陸霓虹 夏加偉 劉洪璐

[摘要] 目的 探討早期分泌靶向抗原（ESAT-6）及基質金屬蛋白酶14（MMP-14）在人類免疫缺陷病毒（HIV）并肺結核患者病情嚴重程度評估中的價值。 方法 回顧性分析2018年7月—2019年7月于昆明市第三人民醫(yī)院確診的HIV感染并肺結核患者42例（A組）、單純肺結核患者50例（B組）及門診健康體檢者21名（C組）。抽取空腹靜脈血完成ESAT-6、MMP-14及免疫功能的檢測。 結果 三組人群ESAT-6表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），其中C組未見表達。三組人群MMP-14、CD4+T、CD8+T及CD3+T細胞水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。其中A、B組患者MMP-14高于C組，且A組高于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）;A、B組患者CD4+T、CD8+T、CD3+T細胞水平低于C組，且A組低于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。ESAT-6與CD4+T、CD8+T表達呈負相關（r = -0.34、-0.48，P < 0.05）。MMP-14表達與CD4+T、CD8+T、CD3+T表達呈負相關（r = -0.32、-0.33、 -0.54，P < 0.05）。MMP-14與病情嚴重程度呈正相關（r = 0.78，P = 0.00）。 結論 ESAT-6與MMP-14在HIV并肺結核重癥患者中表達增高，MMP-14在病重患者中升高明顯，兩者與疾病進展密切相關，可以進一步評估該類患者預后。

[關鍵詞] 人類免疫缺陷病毒合并肺結核;肺結核;靶向抗原;基質金屬蛋白酶14

[中圖分類號] R446.11 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）08（b）-0115-04

[Abstract] Objective To explore the value of early secretion of targeted antigen （ESAT-6） and matrix metalloproteinase 14 （MMP-14） in the evaluation of the severity of human immunodeficiency virus （HIV） patients with tuberculosis. Methods A retrospective analysis was made on 42 cases of HIV complicated with tuberculosis infection（group A）， 50 cases of tuberculosis infection （group B） and 21 people of health examination （group C） in outpatient clinic from July 2018 to July 2019 in Kunming Third People′s Hospital. Fasting venous blood was taken to detect ESAT-6， MMP-14 and immune function. Results The expression of ESAT-6 in the three groups were compared， and the difference were statistically significant （P < 0.05）， while there was no expression in group C. Comparison of the levels of MMP-14， CD4+T， CD8+T and CD3+T cells in the three groups showed statistically significant differences （P < 0.05）. Among them， the MMP-14 of patients in group A and B were higher than those in group C， while group A was higher than that in group B， and the differences were statistically significant （P < 0.05）; the levels of CD4+T， CD8+T and CD3+T cells in group A and B were lower than those in group C， while group A was lower than that in group B， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. ESAT-6 was negatively correlated with the expression of CD4+ T and CD8+ T （r = -0.34， -0.48， P < 0.05）. The expression of MMP-14 was negatively correlated with the expression of CD4+ T， CD8+ T， and CD3+ T （r = -0.32， -0.33， -0.54， P < 0.05）. MMP-14 was positively correlated with the severity of the disease （r = 0.78， P = 0.00）. Conclusion The expression of ESAT-6 and MMP-14 are increased in severely ill patients with HIV and tuberculosis， and MMP-14 is significantly increased in severely ill patients. Both are closely related to disease progression， and the prognosis of these patients can be further evaluated.

[Key words] Human immunodeficiency virus with tuberculosis; Tuberculosis; Early secretary antigentic target 6kDa protein; Matrix metalloproteinase 14

人類免疫缺陷病毒（HIV）的播散導致人體免疫功能下降，機會性感染增加[1]。HIV感染常伴結核分枝桿菌（MTB）感染，患者病情易進展為獲得性免疫缺乏綜合征（AIDS），進一步增加患者死亡率[2]。2018年世界衛(wèi)生組織報道HIV并肺結核患者逐年增加，嚴重威脅人類健康[3]。靶向抗原（ESAT-6）為致病性MTB特異性抗原，基質金屬蛋白酶14（MMP-14）為炎癥特異因子，二者表達增加是否與病情嚴重程度相關，目前仍未可知[4]。本研究擬分析HIV并肺結核患者、單純性肺結核患者與健康者ESAT-6與MMP-14的表達情況，評估ESAT-6與MMP-14在疾病進展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年7月—2019年7月昆明市第三人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的HIV并肺結核患者為A組（42例），單純肺結核患者為B組（50例），健康對照組為C組（21名）。A組女18例，男24例;年齡23～65歲，平均（41.90±13.21）歲;HIV感染者30例，AIDS患者12例;肺部有空洞病灶18例，伴有肺外結核20例。B組女24例，男26例;年齡18～70歲，平均（44.42±15.07）歲;輕癥結核27例，重癥結核23例;肺部有空洞病灶24例，伴有肺外結核16例。C組女10名，男11名;年齡22～61歲，平均（37.57±13.17）歲。三組人群性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。A、B組病情嚴重程度，肺部有無空洞病灶，有無肺外結核比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究已通過我院醫(yī)學倫理委員會審核，所有入組患者均簽署知情同意書。

1.2 診斷、納入及排除標準

1.2.1 HIV抗體檢測 ?所有HIV病例均經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）初篩，陽性者送云南省疾病預防控制中心用蛋白印跡法（WB）確診，AIDS診斷則按中華人民共和國國家標準《HIV/AIDS診斷標準和處理原則》[5]。

