李 勇， 李佳穎， 任守才， 李成元

（1.棗莊職業(yè)學(xué)院農(nóng)學(xué)系，山東棗莊 277000；2.華僑大學(xué)化工學(xué)院，福建廈門(mén) 361000）

小薊（Cirsium setosum）為菊科薊屬野菜，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值。李桂鳳（1999）研究表明，小薊含豐富的蛋白質(zhì)、脂肪和糖類，鈣、鉀、鐵、鋅、錳、銅、硒多種礦質(zhì)元素以及胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、維生素C等多種維生素。潘浦群（2009）發(fā)現(xiàn)小薊含天門(mén)冬氨酸、絲氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸等17種氨基酸。張欣（2006）發(fā)現(xiàn)，小薊活性多糖木糖、鼠李糖、β-吡喃多糖、氨基多糖等能調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)。楊炳友（2017）發(fā)現(xiàn)，干燥后的小薊含3% ～16%黃酮類物質(zhì)，具有止血、凝血、抑菌、抗氧化等多種功能。

魯南柴雞蛋以蛋黃比例大且顏色發(fā)黃，蛋清黏稠著稱，受到人們喜愛(ài)，近年來(lái)由于受飼糧和養(yǎng)殖環(huán)境等因素影響，蛋品質(zhì)有所下降，主要表現(xiàn)為蛋殼易損、哈氏單位降低、蛋黃顏色淺、蛋黃較小、膽固醇含量較高等方面，給蛋的貯運(yùn)、食用和加工帶來(lái)影響，成為行業(yè)中亟待解決的問(wèn)題。功能性植物提取物可改善蛋品質(zhì)。盧健等（2013）認(rèn)為，萬(wàn)壽菊提取物能提高雞蛋哈氏單位和蛋黃顏色。龍彬（2018）等認(rèn)為藍(lán)莓提取物能顯著提高蛋黃顏色、哈式單位、粗蛋白質(zhì)含量，降低膽固醇。魯南柴雞耐草飼性能好，特別喜食一些野菜。小薊提取物含豐富的營(yíng)養(yǎng)和活性物質(zhì)，但其對(duì)雞蛋品質(zhì)的影響鮮見(jiàn)報(bào)道，因此本試驗(yàn)旨在研究小薊提取物對(duì)魯南柴雞蛋品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 小薊提取物，自制。春季采自薛城東部郊區(qū)，新鮮小薊經(jīng)破碎榨汁，80目濾篩慮去粗纖維，汁液真空濃縮，噴霧干燥，冷卻，即得到小薊提取物干粉，其特征是黃綠色粉末。根據(jù)測(cè)量和新鮮小薊營(yíng)養(yǎng)成分計(jì)算，其營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

表1 小薊提取物主要成分（100 g干粉含量）

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物 采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取健康個(gè)體差異性較小的240只32周齡處于產(chǎn)蛋高峰期的魯南柴雞，隨機(jī)分為4組，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1、2、3組分別飼喂添加2%、4%、6%小薊提取物日糧，每組10只，設(shè)6個(gè)重復(fù)。預(yù)飼1周，正式飼養(yǎng)6周。

1.3 試驗(yàn)飼糧 采用玉米－豆餅混合型基礎(chǔ)飼糧，營(yíng)養(yǎng)水平參照我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T33—2004)，及美國(guó) NRC（2012）蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際配制成粉料?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)場(chǎng)地位于薛城常莊農(nóng)學(xué)系蛋雞養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)基地。采用3層階梯式籠養(yǎng)，每籠5只雞，2籠為 1個(gè)重復(fù)，每組6個(gè)重復(fù)，各組在舍內(nèi)平均分布。小薊提取物與基礎(chǔ)飼糧加工成顆粒飼糧全程飼養(yǎng)，光照 16 h，白天可采用自然光，舍內(nèi)溫度控制在26℃左右，自由飲水，每天喂食2次（上午 9：00 和下午 3：00），每天早上 8：00 和下午4：00揀蛋并記錄稱重，圈舍保持衛(wèi)生。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法 試驗(yàn)第6周，每個(gè)重復(fù)選取2枚接近平均蛋重的雞蛋，每組12（n=6×2）枚進(jìn)行檢測(cè)。

