許宗仁 包旭宏

【摘 要】 目的：建立如意珍寶片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：對(duì)如意珍寶片中的乳香、降香、木香、丁香采用薄層色譜法（TLC）進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定如意珍寶片中羥基紅花黃色素A和胡椒堿的含量。結(jié)果：該制劑的TLC 斑點(diǎn)清晰，陰性樣品無(wú)干擾;羥基紅花黃色素A在 0.01～0.1 mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（y=72397x +28.857，r = 0.9999），平均回收率為 100.65%，RSD為1.86%（n=6）;胡椒堿在0.005～0.163 mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（y=56094x +33.384，r = 1），平均回收率為 100.51%，RSD為1.67%（n=6）。 結(jié)論：該方法穩(wěn)定、可行，且專(zhuān)屬性高，可有效控制如意珍寶片的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 如意珍寶片;羥基紅花黃色素A;胡椒堿;TLC;HPLC

【中圖分類(lèi)號(hào)】R29? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）9-0023-09

Study on the Quality Standard of Tibetan Medicine Ruyi Zhenbao Tablets

XU Zongren1 BAO Xuhong2*

1. Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou? 730030，China;

2. Gansu Cheezheng Tibetan Medicine Co.， Ltd.， Lanzhou? 730010， China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Ruyi Zhenbao Tablets. Methods The contents of frankincense，Dalbergia odorifera，Aucklandiae Radix，? and Clove in Ruyi Zhenbao Tablets were identified by Thin layer chromatography， and the contents of Hydroxysafflor yellow A and Piperine in Ruyi Zhenbao Tablets were determined by High-performance liquid chromatography. Results The TLC spot of the preparation is clear， and the negative sample has no interference; the Hydroxysafflor yellow A has a good linear relationship with the peak area within the concentration range of 0.01-0.1mg/mL（y =72397x+28.857，r=0.9999）， and the average recovery It is 100.65% and RSD is 1.86%（n=6）. Piperine has a good linear relationship with the peak area in the concentration range of 0.005 to 0.163mg/mL （y=56094x +33.384， r=1）， the average recovery is 100.51%， and the RSD is 1.67% （n=6）.Conclusion The method is stable， feasible and specific， and can effectively control the quality of Ruyi Zhenbao Tablets.

Keywords：Ruyi Zhenbao Tablets; Hydroxysafflor Yellow A; Piperine; TLC; HPLC

如意珍寶丸收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》1995年版藏藥第一冊(cè)第317頁(yè)，又名“桑培奴布日布”，原劑型為丸劑[1]。為解決傳統(tǒng)藏藥丸劑丸重差異大、崩解時(shí)限不易控制，衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)不合格等問(wèn)題。甘肅奇正藏藥有限公司按照國(guó)家藥品監(jiān)督管理局有關(guān)規(guī)定的要求[2]，將丸劑改為片劑并獲得生產(chǎn)批件（批件號(hào)：Z20100061）。如意珍寶丸成分復(fù)雜，包含揮發(fā)性成分、生物堿、無(wú)機(jī)鹽、黃酮類(lèi)、脂肪酸、氨基酸等。原標(biāo)準(zhǔn)只有紅花和降香藥材的顯微鑒別，在中醫(yī)藥現(xiàn)代化迅猛發(fā)展的今天，原標(biāo)準(zhǔn)已然不能很好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量[1]。本研究通過(guò)查閱文獻(xiàn)并結(jié)合自身實(shí)驗(yàn)研究，增加了乳香、降香、木香和丁香4個(gè)藥材的TLC薄層鑒別方法和紅花、蓽茇2個(gè)藥材的HPLC含量測(cè)定方法，對(duì)該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)做了提高和完善。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 安捷倫1160高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）：包括LC-295紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，200LC泵，ANAS-TAR色譜工作站;SK8200HP超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）;HY-4調(diào)速多用振蕩器（金壇市華峰儀器有限公司制造）;XS205DU分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司生產(chǎn)）。

