吳海燕，李春寧，胡成剛▲

(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550002；2貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550002)

鳳仙花，為鳳仙花科植物鳳仙花ImpatiensbalsaminaL.的全草。鳳仙花主要含黃酮醇類及萘醌衍生物，如2-甲氧基-1，4-萘醌、山奈酚-3-鼠李糖基雙葡萄糖苷、2-羥基-1，4-萘酚等[1]，鳳仙花的根含有指甲醌(lawsone)、2-甲氧基-1，4-萘醌(2-methoxy-1,4-naphthoquinone)、東莨菪素、異嗪皮啶、菠菜甾醇(spinasterol等，具有抗真菌、抗過敏、抗炎鎮(zhèn)痛、促皮透析等作用，其中2-甲氧基-1，4-萘醌(2-methoxy-1,4-naphthoquinone)為其主要的抗真菌成分，貴州省鳳仙花資源分布較廣，大部分為栽培品，鑒于該藥材中2-甲氧基-1，4-萘醌具有廣泛的抗真菌的效果[2]，為了更好的研究黔產(chǎn)鳳仙花藥材，該實驗建立了以2-甲氧基-1，4-萘醌的含量測定方法，為后續(xù)的研究提供一定的理論及實驗基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2030C液相色譜儀系統(tǒng)，恒溫水浴鍋(型號：HWS-24型，廠家：上海一恒科學(xué)儀器有限公司)、打粉機(型號：CS-700，廠家：永康市天祺盛世有限公司)、圓底燒瓶 500 mL、冷凝管400mm、電子天平。

1.2 試藥

2-甲氧基-1，4-萘醌對照品(批號：S20F719925，廠家：上海原葉生物科技有限公司，含量以98%計)，娃哈哈飲用純凈水，乙腈為色譜醇，乙醇、甲醇為分析醇，藥材樣品共10個批次，均采自貴州省，見表1。

表1 藥材樣品信息表

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

COSMOSIL Cholester色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)，流動相：A相為水，B相為乙腈；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μL，進行梯度洗脫，見表2。

表2 梯度洗脫程序表

2.2 溶液的制備

對照品溶液制備：精密稱取2-甲氧基-1，4-萘醌對照品5 mg，加入甲醇100 mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的對照品溶液[3]。

供試品溶液的制備：精密稱取鳳仙花藥材粉末1 g，加入100 mL的甲醇溶液，稱定重量，在90 ℃下回流提取1 h，放冷至室溫，稱定重量[4]，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用干燥的濾紙過濾后，續(xù)濾液用0.45 μm的微孔濾膜過濾后即得供試品溶液[5]。

2.3 專屬性試驗

在2.1色譜條件下，對照品和供試品均峰形良好，對照品的保留時間為14.445 min，樣品的保留時間為14.447 min。

圖1 2-甲氧基-1，4-萘醌對照品色譜圖

圖2 鳳仙花樣品溶液色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密稱取2-甲氧基-1，4-萘醌對照品6 mg，加入甲醇100 mL配成0.06 mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的對照品母液。精密吸取上述對照品溶液0.5 mL、3 mL、5 mL、7 mL、9 mL于10 mL容量瓶中，按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積對進樣濃度進行線性回歸，得回歸方程y=6*107x-16256(r=0.9997)。結(jié)果表明，2-甲氧基-1，4-萘醌濃度在0.0034～0.054 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表3。

表3 線性關(guān)系考察

圖3 線性關(guān)系圖

2.5 精密度試驗

精密吸取2-甲氧基-1，4-萘醌對照品溶液(0.04 mg/mL)，按2.1項下的色譜條件，連續(xù)進樣6次，每次進樣10 μL，測定2-甲氧基-1，4-萘醌成分峰面積，結(jié)果6次峰面積RSD=0.22%，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)要求(RSD在3%以內(nèi))，精密度良好。結(jié)果如表4所示。

表4 精密度考察(n=6)

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批號藥材，按2.2項下的供試品溶液制備的方法制備6份，以2.1項下的色譜條件，每次10 μL分別測定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面積，計算得2-甲氧基-1，4-萘醌的含量平均值為0.497 mg/g，RSD值=0.55%，結(jié)果見表5，表明供試品溶液重復(fù)性較好。

表5 重復(fù)性試驗(n=6)

2.7 穩(wěn)定性試驗

按2.2項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，以2.1項下的色譜條件，按0 h、2 h、6 h、4 h、8 h、10 h、12 h分別進樣10 μL，測定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面積平均值為291735，RSD=1.1%，結(jié)果見表6所示，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表6 穩(wěn)定性試驗

2.8 加樣回收率試驗

精密稱定鳳仙花藥材粉末0.5 g共6份，精密加入對照品0.3 mg，提取供試品溶液按2.1項下的色譜條件測定，每次10 μL分別測定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面積，按2015年版《中國藥典》四部附錄9101計算出回收率。結(jié)果見表7所示，該加樣回收平均值為100.05%，RSD=0.73%，表明該加樣回收率結(jié)果良好，符合定量分析要求。

表7 加樣回收率試驗

2.9 樣品含量測定

分別精密稱取對照品與10個批次的鳳仙花樣品各1 g，按2.2項下供試品溶液的制備方法提取并測定2-甲氧基-1，4-萘醌的含量，實驗結(jié)果見表8。

表8 黔產(chǎn)鳳仙花的含量測定

3 討論

1)實驗對鳳仙花的提取溶劑進行了考察對比，發(fā)現(xiàn)相同的樣品稱樣量及提取方法等條件一致的情況下，提取溶劑甲醇比乙醇的提取效果較好。

2)在對黔產(chǎn)鳳仙花藥材的目標(biāo)化學(xué)成分2-甲氧基-1，4-萘醌的含量測定中，實驗結(jié)果顯示鳳仙花生長環(huán)境比較好的地方，2-甲氧基-1，4-萘醌的含量較高，反之，鳳仙花生長環(huán)境污染較嚴(yán)重的地方，2-甲氧基-1，4-萘醌的含量較低。后續(xù)的研究中可以針對環(huán)境對鳳仙花藥材的影響以及鳳仙花是否對污染環(huán)境中的有害物質(zhì)有一定的吸附作用進行研究。

3)本實驗對貴州省部分產(chǎn)地的鳳仙花中主要的抗真菌成分2-甲氧基-1，4-萘醌的含量測定，可以對后期進行黔產(chǎn)鳳仙花的含量測定以及其他有關(guān)黔產(chǎn)鳳仙花的研究提供一定的參考依據(jù)。