周雅雪，魏升華，李 瑋，嚴福林，鄭 滔

(貴州中醫(yī)藥大學 藥學院，貴州 貴陽 550000)

白術(shù)(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)系源于菊科植物白術(shù)的干燥根莖[1-2]，為我國傳統(tǒng)常用中藥。別名山薊、楊梓、山精、術(shù)、山連、冬術(shù)、磚術(shù)等[3]，味苦、甘，性溫，歸脾、胃經(jīng)。白術(shù)中主要含有多糖、蒼術(shù)酮、蒼術(shù)醇、白術(shù)內(nèi)酯、含氧香豆素類、氨基酸及樹脂等成分[4-9]，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎等功效，在中醫(yī)臨床作用上非常廣泛，俗有“十方九術(shù)”“北參南術(shù)”之說，主要應用于脾虛食少、腹脹腹瀉、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動不安[1]等。

如今，產(chǎn)地加工的白術(shù)主要有曬術(shù)及烘術(shù)，而溫度及濕度對白術(shù)有效成分的影響是其研究較多的方向，并且注重在產(chǎn)地[11]加工對白術(shù)揮發(fā)油成分的影響研究上，而關(guān)于不同加工方法對白術(shù)多糖含量影響的研究鮮有報道[11-16]。本研究選取貴州白術(shù)，就白術(shù)多糖不同加工方法對白術(shù)總多糖含量的影響進行研究。通過烘干發(fā)汗法和陰干法對新鮮白術(shù)進行加工，考察產(chǎn)地加工對總多糖含量的影響，以期對白術(shù)藥材的加工方法進行優(yōu)選并為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

TU-1810 型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；HH-2 型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)；HS10260D 型超聲波清洗機(天津恒奧科技發(fā)展有限公司)；JA2003 型電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；ME204E 型電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；AUW220D 型十萬分之一電子分析天平(蘇州島津儀器有限公司)；CS101-1C 型鼓風干燥箱(重慶四達實驗儀器廠)；YHW-102 型遠紅外干燥箱(長沙儀器表廠)。

1.2 材料

甲醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；蒽酮(分析純，廣東光華化學廠有限公司)；濃硫酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；苯酚(分析純，成都金山化學試劑有限公司)；D(+)-無水葡萄糖對照品(批號：GZD-D-0114，購自貴州迪大生物科技有限責任公司，含量≥99%)；娃哈哈純凈水。白術(shù)藥材分別采用不同加工方法炮制，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學魏升華教授鑒定為菊科白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

將新鮮采挖的白術(shù)洗凈泥土，沖洗干凈，按表1中的加工方法進行加工。

表1 不同加工方法的白術(shù)樣品

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的白術(shù)藥材粉末約0.2 g，置100 mL錐形瓶中，加85%乙醇60 mL，置水浴中加熱回流1.5 h，趁熱過濾，殘渣用10 mL的85%乙醇洗滌兩次，將殘渣及濾紙置50 mL錐形瓶中，加蒸餾水25 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱過濾，吸取濾液2 mL于150 mL定容瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品5.01 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.1002 mg·mL-1的無水葡萄糖對照品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

取“2.3”項下無水葡萄糖對照品溶液，置于10 mL容量瓶中，定容至10 mL，即得濃度為0.05001 mg·mL-1的對照品溶液。

精密吸取稀釋后的無水葡萄糖對照品溶液0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL、1.3 mL、1.5 mL、1.7 mL、1.9 mL，置10 mL具塞干燥刻度試管中，各加水至2.0 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL，再精密加入硫酸5 mL，搖勻后置于沸水中水浴10 min，再放置在冰水中冷卻7 min，以蒸餾水為空白對照，在490 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(Y)，無水葡萄糖對照品含量(mg)為橫坐標(X)進行線性回歸，得白術(shù)總多糖回歸方程為：Y=7.6235X+0.0204，R2=0.9992；結(jié)果表明無水葡萄糖含量在0.035007～0.095019 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表2。

表2 無水葡萄糖標準曲線繪制數(shù)據(jù)(n=7)

圖1 無水葡萄糖標準曲線

2.4.2 精密度試驗

精密吸取稀釋后的無水葡萄糖對照品溶液1.0 mL，置10 mL 具塞干燥刻度試管中，平行6份，按照“2.4.1”項依法操作，在490 nm處測定吸光度，無水葡萄糖吸光度的RSD 值為1.042%，結(jié)果表明該儀器的精密度良好。

