陳鴻志，陳金玲

1信陽職業(yè)技術(shù)學院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 信陽 464000

2信陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 信陽 464000

宮頸癌是生長于宮頸部位的惡性腫瘤，是最常見的婦科惡性腫瘤之一，疾病早期患者出現(xiàn)陰道不規(guī)則出血、接觸性出血等現(xiàn)象，隨著病情的不斷發(fā)展，腫瘤不斷擴大，侵犯至血管后會導致出血量增多[1]。近年來，宮頸癌的發(fā)病趨勢呈年輕化，而腫瘤細胞的生長與增殖是患者治療及預后效果不理想的重要影響因素[2]。相關(guān)研究顯示，神經(jīng)鈣黏素（N-cadherin，N-cad）在腫瘤細胞的分化、黏附及病變早期中發(fā)揮了不可忽視的作用，其表達情況與腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移緊密相關(guān)[3]。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1（transferrin receptor type 1，TfR1）被證明在肺癌、卵巢癌組織中呈高表達狀態(tài)，與腫瘤的發(fā)展具有密切聯(lián)系，而關(guān)于其在宮頸癌中表達水平的研究仍較少[4]。本研究分析了宮頸癌患者中N-cad、TfR1的表達情況及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年6月至2019年6月信陽職業(yè)技術(shù)學院附屬醫(yī)院收治的宮頸癌患者。納入標準：①經(jīng)病理檢查確診為宮頸癌[5]；②術(shù)前未接受過化療、放療或其他治療；③臨床資料完整。排除標準：①合并嚴重肝、腎功能不全；②合并其他嚴重并發(fā)癥；③合并其他惡性腫瘤。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入65例宮頸癌患者作為宮頸癌組，年齡為22～70歲，平均（42.38±5.28）歲。選擇同期診斷為慢性宮頸炎的患者38例作為慢性宮頸炎組，年齡為21～73歲，平均（41.89±5.53）歲；選擇同期體檢的健康體檢者37例作為對照組，年齡為23～72歲，平均（42.97±5.34）歲。3組研究對象的年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑

10%甲醛溶液、石蠟、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）均購自賽默飛世爾生物化學制品（北京）有限公司、免疫組化二抗試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，鼠抗人TfR1多克隆抗體和N-cad抗體均購自英國Abcam公司。

1.3 免疫組織化學染色方法

取受檢者的宮頸黏膜組織，30 min內(nèi)將黏膜組織置于10%甲醛溶液中固定浸泡，予以石蠟包埋、切片、二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水，并使用枸櫞酸鹽修復液對組織進行3 min的高壓修復。修復完成后用免疫組化筆在受檢組織1～2 mm外劃圈，再加入3%H2O2，置于恒溫箱中孵育20 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的干擾，并采用PBS漂洗3次。然后加入適量的10%正常羊血清，于室溫下密閉15 min，棄血清，以1∶500的稀釋比例滴加TfR1或N-cad抗體，置于4℃恒溫箱中過夜，再用PBS漂洗3次，然后加入二抗，孵育后PBS漂洗3次并予以二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，以被證實含有腫瘤細胞的宮頸黏膜組織作為陽性對照。

1.4 免疫組織化學染色結(jié)果判定標準

由兩位病理科醫(yī)師在400倍光鏡下隨機選取10個視野。依據(jù)陽性細胞百分數(shù)評分：＜1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，75%以上為4分；依據(jù)染色程度評分：無色為0分，黃色為1分，淺棕色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞百分數(shù)與染色程度評分相加，0～2分為陰性，＞2分為陽性[6]。

1.5 隨訪方法

采用電話或門診隨訪的方式對患者隨訪2年，記錄患者的病情變化及生存情況。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法；采用Logistic回歸模型進行多因素分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.13 組研究對象N-cad、TfR1陽性表達率的比較

宮頸癌患者中N-cad和TfR1的陽性表達率均高于慢性宮頸炎組和對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。慢性宮頸炎組患者中N-cad和TfR1的陽性表達率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 3組研究對象中N-cad和TfR1陽性表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad、TfR1表達情況的比較

不同年齡、腫瘤直徑的宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad、TfR1的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分化程度的宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad的陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=15.879、29.276、35.117，P＜0.05）。不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分化程度的宮頸癌患者宮頸癌組織中TfR1的陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=27.121、25.656、24.265，P＜0.05）。（表2）

2.3 宮頸癌患者中N-cad、TfR1的表達與臨床特征的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，宮頸癌患者中N-cad、TfR1的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期均呈正相關(guān)，與病理分化程度均呈負相關(guān)（P＜0.05）。（表3）