1.2.2 肺結核診斷標準 ?根據(jù)肺結核的診斷標準進行診斷[6]。

1.2.3 HIV并肺結核患者診斷 ?①HIV檢測陽性;②痰查抗酸桿菌陽性（排除非結核分枝桿菌）;③有肺結核的影像學表現(xiàn)。痰查陰性者除上述①、③還包括：④有結核病的相關臨床癥狀;⑤抗結核治療有效;⑥實驗室檢查支持肺結核診斷;⑦排除糖尿病等其他導致免疫功能低下的疾病。

1.2.4 納入標準 ?①符合上述診斷標準;②年齡18～70歲;③首次發(fā)病就診，檢查資料完整。

1.2.5 排除標準 ?合并其他肺部病變或其他系統(tǒng)嚴重疾病致免疫功能低下者。

1.3 方法

1.3.1 設備 ?美國BD公司FACS Calibur型流式細胞儀;德國Eppendorf移液器;中國海爾4℃或-20℃冰箱;美國Thermo scientific公司ST 8R高速冷凍離心機;美國Molecular公司SPECTCA MAX190酶標儀;中國上海森信DGG-9140B電熱恒溫鼓風干燥箱。

1.3.2 試劑 ?人ESAT-6 ELISA試劑盒購自英國Oxford公司，生產(chǎn)批號：0903H;人MMP-14定量分析酶免疫檢測試劑盒（生產(chǎn)批號：07/2019）購自上海巧伊生物科技有限公司。

1.3.3 試驗方法 ?采集各組人群清晨空腹靜脈血6 mL，室溫靜置15～30 min后以3000 r/min速度離心15 min，離心半徑為16.80 cm，離心后取上清。血清ESAT-6和MMP-14濃度的檢測按試劑盒說明書進行，終止反應后置于450 nm波長的酶標儀上讀取各孔的吸光度（OD）值，以標準品OD值為縱坐標，以標準品的濃度為橫坐標繪制標準曲線，根據(jù)被檢測標本的OD值及標準曲線算出相應的濃度。外周血T淋巴細胞亞群計數(shù)采用流式細胞分析儀進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法

運用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD多重比較。計數(shù)資料以例數(shù)表示，采用χ2檢驗。相關性分析采用線性相關Pearson及等級相關Spearman進行分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組人群實驗室指標比較

三組人群ESAT-6表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），其中C組未見表達。三組人群MMP-14、CD4+T、CD8+T及CD3+T細胞水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。其中A、B組患者MMP-14高于C組，且A組高于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）;A、B組患者CD4+T、CD3+T、CD8+T細胞水平低于C組，且A組低于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 ESAT-6、MMP-14與免疫功能相關性分析

ESAT-6與CD4+T、CD8+T表達呈負相關（r = -0.34、-0.48，P < 0.05）。MMP-14表達與CD4+T、CD8+T、CD3+T表達呈負相關（r = -0.32、-0.33、-0.54，P < 0.05）。

2.3 ESAT-6、MMP-14與病情嚴重程度分析

ESAT-6與病情嚴重程度無相關性（P > 0.07）。MMP-14與病情嚴重程度呈正相關（r = 0.78，P = 0.00）。

3 討論

HIV并肺結核的發(fā)病率逐年上升，尤其是進展到AIDS并肺結核的患者死亡率更高[7]。如何評估該類患者的嚴重程度及疾病進展變化，從而調整治療方案，減少患者死亡率，是目前臨床研究的重點。

ESAT-6是6 kD早期分泌靶向抗原，是從結核桿菌短期培養(yǎng)濾液（ST-CF）中純化分離出的一種低分子量分泌性蛋白，具有較強的細胞免疫活性，僅在致病性MTB中表達[8-9]。HIV并肺結核患者免疫功能受損嚴重，病情進展較快。本研究顯示，與C組比較，ESAT-6在A、B組患者中表達均上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。研究顯示[8]ESAT-6具有幫助MTB免疫逃逸的作用，能加強MTB的侵襲性，加重病情。通過研究結果分析監(jiān)測ESAT-6的變化，可以進一步評估患者病情。

本研究顯示，ESAT-6與免疫系統(tǒng)T淋巴細胞亞群受損密切相關，A、B組ESAT-6表達上升，CD3+T、CD4+T細胞降低，與C組比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。提示ESAT-6的免疫活性促進MTB侵襲，巨噬細胞表達下降，進一步導致T淋巴細胞，尤其是CD4+T表達降低，符合文獻報道[10-12]。

MMPs主要與動脈粥樣硬化具有相關性，近年研究顯示MMPs與炎癥、腫瘤也具有一定相關性[13-16]。MMPs充當HIV-1病毒Tat蛋白對宿主的攻擊與細胞外基質之間的接口，后者通過降解細胞外基質（ECM）導致內皮屏障的破壞。該過程啟動了病毒在組織中的傳播，可能導致HIV-1感染增加[17-18]。

MMP-14為MMPs家族中的一員，主要促進降解ECM加重炎癥反應，促進病情進展[19-20]。既往研究中主要顯示MMP-9在HIV患者神經(jīng)系統(tǒng)疾病中表達升高，可以進一步評估預后[21]。然而，關于MMP-14的相關研究較少。本研究顯示MMP-14在A組患者中表達升高，尤其在AIDS并肺結核患者中表達明顯升高，提示MMP-14與免疫功能下降及疾病嚴重程度密切相關。本研究結果顯示MMP-14可以作為一個臨床監(jiān)測指標進一步評估HIV并肺結核患者疾病進展及預后分析。

綜上所述，ESAT-6聯(lián)合MMP-14可以作為HIV并肺結核患者疾病嚴重程度及預后分析的主要監(jiān)測指標，進一步應用于臨床，具有良好的實用性及科研價值。

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（收稿日期：2019-10-29）