王衛(wèi)國(guó)

摘要：無(wú)菌是注射劑的重要質(zhì)量控制要求之一，近年來(lái)注射劑滅菌工藝變更補(bǔ)充申請(qǐng)數(shù)量劇增。本文結(jié)合日常技術(shù)審評(píng)工作，從注射劑滅菌工藝篩選研究方面，對(duì)注射劑的無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行了闡述，同時(shí)介紹了近幾年無(wú)菌生產(chǎn)的新技術(shù)。

關(guān)鍵詞：注射劑; 滅菌工藝; 滅菌工藝驗(yàn)證;培養(yǎng)基模擬灌裝

注射劑是藥物與適宜的溶劑或者分散介質(zhì)制成的供注入體內(nèi)的一種制劑，在臨床應(yīng)用時(shí)直接注射入人體組織、器官或者血液。無(wú)菌是注射劑的重要質(zhì)量控制要求之一，合理并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滅菌工藝過(guò)程、良好的無(wú)菌保證體系是實(shí)現(xiàn)注射劑無(wú)菌的重要保障。

賽進(jìn)公司在注射劑領(lǐng)域的率先突破，改變了中國(guó)醫(yī)藥市場(chǎng)長(zhǎng)期以來(lái)形成的格局，它專(zhuān)注于重大疾病和高技術(shù)難度藥物。在無(wú)菌注射劑產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中，采用了更為尖端的無(wú)菌溶液灌裝技術(shù)。首次在亞洲實(shí)現(xiàn)全隔離聯(lián)動(dòng)線的大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)，突破了國(guó)內(nèi)普遍采用的高溫滅菌技術(shù)。生產(chǎn)全程無(wú)需高溫滅菌，高度的自動(dòng)化體系最大限度地提高了藥品的有效性和安全性，并同時(shí)保證了生產(chǎn)過(guò)程的高安全性。

賽進(jìn)公司生產(chǎn)的近4萬(wàn)支無(wú)菌注射劑抗癌藥。作為中國(guó)首批直接銷(xiāo)往美國(guó)市場(chǎng)的無(wú)菌注射劑產(chǎn)品，這批藥物預(yù)計(jì)在3天內(nèi)抵達(dá)美國(guó)田納西州孟菲斯，再被分發(fā)到美國(guó)各地的醫(yī)療機(jī)構(gòu)。據(jù)悉此次銷(xiāo)往美國(guó)的國(guó)內(nèi)首個(gè)無(wú)菌注射劑產(chǎn)品，刷新了多個(gè)“國(guó)內(nèi)首次”——這家專(zhuān)注于重大疾病和高技術(shù)難度藥物的蓉企，是國(guó)內(nèi)第一家公司整體通過(guò)美國(guó)食品藥品管理局（FDA）認(rèn)證的制藥企業(yè);去年7月該公司通過(guò)美國(guó)FDA國(guó)家級(jí)專(zhuān)家組的現(xiàn)場(chǎng)檢查，今年5月成為第一個(gè)產(chǎn)品獲得美國(guó)FDA上市批準(zhǔn)的企業(yè)。在無(wú)菌注射劑產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中，首次在亞洲實(shí)現(xiàn)全隔離聯(lián)動(dòng)線的大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)突破了國(guó)內(nèi)普遍采用的高溫滅菌技術(shù)。

滅菌工藝篩選研究

滅菌工藝篩選研究注射劑的滅菌工藝，一般可以從原料藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性、處方篩選研究、生產(chǎn)過(guò)程控制研究、不同滅菌工藝的比較研究等等方面考慮進(jìn)行。注射劑滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝決策樹(shù)進(jìn)行，首選終端滅菌工藝如果能夠耐受過(guò)度殺滅法（F 0≥12），則首選過(guò)度殺滅法;如不能耐受過(guò)度殺滅的條件可采用殘存概率法（8≤F 0<12）均應(yīng)保證產(chǎn)品滅菌后的無(wú)菌保證水平（SAL）不大于10-6。如果有充分依據(jù)證明不適宜采用終端滅菌工藝可采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝。

非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）無(wú)菌工藝的模擬灌裝試驗(yàn)。

無(wú)菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無(wú)菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料藥，按照生產(chǎn)工藝的不同可將注射劑分為最終滅菌和非最終滅菌兩種，非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）部分或全部采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝按照2010版GMP要求，需對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)工藝進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，以此評(píng)價(jià)其對(duì)產(chǎn)品無(wú)菌保證的有效性和穩(wěn)定性，本試驗(yàn)采用經(jīng)除菌過(guò)濾的大豆胰蛋白胨液體培養(yǎng)基在與實(shí)際生產(chǎn)相同的條件下，連續(xù)進(jìn)行三批培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)每批為10000支微生物培養(yǎng)結(jié)果均無(wú)菌生長(zhǎng)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試驗(yàn)前需滿(mǎn)足的先決條件培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)是一項(xiàng)復(fù)雜、系統(tǒng)的試驗(yàn)，試驗(yàn)前必須滿(mǎn)足一定的先決條件：（1）潔凈廠房及HVAC系統(tǒng)、配制及洗烘灌封系統(tǒng)的確認(rèn)已經(jīng)完成;（2）公用工程的驗(yàn)證已經(jīng)完成，包括純化水系統(tǒng)、注射用水系統(tǒng)、純蒸汽系統(tǒng)、壓縮空氣系統(tǒng);（3）各種滅菌工藝的驗(yàn)證已經(jīng)完成包括濕熱滅菌、除熱原工藝、無(wú)菌過(guò)濾工藝、配制及灌封系統(tǒng)滅菌;（4）人員已經(jīng)過(guò)無(wú)菌操作、更衣程序的培訓(xùn)。