蛋重：分析天平稱重，精確度0.01 g。

蛋形指數(shù)：游標(biāo)卡尺測(cè)量，精確度0.1 mm。計(jì)算公式：R=L/S；式中：L為長(zhǎng)軸，S為短軸。

蛋殼厚度：用Robotmation ETG-1061蛋殼厚度測(cè)定儀測(cè)蛋殼厚度，精確度0.001 mm。

哈氏單位：用日本Robotmation EMT-5200多功能蛋品分析儀測(cè)哈氏單位。計(jì)算公式：哈氏單位=100·Log（H-1.7W0.37+7.57)。

式中：H為蛋白高度，mm；W為蛋重，g。

蛋殼強(qiáng)度：用日本Robotmation EFG-0503蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀測(cè)定蛋殼強(qiáng)度。

蛋黃顏色：用羅氏比色卡測(cè)定蛋黃顏色。

蛋黃蛋白比：分離蛋黃和蛋白，用分析天平測(cè)定，精確度0.01 g。

粗蛋白質(zhì)的測(cè)定：參照GB 5009.5-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》凱氏定氮法。全蛋液攪拌均勻，烘干后稱取0.5 g樣品，放入蛋白測(cè)定管中，加入4.2 g混合催化劑（無(wú)水硫酸鈉∶硫酸銅=50:3體積比）和10 mL濃硫酸，進(jìn)行消化處理，然后用全自動(dòng)凱氏定氮儀進(jìn)行測(cè)定。

粗脂肪測(cè)定：參照GB5009.6-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測(cè)定》索氏提取法。分離出蛋黃，攪拌均勻，準(zhǔn)確稱取5 g蒸干研細(xì)，置于索氏抽提器，加入無(wú)水乙醚進(jìn)行抽提，10 h后抽提完畢，蒸發(fā)除去無(wú)水乙醚，干燥稱重。

膽固醇測(cè)定：用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。配制膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取1.00 g煮熟的蛋黃溶于冰醋酸，定容至100 mL混勻，取10 mL用冰醋酸容至100 mL，從中取0.4 mL，加入鄰苯二甲醛0.2 mL和混合酸4 mL混勻，在550 nm下測(cè)量，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的濃度。

卵磷脂測(cè)定：蛋黃冷凍干燥，用超臨界CO2對(duì)蛋粉中的蛋黃油進(jìn)行脫除，用乙醇作溶劑萃取殘粉中的卵磷脂，再用高效液相色譜法對(duì)卵磷脂進(jìn)行定量測(cè)定。

總灰分測(cè)定：參照《GB 5009.4-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定》進(jìn)行。坩堝105℃烘箱過(guò)夜，放入干燥器中冷卻，稱重。全蛋液混合均勻，取蛋液10 g，烘干，電爐灼燒至無(wú)煙，馬福爐560℃灰化8 h，冷卻后稱重。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用IBM SPSS Statistics 25.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，方差齊性檢驗(yàn)，ANOVA檢驗(yàn)，多重比較。結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