2.4.3 重復性試驗

按“2.2”項下供試品溶液的制備方法提取樣品6份，分別精密量取2 mL供試品溶液，置10 mL具塞干燥刻度試管中，按照“2.4.1”項依法操作，在490 nm處測定吸光度，總多糖含量的RSD 值為1.79%，結(jié)果表明該種提取方法重復性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗

精密量取樣品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥刻度試管中，按照“2.4.1”項依法操作，分別于0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h在490 nm處測定吸光度，總多糖吸光度的RSD值為1.90%，表明該樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗

精密稱取同一批干燥至恒重的樣品約0.1 g，平行6份，分別精密加入無水葡萄糖對照品如表3所示的量，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試液，按“2.4.1”項依法操作，在490 nm 波長處測定吸光度，計算回收率，結(jié)果白術(shù)藥材樣品中總多糖含量的平均加樣回收率為99.29%，RSD為0.67%，表明該方法可行。

表3 加樣回收率實驗結(jié)果(n=6)

2.5 樣品測定

精密稱取加工后的白術(shù)樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，精密量取2 mL供試品溶液，置10 mL具塞干燥刻度試管中，按照“2.4.1”項依法操作，在490 nm處測定吸光度，通過標準曲線計算樣品中無水葡萄糖的含量，每個加工方法重復測定3次，取其平均值作為最終結(jié)果，結(jié)果見表4。

表4 不同加工方法白術(shù)總多糖含量測定結(jié)果表(n=3)

2.6 結(jié)果與分析

如表4、圖2所示，樣品F1-F12為60 ℃烘干減重后發(fā)汗加工的白術(shù)樣品，其中樣品F10(60 ℃烘干減重至45%，發(fā)汗7 d，60 ℃烘干)總多糖含量最高，而樣品F6(60 ℃烘干減重至45%，發(fā)汗3 d，100 ℃烘干)總多糖含量最少。經(jīng)80 ℃烘干減重發(fā)汗加工的白術(shù)樣品(F13-F24)中，樣品F22(80 ℃減重至45%，發(fā)汗7 d，60 ℃烘干)總多糖含量最高，F(xiàn)19(80 ℃烘干減重至45%，發(fā)汗5 d，60 ℃烘干)次之，白術(shù)總多糖含量最少的是F24(80 ℃減重至45%，發(fā)汗7 d，100 ℃烘干)。經(jīng)100 ℃減重發(fā)汗加工的白術(shù)樣品(F25-F36)中，總多糖含量最高的是樣品F31(100 ℃烘減重至45%，發(fā)汗5 d，60 ℃烘干)，其次為F27(100 ℃烘減重至45%，發(fā)汗1 d，100 ℃烘干)，總多糖含量最少的為F36(100 ℃減重至45%，發(fā)汗7 d，100 ℃烘干)。樣品Y1為直接陰干的白術(shù)藥材(Y1)，由表4及圖2可知，與不同溫度烘干減重后，發(fā)汗加工的樣品相比，陰干白術(shù)樣品中總多糖含量明顯降低。由此可見，白術(shù)總多糖成分受加工影響較大，不經(jīng)過加工而直接陰干的白術(shù)因較難將白術(shù)中的總多糖成分提取出來，所以總多糖含量很低。減重發(fā)汗法中，最佳的減重發(fā)汗加工方法是80 ℃烘干減重至45%，發(fā)汗7 d，60 ℃烘干。

圖2 不同產(chǎn)地加工方法白術(shù)總多糖含量測定結(jié)果

3 討論

由上述數(shù)據(jù)分析顯示，以白術(shù)總多糖含量為評價指標，以直接陰干作為對比，對白術(shù)新鮮藥材進行烘干減重后發(fā)汗加工，對提高白術(shù)總多糖含量具有促進作用。比較發(fā)汗時間對總多糖的影響，發(fā)汗時間越長，總多糖含量相對較高。就烘干溫度而言，低溫烘干對白術(shù)中總多糖含量影響較小，而較高溫度烘干對總多糖含量影響較大，烘干溫度過高，會致使多糖成分糊化，從而降低了白術(shù)中的總多糖，另外是否在加工過程中成分之間發(fā)生了相互轉(zhuǎn)化或發(fā)生了生物化學反應，待進一步研究。由此可見，在白術(shù)藥材加工過程中，不宜將白術(shù)置于過高溫度下烘干，若要得到較高含量的總多糖，控制白術(shù)藥材于適宜的條件下進行加工，才能得到含較多總多糖成分的白術(shù)藥材。