1.2 試藥 甲醇、乙腈均為色譜純?cè)噭ㄙ?gòu)自賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司），其余為分析純。硅膠G板（青島海洋化工有限公司）;乳香對(duì)照藥材（批號(hào)：12907-201702）;降香對(duì)照藥材（批號(hào)：120952-201804）;木香對(duì)照藥材（批號(hào)：120921-201709）;丁香酚對(duì)照品（批號(hào)：110725-201716）;羥基紅花黃色素A（批號(hào)為：111637-201810）;胡椒堿對(duì)照品（批號(hào)為：110775-201706），以上對(duì)照品和對(duì)照藥材均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。 如意珍寶片由甘肅奇正藏藥有限責(zé)任公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 處方中乳香的薄層鑒別 取本品6片，研細(xì)，置于錐形瓶中，加入10.0 mL的95%乙醇，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸干后放冷，殘?jiān)蛹状?.0 mL使溶解，作為供試品溶液。另取乳香對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再按處方比例及制備工藝，配制不含乳香的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版通則0502，下同）試驗(yàn)，分別用毛細(xì)管取上述兩種溶液各5 μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（15：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛試液，在105? ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的褐色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。照片見(jiàn)圖1。

2.1.2 降香的薄層鑒別 取本品6片，研細(xì)，置于錐形瓶中，加入20.0 mL的95%乙醇，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸干后放冷，殘?jiān)蛹状?.0 mL使溶解，作為供試品溶液。另取降香對(duì)照藥材1.0 g，加乙醇10.0 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。再按處方比例及制備工藝配制成不含降香的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別用毛細(xì)管取上述溶液各5 μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）上，以甲苯-乙酸乙酯（2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，至紫外燈（365 nm）下檢視，在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的淺藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。再?lài)娨?%香草醛試液與無(wú)水乙醇（1∶9）的混合液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的棕色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾，照片見(jiàn)圖2、圖3。

2.1.3 木香的薄層鑒別 取本品6片，研細(xì)，置于具塞錐形瓶中，加入15.0 mL乙醚，密塞，振搖提取1 h，濾過(guò)，濾液濃縮至1.0 mL，作為供試品溶液。另取去木香對(duì)照藥材0.5 g，同法制成每0.5 mg/mL的對(duì)照藥材溶液。再按處方比例及制備工藝配制成不含木香的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別用毛細(xì)管取上述溶液各5 μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）上，以石油醚（60～90 ℃）-苯-醋酸乙酯（5∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)綠色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾，照片見(jiàn)圖4。

2.1.4 處方中丁香的薄層色譜鑒別 取本品6片，研細(xì)，置于錐形瓶中，加入20.0 mL正己烷，振揺提取10 min，濾過(guò)，濾液蒸干后放冷，殘?jiān)诱和?.0 mL使溶解，作為供試品溶液。另取丁香酚對(duì)照品（ρ=1.067）0.5 mL，加正己烷稀釋至25.0 mL，搖勻，制成濃度為21.3 mg/mL的對(duì)照品溶液。再按處方比例及制備工藝，配制不含丁香的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別用毛細(xì)管取對(duì)照品溶液0.5 μL、取供試品液和陰性溶液各2 μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（10cm×20cm）上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的棕黃色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。照片見(jiàn)圖5。

2.2 羥基紅花黃色素A的HPLC含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 十八烷基鍵合硅膠為填充劑;色譜柱：Kromasil 100-5- C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm大連依利特分析儀器有限公司生產(chǎn)）;流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸（26∶2∶72）;流速：0.80 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：403 nm;柱溫：室溫。

2.2.2 色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在“2.2.1”中的色譜條件下，羥基紅花黃色素A與其余雜質(zhì)峰分離效果較好，理論板數(shù)以羥基紅花黃色素A峰計(jì)，應(yīng)不低于2500。