添加不同水平（2%、4%、6%）的小薊提取物對(duì)柴雞蛋品質(zhì)的影響結(jié)果如表3所示。

表3 小薊提取物對(duì)魯南柴雞蛋品質(zhì)的影響

試驗(yàn)1、2、3組 （分別添加小薊提取物2%、4%、6%，下同）蛋重較對(duì)照組分別增加0.31%、1.59%、1.38%（P＞ 0.05），差異不顯著，2組增加較多。試驗(yàn)1、2、3組蛋形指數(shù)較對(duì)照組分別增加0.76%、0.76%和 1.53%（P＞ 0.05），差異不顯著。三組之間相差不大。試驗(yàn)1、2、3組蛋殼厚度較對(duì)照組分別增加 1.82%、2.60%和 2.86%（P＞0.05），差異不顯著。其中3組增幅較大。試驗(yàn)1組蛋殼強(qiáng)度較對(duì)照組增加1.10%（P＞0.05），差異不顯著，試驗(yàn)2、3組均增加2.20%（P＜0.05），差異顯著。 試驗(yàn)1組蛋黃顏色較對(duì)照組增加7.37%（P＞0.05），差異不顯著；試驗(yàn)2、3組蛋黃顏色較對(duì)照組分別增加 20.27%、22.31%（P＜0.01），差異極顯著；試驗(yàn)2、3組蛋黃顏色較1組分別增加 12.01%和13.91%（P＜0.01）差異極顯著，3組較2組增加1.69%（P ＞ 0.05），差異不顯著。 試驗(yàn) 1、2、3 組哈氏單位較對(duì)照組分別增加3.00%、6.38%、7.96%（P ＜ 0.01），差異極顯著；試驗(yàn) 2、3組哈氏單位較試驗(yàn)1組增加3.28%和4.82%（P＜0.01），差異極顯著；3組較2組增加1.49%（P＞0.05），差異不顯著。試驗(yàn)1、2、3組蛋黃蛋白比較對(duì)照組增加0.34%、1.29%、1.41%（P＞ 0.05）， 差異不顯著；試驗(yàn)2、3組較1組增幅較大。

試驗(yàn)1組粗蛋白質(zhì)含量較對(duì)照組增加2.47%（P ＞ 0.05），差異不顯著；試驗(yàn) 2、3組較對(duì)照組增加 7.81%、8.96%（P ＜ 0.05），差異顯著；試驗(yàn)組之間差異不顯著，其中3組增幅較大。試驗(yàn)1、2、3組粗脂肪含量較對(duì)照組分別增加2.30%、6.41%、7.05%（P＞0.05），差異不顯著；其中3組增幅較大。試驗(yàn)1組卵磷脂含量較對(duì)照組增加2.80%（P＞0.05），差異不顯著；試驗(yàn)2、3組卵磷脂含量較對(duì)照組均增加4.67%（P＜0.05），差異顯著。試驗(yàn)1、2、3組膽固醇含量較對(duì)照組分別降低8.40%、30.29%、32.86%（P＜ 0.01）， 差異極顯著；2、3組較 1組分別降低 23.90%、26.70%（P＜0.01），差異極顯著；3組較2組降低3.43%（P＜0.05），差異顯著。試驗(yàn)1組總灰分含量較對(duì)照組增加3.53%（P ＞ 0.05），差異不顯著；試驗(yàn) 2、3 組總灰分含量較對(duì)照組分別增加 5.31%、6.19%（P ＜0.05），差異顯著。

3 討論

添加不同水平的小薊提取物均使魯南柴雞蛋重有所增加，但差異不顯著，4%組增加較多。小薊含豐富蛋白質(zhì)和氨基酸，提高了飼糧的營(yíng)養(yǎng)水平。徐桂紅（2018）認(rèn)為適當(dāng)提高蛋雞日糧營(yíng)養(yǎng)水平，特別是適當(dāng)提高蛋白質(zhì)和氨基酸水平，可以增加蛋重。王進(jìn)宇（2017）認(rèn)為植物多糖可以改善腸道中菌群關(guān)系，利于營(yíng)養(yǎng)吸收，可提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在蛋中的積累。

各添加組均增加了蛋形指數(shù)，但差異不顯著。楊海明等 （2007）認(rèn)為，蛋形指數(shù)受蛋殼強(qiáng)度的影響，在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)，可能與小薊中的多糖和礦物質(zhì)有關(guān)，增加了蛋殼的強(qiáng)度，蛋白質(zhì)水平提高，殼內(nèi)蛋白膜增厚，從而增加蛋形指數(shù)。

各添加組的蛋殼厚度均有所增加，但差異不顯著。小薊提取物含較多礦物質(zhì)能促進(jìn)蛋殼增厚，Soltanma（2008）研究表明，飼糧中添加短鏈不和脂肪酸能促進(jìn)鈣的吸收，增加血鈣，從而提高蛋殼厚度。因此，蛋殼厚度增加也可能與其含短鏈不飽和脂肪酸有關(guān)。

