胡峻峰

【摘? 要】目的：比較三種方法測定鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感性，比較不同方法所得結果的差異。方法：采用紙片擴散法（K-B法）、Vitek-2 Compact系統(tǒng)（下稱Vitek-2 法）和微量肉湯稀釋法檢測102株鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素（TGC）的敏感性，比較不同方法學所得結果的差異。結果：紙片擴散法、Vitek-2 法和微量肉湯稀釋法檢測結果顯示，102株鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感率分別為：47.0%、85.3%和98.0%;中介率分別為：51.0%，12.7%和1.0%;耐藥率分別為：2.0%，2.0%和1.0%。以微量肉湯稀釋法結果標準，紙片擴散法結果的總誤差率為53.0%，Vitek-2法結果的總誤差率為14.7%。結論：紙片擴散法或Vitek-2 法結果顯示鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素非敏感時，應采用微量肉湯稀釋法進行復核確認其敏感性。

【關鍵詞】鮑曼不動桿菌;替加環(huán)素;藥物敏感性實驗

【中圖分類號】R446????? 【文獻標識碼】A????? 【文章編號】1672-3783（2020）09-0044-01

Comparison of three methods for determining the sensitivity of Acinetobacter baumannii to tigecycline

Junfeng Hu

（Qing Bai Jiang Maternal And Child Health Hopital，Chengdu，Sichuan 614000，China）

【Abstract】Objective：To compare three methods to determine the sensitivity of the acycolide and compare the results of different methods .Methods：Using disc diffusion method（K-B method），2 Compact Vitek system（hereinafter referred to as Vitek-2 method）and trace the broth dilution test for 102 strains of acinetobacter baumannii to add ring element （the TGC） sensitivity ，comparing the difference between the results and the methodology .Results：disc diffusion method，Vitek-2 method and trace the broth dilution test，according to the results of 102 strains of acinetobacter baumannii to add ring element for sensitive rate is respectively：47%，85.3% and 98.0%;The intermediate rates were：51.0%，12.7% and 1.0%.The tolerance rate was 2.0%，2.0% and 1.0%;The total error rate of the paper diffusion method was 53.0%，and the total error rate of the Vitek-2 method was 14.7%.Conclusion：disc diffusion method or Vitek-2 test results show that the acinetobacter baumannii to add ring element for the sensitive， should be used in audit and confirm its sensitivity to trace the broth dilution method.

【Keywords】A.baumannii;Tigecycline;Drug susceptibility testing

替加環(huán)素屬于新一類超廣譜甘氨酰環(huán)素類抗生素，由于其抗菌譜廣，抗菌活性強，不易產(chǎn)生耐藥性，不良反應少而且輕，臨床使用方便，節(jié)約醫(yī)療資源^[1]。由于其對多重耐藥革蘭陰性桿菌具有強大的抗菌作用，目前已成為治療多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDR-AB）感染的重要選擇。但是替加環(huán)素理化性質(zhì)較活潑，易氧化降解，不宜在光線及空氣中久置，高溫及受潮環(huán)境下易形成差向異構體，從而導致替加環(huán)素有效抗菌活性降低，造成實驗誤差，該實驗操作過程很難標準化，直接影響檢測結果^[2]。為此，本研究比較紙片擴散法、Vitek-2法和微量肉湯稀釋法三種方法在測定鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素敏感性時結果的差異，為檢測其敏感性時藥敏方法的選擇和結果的解釋提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株

四川省人民醫(yī)院臨床分離的102株鮑曼不動桿菌，剔除同一患者分離的重復菌株，所有菌株均經(jīng)VITEK-2-Compact 微生物分析儀鑒定確認。

1.2 儀器與試劑

Vitek-2-Compact 全自動鑒定儀及配套藥敏AST-XN04、AST-GN 16卡（法國梅里埃公司），替加環(huán)素紙片（ 15μg /片，溫州市康泰生物科技有限公司），替加環(huán)素藥敏試劑（微量肉湯稀釋法 ， 0.25-32μg/ml， 溫州市康泰生物科技有限公司）

1.3方法

1.3.1紙片擴散法

按美國CLSI推薦的操作進行。對于鮑曼不動桿菌，抑菌圈直徑>=16mm為敏感（S），13-15mm為中介（I），<=12mm為耐藥（R）。（參考美國FDA藥敏標準）

1.3.2 Vitek-2 法

用Vitek-2-Compact 全自動鑒定儀配套GN藥敏卡進行藥敏試驗，具體操作參考說明書，儀器自動給出MIC值。對于鮑曼不動桿菌，MIC<=2μg/ml為敏感（S），MIC=4μg/ml為中介（I），MIC>=8μg/ml為耐藥（R）。（參考美國FDA藥敏標準）

1.3.3 微量肉湯稀釋法

嚴格按照CLSI及替加環(huán)素體外藥敏試驗操作規(guī)程的方法進行操作，對于鮑曼不動桿菌，MIC<=1μg/ml為敏感（S），MIC=2μg/ml為中介（I），MIC>2μg/ml為耐藥（R）。（參考美國FDA藥敏標準）

1.4質(zhì)控

替加環(huán)素（Tigecycline）紙片含量15μg，質(zhì)控菌株：ATCC 25923（20-25mm）、ATCC 27853（9-13mm）

1.5 誤差分析

以微量肉湯稀釋法為參考標準，分析其他2種方法與微量肉湯稀釋法測試結果的一致率。微量肉湯稀釋法藥敏結果為R，而其他方法為S，判為重大誤差。微量肉湯稀釋法藥敏結果為S，而其他方法為R，判為重要誤差。微量肉湯稀釋法藥敏結果為R或S，其他方法為I;或微量肉湯稀釋法藥敏結果為I，而其他方法為R或S，判為次要誤差。