2.2.3 對(duì)照品溶液與供試品溶液及陰性溶液的配制 取羥基紅花黃色素A對(duì)照品5.0 mg于25 mL容量瓶中，加25%甲醇至刻度，搖勻，制成每0.2 mg/mL的對(duì)照品溶液。另取本品20片，研細(xì)后精密稱(chēng)取5g，置于具塞錐形瓶中，精密加入25%的甲醇50.0 mL，稱(chēng)定重量，超聲提?。üβ?60 W，頻率59 kHz）40 min，放冷，用25%的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5.0 mL于10.0 mL容量瓶中，加25%的甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。再按處方比例及制備工藝配制成不含紅花的陰性對(duì)照樣品，取5.0 g，同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 精密吸上述取供試品溶液、陰性液和對(duì)照品溶液各20 μL注入液相色譜儀中，在與羥基紅花黃色素A對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品液具有相同保留時(shí)間的色譜峰出現(xiàn);而陰性對(duì)照溶液在該處無(wú)色譜峰，說(shuō)明專(zhuān)屬性良好。說(shuō)明專(zhuān)屬性良好。見(jiàn)圖6。

2.2.5 線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密吸取上述對(duì)照品溶液（0.2 mg/mL）各0.5、1、1.5、2.5、4.5、5.0 mL、分別置于10.0 mL的容量瓶中，加入25%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。取上述對(duì)照品溶液各20 μL，按照“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得出羥基紅花黃色素A的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程、相關(guān)系數(shù)及線(xiàn)性范圍，見(jiàn)圖7。結(jié)果表明其在0.01～0.1 mg/mL濃度范圍內(nèi)峰面積與對(duì)照品的濃度線(xiàn)性關(guān)系良好，其回歸方程為y=72397x+28.857（r=0.9999）。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取如意珍寶片（批號(hào)： 20180401），按照“2.2.3”項(xiàng)下的方法，制成供試品溶液，依“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密吸取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定羥基紅花黃色素A峰面積值，其平均值為2133.42，RSD值為0.62%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的供試品（批號(hào)20180401），按照“2.2.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密吸取該供試品溶液20 μL，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，平均值為2317.8，RSD值為0.44%。

2.2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)：20180401）5份，按照“2.2.3”項(xiàng)下處理方法，制備5份供試品溶液，分別測(cè)定，記錄峰面積。計(jì)算羥基紅花黃色素A的含量及RSD值，結(jié)果重現(xiàn)性較好，平均值0.644 mg/g，RSD值為1.77%。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量（0.64 mg/g）的如意珍寶片（批號(hào)： 20180401）6份，研細(xì)，每份約1.5g，精密稱(chēng)定，分別加入2.0 mL濃度為0.2 mg/mL的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液。再按照“2.2.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，根據(jù)“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件依法測(cè)定，供試品中羥基紅花黃色素A的加樣回收率的RSD值為1.86%，表明該方法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.10 樣品中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定 取7批樣品（批號(hào)：180401、180402、180506、180507、180608、180709、180801），每批2份，按照“2.2.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液20μL，按照“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件，依法測(cè)定，記錄峰面積、計(jì)算羥基紅花黃色素A的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 胡椒堿的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 十八烷基鍵合硅膠為填充劑;色譜柱：Kromasil 100-5- C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特分析儀器有限公司生產(chǎn)）;流動(dòng)相：甲醇-水（65：35）;流速：1.0 mL/min;檢測(cè)器： DAD檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm;柱溫：室溫。

2.3.2 色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在該色譜條件下，胡椒堿與其余雜質(zhì)峰分離效果較好，理論板數(shù)以胡椒堿峰計(jì)應(yīng)不低于13000。

