鐘曉燕 趙維英

東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院江北院區(qū)(南京，210000)

多囊卵巢綜合征(PCOS)多發(fā)于女性青春期或育齡期，常伴有月經(jīng)減少、多毛、不孕或閉經(jīng)等癥狀[1]。PCOS患者中肥胖比例較高，且常出現(xiàn)糖脂代謝異常[2]。微小RNA(miRNAs)為一種單鏈RNA，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖或分化以及腫瘤形成等多種病理生理進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。miR-26b作為miRNA的成員，在機(jī)體中的表達(dá)可隨著脂肪細(xì)胞的不斷分化成熟而自主上調(diào)，并與胰島素抵抗有一定聯(lián)系[3-4]。本文研究血清miR-26b表達(dá)與PCOS患者糖脂代謝的關(guān)系，為臨床診治提供監(jiān)測(cè)靶點(diǎn)及指標(biāo)。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2016年3月-2019年1月在本院接受治療的PCOS患者80例臨床資料為PCOS組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②年齡>20歲；③患者或家屬知情并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他類(lèi)別不孕癥或雄激素增多癥；②入組前3個(gè)月口服過(guò)激素藥物；③有血液疾??；④有高血壓或糖尿病等其他內(nèi)分泌性疾??；⑤有惡性腫瘤。另選同期本院治療的非PCOS不孕患者80例為對(duì)照組。本次研究已得到醫(yī)院倫理委員會(huì)的評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)。

1.2 研究方法

查閱病歷資料，記錄其基礎(chǔ)指標(biāo)，主要內(nèi)容包含：年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)。糖脂代謝指標(biāo)的檢測(cè)：于月經(jīng)周期的第3～5d取空腹靜血清，使用UniCel DxI 800型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)及美國(guó)拜耳公司的試劑盒測(cè)定空腹血糖(FBG)及空腹胰島素(FINS)，使用穩(wěn)態(tài)模型法計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。7600型全自動(dòng)生化測(cè)定儀(日本日立公司)及美國(guó)羅氏公司的試劑盒測(cè)定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度型脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度型蛋白膽固醇(LDL-C)。血清miR-26b測(cè)定：血清標(biāo)本提取RNA，紫外分光光度法檢測(cè)RNA的純度及完整性，美國(guó)Gibicol公司的逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)及金斯瑞生物科技公司制成的引物序列常規(guī)逆轉(zhuǎn)成cDNA，并在定量7500型PCR檢測(cè)儀(美國(guó)ABI公司)輔助下行RT-PCR反應(yīng)，予瓊脂糖凝膠電泳，將U6用于miRNA內(nèi)參對(duì)照并紫外燈下觀察分析，計(jì)算miR-26b相對(duì)表達(dá)量。RT-PCR反應(yīng)條件：95℃下30s，相同溫度下15s，72℃下15s，共40個(gè)循環(huán)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組一般情況、血清miR-26b表達(dá)及糖脂代謝指標(biāo)，分析血清miR-26b表達(dá)與各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性，并對(duì)PCOS組血清miR-26b表達(dá)進(jìn)行多元逐步回歸分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組一般情況比較

兩組一般情況比較無(wú)差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組基礎(chǔ)指標(biāo)對(duì)比

2.2 兩組血清miR-26b表達(dá)及糖脂代謝指標(biāo)比較

兩組HDL-C水平無(wú)差異(P>0.05)，其他指標(biāo)PCOS組均高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組血清miR-26b表達(dá)及糖脂代謝指標(biāo)比較

2.3 血清miR-26b表達(dá)與各指標(biāo)相關(guān)性

Pearson法分析相關(guān)性，PCOS組血清miR-26b表達(dá)與LDL-C、HOMA-IR、BMI均呈正相關(guān)(P<0.05)，對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 兩組各項(xiàng)指標(biāo)與血清miR-26b表達(dá)相關(guān)性分析

