵襲、轉移等病理變化過程[9]，其可能機制：①EGFR高表達可強化下游信號的傳導，促使細胞異常增殖、分裂[10]；②突變型EGFR配體如EGF等的異常表達將誘導EGFR持續(xù)活化，并參與腫瘤細胞凋亡抑制過程；③EGFR高表達還可增強細胞的自分泌環(huán)作用，促進細胞增殖[11]。AR是由918個氨基酸組成的核蛋白，可與雄激素反應元件的順式增強子序列結合，并調節(jié)基因的轉錄水平[12-13]。AR的轉錄激活功能可被核受體輔助因子介導，這些輔助因子可借助多級作用誘導組蛋白甲基化、乙?；?，從而修飾染色體，并促進RNA聚合酶Ⅱ轉錄起始復合物與啟動子相互作用，激活基因轉錄進程，誘導蛋白質生成，最終調控細胞生長[14-15]。臨床研究表明，肝癌細胞細胞質中AR的濃度明顯高于癌旁組織和正常肝組織[16]。

本研究中，肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR的陽性表達率均明顯高于非肝癌組織（P＜0.01），表明EGF、AR、EGFR高表達與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關；進一步研究發(fā)現，有肝炎史、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移的肝癌患者肝癌組織中EGF、AR、EGFR的陽性表達率較高，表明EGF、AR、EGFR與肝癌患者是否有肝炎史、TNM分期、分化程度和淋巴結轉移情況密切相關。多因素分析結果顯示，淋巴結轉移情況和TNM分期是肝癌患者EGF、AR、EGFR表達的重要影響因素。

綜上所述，EGF、AR、EGFR高表達與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，且其表達與患者的淋巴結轉移情況和TNM分期密切相關，臨床可通過對其進行檢測從而評估肝癌患者的TNM分期和淋巴結轉移情況。肝癌病機復雜，EGF、AR、EGFR等細胞因子與肝癌的關系亦復雜多變，本研究僅分析了EGF、AR、EGFR異常表達與肝癌的關系，其具體機制尚待進一步研究。