2.3.3 對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液的配制 稱(chēng)取胡椒堿對(duì)照品0.40 mg，精密稱(chēng)定，置于10.0 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品15片，研細(xì)后精密稱(chēng)取3.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入30.0 mL甲醇，稱(chēng)定重量，超聲提?。üβ?60 W，頻率59 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾取1.0 mL，作為供試品液。再按處方比例及制備工藝配制成不含蓽茇的陰性對(duì)照樣品，取3.0 g，同法制成陰性對(duì)照溶液，備用。

2.3.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL注入液相色譜儀，在與胡椒堿對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品液具有相同保留時(shí)間的色譜峰出現(xiàn);而陰性對(duì)照溶液在該保留時(shí)間無(wú)色譜峰，說(shuō)明專(zhuān)屬性良好。見(jiàn)圖8。

2.3.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 取胡椒堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇分別制成 0.005、0.010、0.020、0.041、0.082、0.163 mg/mL對(duì)照品溶液，取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表4。以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得出胡椒堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程、相關(guān)系數(shù)及線(xiàn)性范圍，見(jiàn)圖9。結(jié)果表明，胡椒堿在0.005～0.163 mg/mL內(nèi)峰面積與對(duì)照品的濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性方程為y=56094x+33.384（r=1）。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)胡椒堿照品溶液（0.041 mg/mL）10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，結(jié)果表明，精密度良好，平均值2355.07，RSD值為0.22%。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)： 20190801）3.0g，按照“2.3.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，再按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密吸取該供試品溶液10μL，于0、2、4、6、12、24、48 h分別進(jìn)樣，測(cè)定峰其面積。結(jié)果顯示，樣品在在48 h內(nèi)測(cè)定，穩(wěn)定性良好，平均值為1958.1，RSD值為2.19%。

2.3.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)： 20190801）6份，按照“2.3.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，再按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別進(jìn)樣，計(jì)算胡椒堿的含量及RSD值，結(jié)果表明，重現(xiàn)性較好，平均值0.35 mg/mL，RSD值為1.19%。

2.3.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量（0.345 mg/g）的如意珍寶片（批號(hào)： 20190801）6份，研細(xì)，每份約0.5g，精密稱(chēng)定，分別加入胡椒堿對(duì)照品溶液（0.1 mg/mL）3.0 mL，按照“2.3.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，再按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，依法測(cè)定，供試品中羥基紅花黃色素A的加樣回收率的RSD值為 1.67%，表明本法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表5。

2.3.10 樣品中胡椒堿的含量測(cè)定 取10批樣品（批號(hào)：170301、181109、190401、190801、190903、191001、191002、191003、191101、191102），每批2份，按照“2.3.3”項(xiàng)下處理方法，制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液20μL，按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，依法測(cè)定，記錄峰面積、計(jì)算樣品中胡椒堿的含量，結(jié)果見(jiàn)表6。

3 討論

3.1 薄層色譜研究 通過(guò)文獻(xiàn)[2-19]查閱，本研究采用TLC法對(duì)如意珍寶片中的乳香、降香、丁香、木香的進(jìn)行了鑒別，結(jié)果色譜斑點(diǎn)清晰、分離度良好，且陰性無(wú)干擾;可有效控制如意珍寶片的質(zhì)量。其余藥材（如檀香、藏木香、香旱芹等）因?yàn)樘幏剿幉臄?shù)量較多，陰性干擾尚無(wú)法消除，待進(jìn)一步研究。