1.2培養(yǎng)基的無(wú)菌性檢查

用經(jīng)滅菌的0.22μm除菌過(guò)濾器，對(duì)配制好的液體培養(yǎng)基進(jìn)行除菌過(guò)濾，濾芯過(guò)濾前后均進(jìn)行完整性測(cè)試，將培養(yǎng)基灌裝于已滅菌的10支50 mL的試管中，每支灌裝12 mL加塞、密封。其中5支樣品在23 ～28℃培養(yǎng)14 d另取5支樣品在30～35℃培養(yǎng)14 d。14 d內(nèi)若各瓶中無(wú)任何微生物生長(zhǎng)，以此作為陰性對(duì)照。

1.3培養(yǎng)基的微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)

取過(guò)濾后的大豆胰酪蛋白胨液體培養(yǎng)基灌裝于已滅菌的14支50 mL的試管中，每支灌裝12 mL加塞、密封，其中9支試管每2支分別接種<100 cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌，1 支不接種作為空白對(duì)照，在30～35℃培養(yǎng)7d。另外5支，其中4支試管中接種<100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，在23～28℃培養(yǎng)7 d。7天內(nèi)接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長(zhǎng)空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)則判定該培養(yǎng)基微生物性能生長(zhǎng)試驗(yàn)符合規(guī)定。

1.4模擬灌裝

安瓿瓶經(jīng)洗瓶機(jī)清洗、隧道烘箱除熱原后進(jìn)入灌裝線，開(kāi)啟灌裝機(jī)，檢查設(shè)備運(yùn)行情況良好調(diào)節(jié)相關(guān)參數(shù)后在與實(shí)際生產(chǎn)環(huán)境相同的條件下，進(jìn)行培養(yǎng)基灌封，2批調(diào)節(jié)裝量為3.5 mL/瓶，灌裝速度為20瓶/min/針，第3批調(diào)節(jié)裝量為0.7 mL/瓶，灌裝速度為35瓶/min/針。無(wú)菌灌裝時(shí)限為14h。灌裝過(guò)程中模擬了上述設(shè)計(jì)的最差條件和干預(yù)事件?？刂乒嘌b速度設(shè)置灌裝前中后三個(gè)階段，每個(gè)階段約灌裝3333支，其余時(shí)間設(shè)備正常運(yùn)行（不走瓶），灌封完的樣品及時(shí)傳出無(wú)菌區(qū)。

2 試驗(yàn)接受標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)GMP無(wú)菌附錄要求，零污染是進(jìn)行無(wú)菌工藝培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)，若有任何污染發(fā)生均應(yīng)當(dāng)調(diào)查，根據(jù)灌裝數(shù)量的不同，具體標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表4。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

3.1 培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查

5支樣品在23～28℃培養(yǎng)14 d，另5支樣品在30～35℃培養(yǎng)14 d。14 d內(nèi)若各瓶中無(wú)任何微生物生長(zhǎng)，培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查試驗(yàn)合格。

3.2 培養(yǎng)基微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)

大豆胰酪蛋白胨液體培養(yǎng)基分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，在30～35℃培養(yǎng)7 d，接種白色念珠菌、黑曲霉各2支，在23～28℃培養(yǎng)7d，進(jìn)行微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)，接種各試管微生物生長(zhǎng)良好，空白對(duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng)。

3.3 培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝結(jié)果

按照試驗(yàn)中設(shè)計(jì)的所有最差條件和干預(yù)事件，培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝過(guò)程中進(jìn)行了模擬并記錄全過(guò)程為實(shí)際生產(chǎn)提供依據(jù)。

3.54模擬灌裝過(guò)程中環(huán)境監(jiān)測(cè)

灌裝中各項(xiàng)環(huán)境監(jiān)測(cè)均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（除干預(yù)事件設(shè)計(jì)的溫濕度超標(biāo)3次外），無(wú)菌環(huán)境合格。

3.5結(jié)果評(píng)價(jià)

在與實(shí)際生產(chǎn)相同的條件下進(jìn)行了非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，其過(guò)程和結(jié)果真實(shí)反映了實(shí)際生產(chǎn)情況證明了非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）無(wú)菌生產(chǎn)工藝對(duì)產(chǎn)品無(wú)菌保證的有效性和穩(wěn)定性。

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