王 瑩，曾祥輝，黃大川，曾祥燕，任光云

(邵陽學院 食品與化學工程學院，湖南 邵陽 422000)

迷迭香(Rosmariniusofficinalis) 屬于雙子葉、多年生植物, 最早在地中海沿岸被發(fā)現(xiàn)，主要用于提取精油和抗氧化劑。迷迭香葉中的許多成分都屬于天然抗氧化劑，如黃酮類、萜類、酚酸類等成分，而萜類中的迷迭香酚、迷迭香酸、鼠尾草酚、鼠尾草酸為其主要的抗氧化性成分[1]。人工合成抗氧化劑，如TBHQ、BHA、BHT、PG，具有生產(chǎn)成本低、抗氧化性能強以及應用比較廣泛的優(yōu)點，但其存在副作用和潛在毒性[2]?，F(xiàn)代人們追求天然、健康的食品已經(jīng)成為一種趨勢。迷迭香提取物作為一種天然抗氧化劑，具有安全性高、高效性、耐高溫性[3-6]等優(yōu)點，在抗菌、抗病毒方面有一定的作用[7]。如何更好地利用迷迭香抗氧化劑已成為研究天然抗氧化劑的熱點。

目前，迷迭香抗氧化劑提取方法主要有水蒸氣蒸餾法、溶劑提取法、超聲波浸提法、微波浸提法和超臨界流體萃取法，制取工藝不同各成分的含量略有差異[8]。其中，溶劑提取法實驗裝置簡單，容易操作，成本低，并且提取率、純度高，穩(wěn)定性好，是使用最廣的一種提取方法。溶劑提取法一般采用乙醇作為提取溶劑，與此相關(guān)的研究方法已比較成熟，但在回收溶劑的過程中受操作條件的影響，鼠尾草酸容易轉(zhuǎn)變成抗氧化作用相對較低的鼠尾草酚，導致整體抗氧化作用降低[9]。為給迷迭香抗氧化劑提供一個全新、安全、穩(wěn)定的提取方法，本研究首次以無添加食用油為提取劑，對迷迭香脂溶性抗氧化劑的提取工藝條件進行優(yōu)化，得到迷迭香脂溶性抗氧化劑的最佳提取條件，以期推動迷迭香天然抗氧化劑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

迷迭香干葉，無添加食用油(自榨，由花生冷榨制取)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，磷酸(色譜純)，鼠尾草酸標準品(大連美侖生物技術(shù)有限公司，HPLC純度≥98%)。

FW80高速萬能粉碎機，天津泰斯特儀器有限公司；DZKW-4電子恒溫水浴鍋，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；CP114分析天平，奧豪斯儀器上海有限公司；TD4臺式低速離心機，湖南赫西儀器設備有限公司；SHB-D(III) A抽濾機，河南省泰斯特儀器有限公司；U3000高效液相色譜儀，Thermo Fisher公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品預處理

迷迭香干葉分別經(jīng)水蒸氣蒸餾法和水煮法[10]去精油，再于45℃烘箱低溫干燥后粉碎過80目篩，得迷迭香渣備用。

隧道工程支護施工技術(shù)科學合理準確的使用是保證隧道安全施工作業(yè)的基礎性條件。大家知道，隧道內(nèi)部的排水系統(tǒng)的施工難度是非常大的，而且施工的綜合性比較強，因此隧道結(jié)構(gòu)防水技術(shù)的合理準確的應用要根據(jù)施工現(xiàn)場的實際情況而定。通常隧道結(jié)構(gòu)防水的基本原則是“防水、排水、堵水相結(jié)合”，常用的施工方法就是在隧道洞的兩側(cè)挖掘排水渠、在隧道洞口上方建造截水溝，在隧道內(nèi)部水溝的出水位置安裝保溫包頭。同時還要密切關(guān)注隧道施工縫、變形縫處的排水系統(tǒng)的設計和建造工作。

說到最為珍貴的收藏品，李建明轉(zhuǎn)身進入里間，取出沉甸甸一枚。銀質(zhì)毛主席像章，顏色發(fā)烏，一枚獎章，1960年制造。說起方才看到的那枚上有大泉山字樣的像章，李建明打開話匣子，說是鋁質(zhì)的，直徑7厘米，極為少見。前不久大泉山村第一書記，花了120元，從網(wǎng)上買回兩枚送他。李建明分析，估計是1969年左右制作的。因為越做越多、越做越大的像章用掉大量金屬物資，那年毛主席呼吁“還我飛機”制止。大泉山毛主席像章，因此沒來得及發(fā)行。

稱取2.00 g迷迭香渣于150 mL錐形瓶中，按一定料液比加入無添加食用油，置于一定溫度的恒溫水浴鍋中提取一定時間，取出冷卻后在3 500 r/min下離心20 min，收集上清液(若提取多次，離心沉淀繼續(xù)重復提取后離心，合并上清液)，抽濾，濾液按體積比1∶20加乙腈進行提取，重復2次，將乙腈提取后的上層液于40℃恒溫水浴鍋蒸發(fā)回收乙腈，得到迷迭香脂溶性抗氧化劑提取液。