3.2 含測(cè)藥材的篩選 研究前期，參照《中國(guó)藥典》2015年版一部，采用HPLC法對(duì)高良姜、木香、藏木香等做了含量測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以高良姜中的高良姜素、木香中的木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯、藏木香中的土木香內(nèi)酯和異木香內(nèi)酯作為檢測(cè)指標(biāo)時(shí)，陰性樣品在與對(duì)照品相同的保留時(shí)間上出現(xiàn)小峰干擾，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，調(diào)整溶劑、流動(dòng)相比例和檢測(cè)波長(zhǎng)等方法，均不能消除陰性干擾，故不可作為含量測(cè)定指標(biāo)。而紅花藥材處方含量相對(duì)較大，有效成分明確，故參照相關(guān)資料[20-29]，采用HPLC對(duì)該指標(biāo)做了專(zhuān)屬性試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品和對(duì)照品的分離度較好，且陰性在選定的色譜條件下無(wú)干擾。由此建立了處方中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定方法。處方中蓽茇具有較好的止痛作用[2-3]，故參照《中國(guó)藥典》2015年版一部“蓽茇”項(xiàng)下采用外標(biāo)法測(cè)定其有效成分胡椒堿的含量，但由于如意珍寶片中化學(xué)成分較多，胡椒堿出峰時(shí)間較早，基線(xiàn)不平。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)并改進(jìn)方案（流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)），最終建立了處方中蓽茇的主要有效成分胡椒堿的含量測(cè)定方法。

3.3 羥基紅花黃色素A提取溶媒、提取方法的選擇

3.3.1 提取溶媒的選擇 資料顯示羥基紅花黃色素A為親水性成分，在水和低濃度的醇中溶解度較大;本研究先后采用純水，25%甲醇、25%乙醇、38%甲醇、50%乙醇作為溶媒進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)用純水、38%甲醇、25%乙醇以及50%乙醇做提取時(shí)，樣品中紅花黃色素A的溶解度均較大，但不利于樣品濾過(guò)，當(dāng)采用25%甲醇時(shí)紅花黃色素A的溶解度大且過(guò)濾相對(duì)容易。故確定以25%甲醇為溶媒。

3.3.2 不同提取方法對(duì)處方中羥基紅花黃色素A含量的影響 本研究發(fā)現(xiàn)采用25%甲醇回流提取和超聲提?。?0 min）方式，對(duì)樣品中羥基紅花黃色素A的含量基本一致，故選擇相對(duì)便捷的超聲提取方法對(duì)樣品進(jìn)行處理。

3.4 胡椒堿提取溶媒、提取方法的選擇

3.4.1 提取溶媒的選擇 資料[10-15]顯示胡椒堿為醇溶性成分，難溶于水易溶于醇。本研究先后采用甲醇、無(wú)水乙醇，95%乙醇作為溶媒進(jìn)行超聲（30mim）提取，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲醇、無(wú)水乙醇，95%乙醇均能提取出胡椒堿，但甲醇對(duì)樣品中胡椒堿的溶解度最大，故確定以甲醇為溶媒。

3.4.2 不同提取方法的選擇 以甲醇為溶劑，采用回流、超聲、振揺三種提取方式將樣品提取30 min。經(jīng)HPLC檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)：振揺提取的效率最低;甲醇回流提取略大于超聲提取樣品中胡椒堿的含量。但為了提高工作效率，節(jié)省檢驗(yàn)時(shí)間，本研究選用超聲處理的方法對(duì)樣品進(jìn)行提取。

3.5 不同色譜柱的比較 采用3種不同廠(chǎng)家生產(chǎn)同型號(hào)的色譜柱（依利特、安捷倫、菲羅門(mén)），按照各自色譜條件分別對(duì)胡椒堿和羥基紅花黃色素A進(jìn)行檢測(cè)，樣品分離效果及含量無(wú)明顯差異。

4 結(jié)論

如意珍寶片中乳香、降香、木香、丁香的TLC斑點(diǎn)清晰，且陰性無(wú)干擾，可作為薄層鑒別項(xiàng)下的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)HPLC含量測(cè)定結(jié)果，如意珍寶片中羥基紅花黃色素A的含量在0.37 mg/g～0.755 mg/g的范圍內(nèi)，胡椒堿的含量在0.26 mg～0.37 mg的范圍內(nèi)。故暫定本品中每1 g含羥基紅花黃色素A應(yīng)不得少于0.3 mg，含胡椒堿應(yīng)不得少于0.20 mg。

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（收稿日期：2020-01-15 編輯：劉 斌）