添加4%、6%的小薊提取物均能使蛋殼強(qiáng)度顯著提高（P＜0.05），兩組相差不大。小薊提取物含鈣、磷、鎂、鋅、錳、銅等礦物質(zhì)，氨基酸和多糖促進(jìn)黏蛋白和黏多糖產(chǎn)生，均與蛋殼合成有關(guān)。張亞男（2013）發(fā)現(xiàn)，飼糧中的鋅可通過(guò)增加血漿和蛋殼腺中碳酸酐酶的活性來(lái)促進(jìn)蛋殼碳酸鈣沉積。肖俊峰（2014）發(fā)現(xiàn)，飼糧中的錳可以提高蛋殼腺中GlcAT-ⅠmRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，增加蛋殼膜中糖胺聚糖和糖醛酸的含量，改善蛋殼的超微結(jié)構(gòu)，增加蛋殼強(qiáng)度。Chowdhurysd（1990）發(fā)現(xiàn)，銅參與了賴氨酰氧化酶的形成，賴氨酰氧化酶在維持蛋殼基質(zhì)膜的完整性方面起著重要作用。

飼糧中添加4%和6%小薊提取物能顯著提高蛋黃顏色（P＜0.05），兩組相差不大。Morenoj（2006）等認(rèn)為，蛋黃顏色主要受遺傳和飼料中著色物質(zhì)的影響，楊炳友（2017）發(fā)現(xiàn)，小薊提取物含有豐富的類黃酮，包含有植物色素類胡蘿卜素、葉黃素、素花素等。劉清等（1989）和陳波等（2001）發(fā)現(xiàn)，葉黃素和胡蘿卜素等色素物質(zhì)可與脂肪結(jié)合形成脂肪乳粒，在膽鹽作用下變?yōu)榧?xì)小膽鹽微粒，被小腸黏膜吸收后通過(guò)淋巴進(jìn)入血液與低密度脂蛋白結(jié)合，通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)沉積到各個(gè)靶組織。Fletcher等（1981）發(fā)現(xiàn)，色素被吸收后幾乎未經(jīng)任何變化直接沉積到正在形成的卵中。李麗平（2019）發(fā)現(xiàn)，日糧中添加10%桑樹(shù)葉粉（含葉黃素）顯著提高了雞蛋蛋黃顏色 L、a、b評(píng)分（P ＜ 0.05)，其中蛋黃顏色 L 和a評(píng)分隨添加水平的升高顯著升高（P＜0.05）。

小薊提取物不同水平添加均能極顯著提高魯南柴雞蛋的哈氏單位（P＜0.05），4%組效果較優(yōu)。新鮮雞蛋哈氏單位受品種、年齡、產(chǎn)蛋率、營(yíng)養(yǎng)及生理機(jī)能等的影響。與雞蛋內(nèi)容物濃度、黏稠度、蛋黃大小、蛋白膜的厚度直接相關(guān)。張欣（2006）發(fā)現(xiàn)，小薊含豐富的多糖。小薊高水平的蛋白質(zhì)、脂肪酸、多糖、礦物質(zhì)可以增加蛋內(nèi)容物濃度。小薊提取物中的葉蛋白、植物多糖能增加雞蛋黏蛋白和黏多糖的含量，特別是絲氨酸能增加蛋白質(zhì)的黏度，增加蛋白膜的厚度和強(qiáng)度。小薊提取物黃酮類活性物質(zhì)能增加雞生理機(jī)能，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和蛋中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累，降低含水量，使哈氏單位提高。

各添加組魯南柴雞蛋黃蛋白比提高，但差異不顯著。小薊提取物能提供蛋黃合成所需的多種營(yíng)養(yǎng)元素，蛋白質(zhì)、多糖、不飽和脂肪酸和礦物質(zhì)等。雞本身機(jī)體活力較強(qiáng)能促進(jìn)蛋黃合成。李鵬飛（2014）認(rèn)為，小薊提取物中的兒茶酚胺能起到強(qiáng)心作用。王倩（2015）認(rèn)為，小薊總黃酮能提高SOD、CAT、GSH-PX活力，清除自由基。從而增強(qiáng)蛋雞生理機(jī)能，提高蛋黃品質(zhì)。