2 結果

2.1三種方法檢測藥物敏感性結果（表1）

微量肉湯稀釋法檢測結果顯示，鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感率達98%。微量肉湯稀釋法檢測敏感率高于其他兩種方法，Vitek-2法和紙片擴散法結果敏感率分別為85.3%和47.0%。Vitek-2法和紙片擴散法結果的中介率亦遠高于微量肉湯稀釋法，分別為12.7%和51.0%。

2.2? Vitek-2法與紙片擴散法檢測結果差異性比較

以微量肉湯稀釋法為參考標準，Vitek-2法和紙片擴散法重要誤差率均為1.0%，未產(chǎn)生重大誤差。Vitek-2法檢測結果與微量肉湯稀釋法的一致率（85.3%）高于紙片擴散法與微量肉湯稀釋法的一致率（47.0%），Vitek-2法檢測結果與微量肉湯稀釋法的次要誤差率（13.7%）低于紙片擴散法與微量肉湯稀釋法的次要誤差率（52.0%）。

2.3 K-B法與微量肉湯稀釋法實驗數(shù)據(jù)分析（圖1，圖2）

由圖1.可見K-B法檢測替加環(huán)素抑菌環(huán)直徑大多在14mm（24.5%），而由美國FDA藥敏標準判斷為中介（I）;由圖2.微量肉湯稀釋法MIC分布圖可見MIC大多<=0.25μg/ml（42.2%），由BSAC判讀標準判斷為敏感（S），微量肉湯稀釋法測定鮑曼不動桿菌替加環(huán)素的敏感率遠超過K-B法。

2.4 三種方法中介結果比較分析

本次試驗102株臨床分離的鮑曼不動桿菌中13株Vitek-2 法檢測和K-B法檢測結果為中介（I），但其中12株菌株用微量肉湯稀釋法復查結果均顯示為敏感（S）。當Vitek-2 法和K-B法檢測鮑曼不動桿菌替加環(huán)素的敏感性為非敏感時，應用微量肉湯稀釋法復核，從而給予臨床正確的用藥意見。

3 討論

鮑曼不動桿菌在醫(yī)院內(nèi)分布廣，易感染且可長期存活，是院內(nèi)感染的一大重要的病原菌，其臨床癥狀嚴重且危急，尤其對免疫力低下、病情危重患者威脅極大。如今耐碳青霉烯類的鮑曼不動桿菌更是發(fā)展迅速，已引起臨床及微生物人高度警惕。

替加環(huán)素體外藥敏試驗包括K-B法、E-test法、瓊脂擴散法、微量肉湯稀釋法和細菌藥敏鑒定儀器等，不同方法學所得的藥敏結果有所差別。目前尚無CLSI推薦的紙片藥敏折點。2013年專家共識的出臺意在使臨床實驗室對替加環(huán)素的體外藥物敏感性檢測能簡單易行地開展，以及藥敏檢測結果具有可比性，必須統(tǒng)一替加環(huán)素體外藥敏檢測結果與臨床需求之間的匹配度^[4];檢測鮑曼不動桿菌菌株對替加環(huán)素的敏感性，紙片擴散法和Vitek-2儀器法檢測結果與微量肉湯稀釋法一致性較低時，應以微量肉湯稀釋法為推薦方法^[3]。

不同檢測方法的比較：微量肉湯稀釋法為參考方法，Vitek-2法在檢測替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的MIC_S值與微量肉湯稀釋法存在較大誤差，但操作簡便;紙片擴散法對于鮑曼不動桿菌的非敏感性比例高，操作簡便，成本低。

本實驗中三種不同方法檢測的102株臨床鮑曼不動桿菌菌株對替加環(huán)素的敏感性發(fā)現(xiàn)，三種方法符合性不好，與2013年專家共識結論一致;紙片擴散法與Vitek-2法極易高估替加環(huán)素的非敏感率。因此對于紙片擴散法和Vitek-2法檢測為非敏感的菌株應通過定量實驗再次檢測藥敏結果，以免造成臨床用藥選擇和劑量不當，加重患者負擔，增加病原菌的耐藥性。

TEST（tigecycline evaluation and surveillance trial）檢測結果表明，近年來替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的敏感性并無太大變化，但Venezia等報道在國外替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的耐藥率居高不下^[4]，目前國內(nèi)鮑曼不動桿菌多重耐藥形勢亦嚴峻，TGC成為了臨床重要的選擇，微生物室提供準確的抗菌藥物體外藥敏結果對臨床選用藥物及劑量至關重要，由于替加環(huán)素藥敏試驗操作中影響因素較多、不同方法學所得結果存在差異，本實驗驗證了

2013年專家共識的專家組推薦TGC體外藥敏檢測流程的可行性：

參考文獻

[1]? 張靜，周萬青，張之烽，繆素紅. 碳青霉烯類耐藥革蘭陰性桿菌替加環(huán)素體外藥敏分析[J]. 江蘇醫(yī)藥，2017，（03）：208-210.

[2]? 秦又發(fā)，吳雷，朱永坤，張揚. 替加環(huán)素聯(lián)合頭孢哌酮-舒巴坦治療廣泛耐藥鮑曼不動桿菌醫(yī)院獲得性肺炎臨床療效觀察[J]. 中國感染與化療雜志，2015，（05）：430-433.

[3]? 聞海豐，秦瑾. 替加環(huán)素等常用抗生素對鮑曼不動桿菌體外藥敏結果分析[J]. 中國抗生素雜志，2015，（07）：538-542.

[4]? 王康椿，李滿元，余曉騰，刁艷麗. 替加環(huán)素、多粘菌素和頭孢哌酮舒巴坦對多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌活性的研究[J]. 中國醫(yī)學創(chuàng)新，2015，（18）：17-20.