2.4 宮頸癌患者預后影響因素的單因素分析

65例宮頸癌患者的2年生存率為75.38%（49/65）。不同年齡、腫瘤直徑的宮頸癌患者的2年生存率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分化程度、N-cad和TfR1表達情況的宮頸癌患者的2年生存率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（表4）

表2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad、TfR1表達情況（n=65）

表3 宮頸癌患者中N-cad、TfR1的表達與臨床特征的相關(guān)性（n=65）

表4 宮頸癌患者預后影響因素的單因素分析（n=65）

2.5 宮頸癌患者預后影響因素的多因素分析

多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，低分化、臨床分期為Ⅱ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、N-cad陽性、TfR1陽性均是宮頸癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表 5）

表5 宮頸癌患者預后影響因素的多因素分析（n=65）

3 討論

宮頸癌是嚴重危害女性生命健康的惡性腫瘤之一，是全球女性中僅次于乳腺癌的第二大常見的惡性腫瘤，主要分布于30～35歲和50～55歲的女性中，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的50%以上[7]。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)宮頸癌患者約46萬人，每年有超過20萬的女性死于此病[8]。隨著近年來宮頸癌疫苗及宮頸篩查的廣泛普及，宮頸癌的發(fā)病率呈下降趨勢，但仍有部分女性未進行疫苗接種，而臨床上對于宮頸癌無指導性的治療方法，因此，對宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的相關(guān)分子進行深入的研究具有重要意義[9-10]。

鐵元素在人體生命活動中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，不但參與細胞DNA的合成，還與電子傳遞具有一定的聯(lián)系[11]。TfR是一種由轉(zhuǎn)鐵蛋白受體基因產(chǎn)生的跨膜糖蛋白，是調(diào)節(jié)細胞生長所需的蛋白質(zhì)之一，包括TfR1和TfR2兩種亞型[12]。其中TfR1在機體內(nèi)大多數(shù)細胞中均有表達且與生命體的存活具有緊密聯(lián)系。越來越多的文獻表明，TfR1在大多數(shù)腫瘤細胞中異常表達，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而近年來也有研究發(fā)現(xiàn)，TfR1基因敲除可引發(fā)小鼠死亡[13-14]。N-cad是一種在細胞黏附過程中依賴鈣發(fā)揮作用的跨膜糖蛋白，可促進細胞間發(fā)生粘連，并誘導細胞發(fā)生聚集反應(yīng)[15]。目前關(guān)于腫瘤細胞中N-cad的作用機制仍存在爭議，但大部分學者認為，N-cad對腫瘤細胞的侵襲和遷移具有促進作用，該蛋白可激發(fā)上皮細胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細胞，并加強細胞間的黏附能力，促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[16-17]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者中N-cad和TfR1的陽性表達率均高于慢性宮頸炎患者和健康體檢者。說明N-cad和TfR1在宮頸癌的發(fā)病過程中發(fā)揮了不可或缺的作用，隨著病情的發(fā)展其表達水平可能逐漸升高。

本研究分析了不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad和TfR1的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分化程度的宮頸癌患者宮頸癌組織中N-cad和TfR1的陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，宮頸癌患者中N-cad、TfR1的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期均呈正相關(guān)，與病理分化程度均呈負相關(guān)（P＜0.05）。研究表明，N-cad和TfR1的表達水平越高，患者病情越嚴重，可將二者作為腫瘤細胞的特異性靶向受體[18]。本研究結(jié)果說明N-cad和TfR1參與了宮頸組織病變的過程，在一定程度上可能對腫瘤細胞的增殖及相關(guān)因子的分泌起到了推進作用，這與孫新超等[19]研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果還顯示，低分化、臨床分期為Ⅱ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、N-cad陽性、TfR1陽性均是宮頸癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。提示上述因素可在一定程度上影響患者的生存率，為宮頸癌的治療及預后提供了參考價值。本研究中患者的2年生存率達75.38%，高于陳媛媛等[20]的研究結(jié)果，考慮與樣本量或隨訪時間不同有關(guān)，還需進一步探究。

綜上所述，宮頸癌患者中N-cad和TfR1的陽性表達率較高，且其表達與宮頸癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分化程度、臨床分期有關(guān)。低分化、臨床分期為Ⅱ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、N-cad陽性、TfR1陽性均是宮頸癌患者預后的獨立危險因素。臨床上可根據(jù)N-cad和TfR1的表達情況對病情變化做出有效的評估，并作為臨床診斷、治療及指導預后的依據(jù)。