2.4 血清miR-26b表達(dá)相關(guān)因素回歸分析

根據(jù)多元逐步回歸分析結(jié)果顯示，HOMA-IR是PCOS組血清miR-26b表達(dá)的危險(xiǎn)因素(OR>1)，見(jiàn)表4。

表4 PCOS組血清miR-26b表達(dá)因素多元逐步回歸分析

3 討論

PCOS是導(dǎo)致無(wú)排卵型不孕癥狀的重要誘因，在育齡女性中發(fā)病率達(dá)15%，在無(wú)排卵型不孕中占75%[6]。由于PCOS癥狀表現(xiàn)有高度復(fù)雜性及異質(zhì)性，確切病因及發(fā)病機(jī)制仍未完全明晰，目前公認(rèn)的是基因及環(huán)境為主要誘因。有報(bào)道指出，miR-26b為miRNA家族中的一個(gè)重要成員，其在人類(lèi)機(jī)體中的表達(dá)和胰島素抵抗的關(guān)系較為密切[7-8]。而肥胖患者更易患有PCOS，分析血清miR-26b表達(dá)與PCOS患者糖脂代謝關(guān)系十分必要[9]。

本文結(jié)果顯示，PCOS患者機(jī)體中普遍存在明顯的糖脂代謝異常，且miR-26b水平升高，這與邱秀容等[10]報(bào)道結(jié)果相符，提示miR-26b可能參與了PCOS的發(fā)病過(guò)程。究其原因，miRNAs能夠調(diào)控細(xì)胞增殖及分化等過(guò)程，并通過(guò)和靶基因3’非翻譯區(qū)的互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合轉(zhuǎn)錄，最終調(diào)控蛋白編碼有關(guān)基因表達(dá)。miR-26b能抑制PCOS患者體內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的正常表達(dá)，干擾葡萄糖和脂肪組織細(xì)胞代謝，參與PCOS發(fā)病過(guò)程[11]。同時(shí)，miR-26b在機(jī)體血清或卵泡液等含量較高，并能自由傳播擴(kuò)散，可對(duì)卵巢激素形成及卵泡發(fā)育和閉鎖等產(chǎn)生重要影響。而激素水平以及卵泡的不正常發(fā)育均為PCOS的重要臨床特征，因此miR-26b與PCOS的發(fā)病間聯(lián)系較為密切。另有研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者機(jī)體內(nèi)卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡數(shù)量明顯增多，且與卵泡液內(nèi)的miRNA表達(dá)譜變化有關(guān)[12]。miR-26b能夠抑制并調(diào)控DNA修復(fù)有關(guān)蛋白的自主mRNA轉(zhuǎn)錄，并促使DNA斷裂使細(xì)胞凋亡。一項(xiàng)將富含miR-26b質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到雌性動(dòng)物顆粒細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，顆粒細(xì)胞凋亡率明顯升高，說(shuō)明miR-26b與PCOS發(fā)病有關(guān)[13]。此外，本文相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PCOS組的血清miR-26b表達(dá)與LDL-C、HOMA-IR及BMI均呈正相關(guān)，而與對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性；進(jìn)一步分析僅有HOMA-IR是PCOS組血清miR-26b表達(dá)的危險(xiǎn)因素?？紤]是因?yàn)長(zhǎng)DL-C及BMI作為肥胖的反饋性指標(biāo)，miR-26b的表達(dá)及PCOS的發(fā)病產(chǎn)生了表面的肥胖癥狀聯(lián)系，而HOMA-IR與miR-26b則屬于相對(duì)內(nèi)在關(guān)聯(lián)。有報(bào)道表明[14]，40%～80%的PCOS患者有肥胖或超重表現(xiàn)，由于有肥胖癥狀的PCOS患者常伴有胰島素抵抗，加之脂肪組織內(nèi)miR-26b發(fā)生的異常性表達(dá)和葡萄糖及脂肪代謝的異常聯(lián)系緊密，因此miR-26b的表達(dá)與患者機(jī)體糖脂代謝異常也明顯相關(guān)。在胰島素抵抗層面，miR-26b可能是調(diào)控了機(jī)體內(nèi)胰島素有關(guān)信號(hào)通路或MAPK信號(hào)通路當(dāng)中胰島素樣生長(zhǎng)因子及受體底物，以及蛋白激酶B與促性腺激素釋放激素等物質(zhì)，致使正常通路被干擾或阻斷，最終導(dǎo)致胰島素抵抗，并由此參與了PCOS的發(fā)病。這在Jiang等[15]結(jié)果中也有類(lèi)似結(jié)論佐證。

綜上所述，血清miR-26b表達(dá)與PCOS患者糖脂代謝關(guān)系緊密，且HOMA-IR是患者血清miR-26b表達(dá)的危險(xiǎn)因素。臨床可將血清miR-26b作為監(jiān)測(cè)靶點(diǎn)，為臨床診斷治療PCOS提供依據(jù)。