添加4%和6%小薊提取物能顯著提高蛋白質(zhì)含量（P＜0.05）。小薊中的類黃酮和優(yōu)質(zhì)的氨基酸模式有助于蛋白質(zhì)的提升。龍彬（2018）等認(rèn)為，蛋白的分泌主要是在輸卵管的膨大部分，黃酮類對(duì)分泌部位細(xì)胞膜可能具有積極作用，其抗氧化性有助于維持細(xì)胞膜的正常生理功能，從而促進(jìn)卵泡中蛋白質(zhì)的沉積。潘浦群（2009）發(fā)現(xiàn)，小薊中含天門(mén)冬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸等17種氨基酸，與其他飼糧中的氨基酸起到互補(bǔ)作用，提高了吸收率，促進(jìn)了蛋白質(zhì)在蛋中的沉積。

各添加組蛋黃粗脂肪含量提高，但差異不顯著。小薊提取物含不飽和脂肪酸，可以增加蛋黃脂肪含量，提高蛋黃品質(zhì)，使腌制咸蛋時(shí)出現(xiàn)沙瓤和出油，被消費(fèi)者喜愛(ài)。

小薊提取物4%和6%添加組蛋卵磷脂含量顯著提高（P＜0.05）。卵磷脂合成需要甘氨酸、絲氨酸和蛋氨酸等提供甲基，且與不飽和脂肪酸和膽堿含量等有關(guān)。潘浦群（2009）發(fā)現(xiàn)，小薊提取物含有豐富的氨基酸如甘氨酸、絲氨酸和蛋氨酸，含不飽和脂肪酸如亞油酸、α-亞麻酸、β-亞麻酸，楊炳友（2017）發(fā)現(xiàn)，其還含有豐富的乙酰膽堿、薄公英甾醇等，有助于卵磷脂的合成。李曉雯等（2019）采用LC-TOFMS分析不同品質(zhì)雞蛋中脂質(zhì)的組成，得到相應(yīng)的指紋圖譜，通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)飼喂不同的飼糧，其蛋黃中TG和PC的含量差異顯著。

小薊提取物各添加組蛋中膽固醇含量極顯著降低（P＜0.01），且各試驗(yàn)組之間差異顯著，6%組降幅較大。楊炳友（2017）發(fā)現(xiàn)，小薊提取物多酚類物質(zhì)可達(dá)10%以上，多酚類物質(zhì)中的類黃酮、花青素、苜蓿素、綠原酸等能降低血液中的甘油三酯和膽固醇含量，從而減少膽固醇在蛋黃中的積累。小薊提取物含有絲氨酸和半胱氨酸，黃晶（2015）發(fā)現(xiàn)，絲氨酸濃度為 50 μg/mL和半胱氨酸濃度為100 μg/mL時(shí)膽固醇在混合微膠束中的濃度顯著下降,說(shuō)明氨基酸能夠降低微膠束中膽固醇的溶解度。盧垚（2019）發(fā)現(xiàn)，小薊總黃酮可降低TC、TG和LDL-C水平，從而改善機(jī)體的脂質(zhì)代謝。李寧（2016）認(rèn)為，苜蓿素可增加血清中HDL-C的含量，增加肝臟中CYP7A1的表達(dá)，減少肝臟中HMG-COA還原酶的表達(dá)，通過(guò)抑制體內(nèi)內(nèi)源性膽固醇的合成促進(jìn)膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化。劉青翠（2018）發(fā)現(xiàn)，綠原酸可降低蛋雞血清HMGR活性，提高血清GC、CYP7α1等活性，促進(jìn)膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)化，進(jìn)而降低蛋黃膽固醇含量。

小薊提取物4%、6%添加組柴雞蛋總灰分的含量顯著提高（P＜0.05）。小薊提取物中含豐富的礦物質(zhì)和維生素C，容易在蛋黃中積累。宋武剛（2017）研究發(fā)現(xiàn)，雞蛋中的礦物質(zhì)含量與地區(qū)的土壤和飼糧成分相關(guān)度顯著。吳潔（2009）發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加300 mg/kg維生素C能提高蛋黃中鐵、磷的含量,并改善蛋黃營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

4 結(jié)論

飼糧中添加一定水平的小薊提取物能提高蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、哈氏單位、粗蛋白質(zhì)和卵磷脂含量，降低膽固醇含量。說(shuō)明飼料中添加小薊提取物能改善魯南柴雞蛋品質(zhì)，本試驗(yàn)條件下，添加量以4%為宜。