2.1.2 料液比對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

1.2.3 總抗氧化成分(以鼠尾草酸和鼠尾草酚計)的測定

在提取溫度60℃、料液比1∶10、提取次數(shù)3次的條件下，考察提取時間對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響，結(jié)果見圖3。

按下式計算迷迭香脂溶性抗氧化劑得率(Y)。

根據(jù)PDCA對我院2017年8月臨床免疫檢驗活動，歸納出影響臨床免疫檢驗質(zhì)量的因素主要有檢驗環(huán)境問題，檢驗人員素質(zhì)、檢驗設備狀態(tài)，環(huán)節(jié)管理等等，為此要要制定針對性的改進策略，采用PDCA循環(huán)管理可有效針對各環(huán)節(jié)、各方面采用多種評價方法進行問題分析和策略制定[4] 。

Y=(C1+C2)×V/m×100%

為促進農(nóng)業(yè)設施裝備轉(zhuǎn)型升級，江西將開展水果分級機和溫室大棚購置補貼試點工作，符合條件的從事農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的個人和相關(guān)經(jīng)營組織，可在試點期限內(nèi)申請相關(guān)購置補貼。

式中：C1為鼠尾草酸含量，mg/mL；C2為鼠尾草酚含量，mg/mL；V為迷迭香脂溶性抗氧化劑提取液體積，mL；m為試樣質(zhì)量，mg。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗

2.1.1 提取溫度對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

由圖1可以看出，對于水煮法去精油的原料，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率隨著提取溫度的升高不斷增大，在60℃時達到最大，隨后有所降低。對于蒸餾法去精油的原料，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率變化趨勢和水煮法的相似，但在70℃時得率最高。兩者均在超過一定的溫度后得率有所下降，可能是由于提取溫度過高導致其抗氧化成分氧化或分解，造成抗氧化劑失活所致。綜合考慮，水煮法去精油的原料選用提取溫度為60℃，蒸餾法去精油的原料選用提取溫度為70℃。

在料液比1∶10、提取時間60 min、提取次數(shù)3次的條件下，考察提取溫度對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響，結(jié)果見圖1。

圖1 提取溫度對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

(2) 每步土方開挖均存在支撐架設滯后的現(xiàn)象，均未按照先撐后挖的設計要求實施(因挖掘機及運土車輛均在基坑內(nèi)作業(yè))，擴大端內(nèi)對撐未及時架設，不能封閉成環(huán)，起不到支撐作用，且土方超挖后，局部支撐架設仍然滯后(見圖9)。

本文研究基于OBE工程教育模式的軟件工程課程改革，定義軟件工程課程教學目標，按照工程教育認證要求設計課程教學活動，進行課程產(chǎn)出的綜合評價，持續(xù)改進學生軟件開發(fā)能力和創(chuàng)新能力?；贠BE工程教育模式的軟件工程課改促進了教師的專業(yè)技術(shù)能力和教學能力的提升，改革措施符合學校全面推行的工程教育專業(yè)認證，取得的成果對培養(yǎng)軟件工程應用型人才具有一定的指導作用。

在提取溫度60℃、提取時間60 min、提取次數(shù)3次的條件下，考察料液比對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響，結(jié)果見圖2。

圖2 料液比對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

由圖2可以看出，對于兩種方法去精油的原料，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率均隨著料液比的增大而呈先增大后減小趨勢，均在料液比為1∶11時達到最大，之后繼續(xù)增大料液比迷迭香脂溶性抗氧化劑得率變化不大。加大溶劑用量，可以增加有效物質(zhì)和溶劑的接觸機會，還可以增加原料細胞內(nèi)外有效成分的濃度差(傳質(zhì)推動力)，因而增大料液比有利于提高有效物質(zhì)的得率，繼續(xù)增大料液比抗氧化劑得率并沒有提高，這可能是因為料液比繼續(xù)增大后，迷迭香內(nèi)多糖類物質(zhì)等的溶解量增加，從而對有效物質(zhì)起到了吸附沉淀作用，因此兩種原料最終均選取料液比為1∶11。

2.1.3 提取時間對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

參照GB 1886.172—2016，采用高效液相色譜法測定迷迭香脂溶性抗氧化劑提取液中總抗氧化成分(以鼠尾草酸和鼠尾草酚計)含量。HPLC條件： C18反相色譜柱(4.6 mm×250 mm×5 μm)；流動相A為0.1%磷酸溶液，流動相B為乙腈，梯度洗脫 (0～35 min、77% A-23% B)；柱溫30℃；檢測波長280 nm；流動相流速1.0 mL/min；進樣量10 μL。

