廖美琴

（桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司 廣西桂林 541004）

1 前言

近年來，我國(guó)心力衰竭發(fā)病率不斷升高，N-端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）是一種特異性標(biāo)志物，能夠檢測(cè)心力衰竭患者的嚴(yán)重程度。NT-proBNP是一種蛋白酶裂解產(chǎn)物，具有較高特異性，能夠被Thr71位點(diǎn)抗體識(shí)別。若患者體內(nèi)的NT-proBNP濃度大于300 pg/mL，患者患有心衰的可能性較高。為研究檢測(cè)NT-proBNP的方法，本文使用生物素化的NT-proBNP抗體和AP-標(biāo)記的NT-proBNP抗體進(jìn)行檢測(cè)。

2 資料與方法

2.1 材料和儀器

儀器：雷杜化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀Lumiray 1200。

試劑：生物素化的NT-proBNP抗體；AP-標(biāo)記的NT-proBNP 抗體；磁珠（10 mg/mL）；NT-proBNP 抗原；ProClin300；海藻糖；吐溫-20；羅氏 ProBNPⅡ試劑盒（對(duì)照）。

2.2 方法

2.2.1 制備抗體稀釋液

抗體稀釋液主要包括：3%牛血清白蛋白（BSA）、0.1%ProClin300、150 mmol/L NaCl、0.5%吐溫-20、1%海藻糖、10 mmol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris），調(diào)節(jié)pH穩(wěn)定在8.0。

2.2.2 制備抗體溶液

制備磁珠偶聯(lián)抗體溶液，將清洗后的磁珠稀釋為2 mg/mL，吸取200 mL與5 mg生物素化的抗體放置于離心管中，混合20 min，加入封閉劑，在磁力架吸磁10 min，將上清液移除，使用抗體稀釋液進(jìn)行重復(fù)吸磁，定容至1 000 mL。

制備AP-標(biāo)記的NT-proBNP抗體溶液，使用抗體稀釋液將AP-標(biāo)記的NT-proBNP抗體進(jìn)行1000倍稀釋處理。

2.2.3 配制校準(zhǔn)品

配制校準(zhǔn)品稀釋液，使用3%BSA、150 mmol/L氯化鈉、0.1%ProClin300、0.5%吐溫-20、1%海藻糖、20 mmol/L Tris、10%甘油，調(diào)節(jié)pH穩(wěn)定在7.4。使用校準(zhǔn)品稀釋液對(duì)抗原進(jìn)行稀釋，配制濃度為200、500、2 000、10 000 pg/mL的校準(zhǔn)品。

2.2.4 反應(yīng)流程

在反應(yīng)管中分別添加樣本試劑50 μL、生物素化的 NT-proBNP 抗體 50 μL、AP-標(biāo)記的 NT-proBNP抗體50 μL，在37℃環(huán)境下孵育10 min，進(jìn)行磁分離清洗；在閉光環(huán)境下添加發(fā)光底物3-（2-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧環(huán)乙烷二鈉鹽（AMPPD）200 μL；讀取總相對(duì)光子量。 繪制校準(zhǔn)曲線，進(jìn)行樣本檢測(cè)，依據(jù)待檢樣本測(cè)定的相對(duì)發(fā)光值，通過校準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)，使用t和χ2檢驗(yàn)資料，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 準(zhǔn)確度回收率測(cè)試

準(zhǔn)確度回收率為97.60%～105.68%，平均回收率為101.65%，詳見表1。

表1 準(zhǔn)確度回收率

3.2 準(zhǔn)確度比對(duì)

收集血清樣本100份，使用自制NT-proBNP試劑盒以及羅氏ProBNPⅡ試劑盒分別進(jìn)行測(cè)定，得到回歸方程為Y=0.9971X-8.2031，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.998 9，即r=0.999 4，證明二者具有較高的相關(guān)性，成對(duì)樣品的t檢驗(yàn)結(jié)果詳見表2。

從表2數(shù)據(jù)結(jié)果可知，配對(duì)樣本的P值=0.389＞0.05，2組試劑測(cè)試結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 成對(duì)樣本t檢驗(yàn)

4 討論

心率衰竭是全球性健康問題，目前尚不存在高效的治愈方法，這已成為醫(yī)療行業(yè)內(nèi)面臨的重要難題。有研究提出，我國(guó)患有心血管疾病的患者約為2.9億人，其中，心衰患者約占15.5%[1]。在臨床治療中，早期診斷具有重要價(jià)值，可有效控制患者病情，避免患者病情加重。NT-proBNP是診斷心衰患者嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，有研究提出，NT-proBNP濃度對(duì)早期心衰患者具有診斷價(jià)值[2]。NT-proBNP測(cè)定還可用于慢性心力衰竭的輔助診斷、預(yù)后及指導(dǎo)治療，是診斷慢性心力衰竭快速、敏感、特異的客觀指標(biāo)[3]。腦利鈉肽（BNP）等經(jīng)過分泌后，進(jìn)入外周血，通過血清檢測(cè)能夠得到檢測(cè)結(jié)果[4，5]。在本研究中，自制試劑盒回收率為90.1%～105.9%，平均回收率為99.0%，與羅氏ProBNPⅡ試劑盒具有較高相關(guān)性。由此可見，使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法進(jìn)行NT-proBNP的檢測(cè)，具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，能夠滿足臨床檢測(cè)的需要。綜上所述，使用自制NT-proBNP試劑盒，可以檢測(cè)NT-proBNP水平，指導(dǎo)心衰患者的臨床診斷和治療，為患者治療提供可靠的數(shù)據(jù)支持。