圖3 提取時間對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

由圖3可以看出，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率隨著提取時間的延長呈先上升后穩(wěn)定的趨勢，說明提取時間與有效物質(zhì)的浸出過程密切相關(guān)，提取時間過短，有效物質(zhì)溶解不充分，提取時間過長，可能會導致有效物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。對于水煮法去精油的原料迷迭香脂溶性抗氧化劑得率在提取60 min后增加比較緩慢，增幅不明顯；而對于蒸餾法去精油的原料迷迭香脂溶性抗氧化劑得率在提取80 min后增加比較緩慢，增幅不明顯。因此，水煮法去精油的原料選取提取時間為60 min，蒸餾法去精油的原料選取提取時間為80 min。

2.1.4 提取次數(shù)對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

目前對脊柱腫瘤的外科治療有多種手段，如傳統(tǒng)的開刀手術(shù)治療和微創(chuàng)治療。有截癱風險或已經(jīng)發(fā)生截癱的一部分患者，需要進行開刀手術(shù)，通過手術(shù)切除病變解除脊髓神經(jīng)的壓迫，重建脊柱穩(wěn)定性后依然可以自主行走，生活自理。患椎體溶骨性轉(zhuǎn)移瘤、骨髓瘤、血管瘤的一部分患者可選擇微創(chuàng)治療，如粒子植入術(shù)（針對惡性腫瘤）、經(jīng)皮椎體成形術(shù)等，這些治療方法能夠降低截癱的風險。

1.2.2 迷迭香脂溶性抗氧化劑的提取

在提取溫度60℃、料液比1∶10、提取時間60 min條件下，考察提取次數(shù)對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響，結(jié)果見圖4。

圖4 提取次數(shù)對迷迭香脂溶性抗氧化劑得率的影響

由圖4可以看出，對于蒸餾法去精油和水煮法去精油的原料，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率均在提取次數(shù)為4次時最高，之后，繼續(xù)增加提取次數(shù)，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率降低。增加提取次數(shù)能使抗氧化劑提取更完全，但過長時間提取會使有效成分的結(jié)構(gòu)遭到破壞或被氧化，從而導致其得率降低。因此，兩種方法去精油的原料均選取提取次數(shù)為4次。

2.2 響應面試驗

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，采用Box-Behnken響應面試驗設計對兩種方法去精油的原料中迷迭香脂溶性抗氧化劑的提取條件進行優(yōu)化，響應面因素水平分別見表1、表2，響應面試驗設計方案及結(jié)果見表3，方差分析見表4。

學習建議 由角F1PF2=60°，知道F1P=a=2c,所以而要想最大視角F1PF2大于60°，橢圓只能變得“越來越扁”，即離心率越來越大，而橢圓的離心率不能大于等于1，所以本題離心率的范圍為

表1 水煮法去精油的因素水平

表2 蒸餾法去精油的因素水平

表3 響應面試驗設計方案及結(jié)果

表4 方差分析

根據(jù)響應面試驗模型可得出，水煮法去精油的原料迷迭香脂溶性抗氧化劑最優(yōu)提取條件為提取溫度61℃、料液比1∶11、提取時間61 min、提取次數(shù)5次，此時迷迭香脂溶性抗氧化劑得率預測值為2.920 3%。在最優(yōu)提取條件下，重復進行3次平行驗證試驗，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率平均為2.860 1%，與預測值相差不大，表明該模型的可靠性較高。蒸餾法去精油的原料迷迭香脂溶性抗氧化劑最優(yōu)提取條件為提取溫度71℃、料液比1∶11、提取時間81 min、提取次數(shù)4次，此時的迷迭香脂溶性抗氧化劑得率預測值為3.839 7%。在最優(yōu)提取條件下，重復進行3次平行驗證試驗，迷迭香脂溶性抗氧化劑得率平均為3.801 3%，與預測值相差不大，表明該模型的可靠性較高。

3 結(jié) 論

本研究通過響應面分析法建立了迷迭香脂溶性抗氧化劑提取工藝的數(shù)學模型，以抗氧化劑得率為指標，通過響應面分析最終確定了蒸餾法和水煮法去精油后，采用無添加食用油提取其中的脂溶性抗氧化劑的最優(yōu)條件。對比分析表明，蒸餾法去精油的抗氧化劑得率(3.801 3%)優(yōu)于水煮法去精油的(2.860 1%)。

目前，對迷迭香中抗氧化劑的提取大多是采用有機溶劑提取法，其他提取劑的研究較少，從而限制了迷迭香的綜合開發(fā)利用。本研究采用無添加食用油作提取劑，提供了一個全新、安全、無害及穩(wěn)定的迷迭香脂溶性抗氧化劑的提取方法，且此方法提取的天然脂溶性抗氧化劑為其在食用油保鮮技術(shù)等方面的研究提供一定的理論參考依據(jù)。