盧汝梅，黎云清，王 肖，張進(jìn)燕，李 兵，韋建華

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530200)

廣西常用民族藥龍骨風(fēng)(Caulis Alsophilae)為桫欏科植物桫欏(Alsophilaspinulosa(Wall.ex Hook.) Tryon)的莖干，具有祛風(fēng)除濕、活血散瘀、清熱解毒、止咳平喘、強(qiáng)筋骨、殺蟲(chóng)等功效。桫欏又名樹(shù)蕨，主產(chǎn)于福建、廣東、廣西、海南、貴州、云南、四川等地，在廣西主要分布在百色、靖西、德保、武鳴、蒼梧、容縣、羅城、龍勝、浦北、金秀、鳳山等地[1-2]。龍骨風(fēng)在不同民族藥中都有應(yīng)用[3]：苗藥中稱為冷落庶，用以治療小兒疳積；壯藥中稱為谷地、龍骨風(fēng)，具有通調(diào)龍路、火路，祛風(fēng)毒，除濕毒，強(qiáng)筋骨之功效，用于核尹(腰痛)、痿約(陽(yáng)痿)、林得叮相(跌打損傷)、發(fā)旺(風(fēng)濕骨痛)等病[4]；瑤藥中稱為龍骨風(fēng)，是瑤藥最具特色的老班藥中“十八風(fēng)”之一，具有抑菌和鎮(zhèn)痛等作用，用于治療風(fēng)濕骨痛、咳嗽哮喘、慢性支氣管炎、腎虛腰痛、腎炎水腫等[5]。研究表明：龍骨風(fēng)主要含萜類、黃酮、酚酸、甾體等成分[6]。本課題組前期對(duì)龍骨風(fēng)的化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，分離鑒定新化合物龍骨風(fēng)新苷A、桫欏腦苷酯A、桫欏腦苷酯B、桫欏內(nèi)酯酸A和桫欏內(nèi)酯酸B，以及已知化合物海松酸、6β-羥基-24-乙基-膽甾-4-烯-3-酮、decumbic acid、對(duì)香豆酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、反式咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、2-甲基延胡索酸、桫欏諾生A、原兒茶醛、原兒茶酸、豆甾烷-3,6-二酮、β-谷甾醇、胡蘿卜苷等22個(gè)化合物[7-8]。

為了更好闡明龍骨風(fēng)的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)其中活性成分和先導(dǎo)化合物，在前期工作基礎(chǔ)上，本課題組采用硅膠、大孔吸附樹(shù)脂、MCI GEL CHP-20P、Flash C18和Sephadex LH-20柱色譜等方法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離，得到20個(gè)化合物，分別鑒定為豆甾醇(1)、棕櫚酸(2)、正十三烷(3)、羽扇豆醇(4)、對(duì)香豆酸(5)、棕櫚酸甘油酯(6)、24(R)-24-乙基-6β-羥基-4-膽甾烯醇-3-酮(7)、24(R)-24-ethyl-5α-cholestane-3β,5α,6β-triol(8)、阿魏酸(9)、大黃素(10)、牡荊素(11)、芹菜素(12)、二氫芹菜素(13)、3,4二羥基苯丙烯酸(14)、heptadec-(9Z)-enoic acid(15)、蘆丁(16)、inoseavin A(17)、salviniside Ⅱ(18)、對(duì)香豆酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、異槲皮苷(20)。其中化合物1～5、7～10、13、15～18、20為首次從龍骨風(fēng)中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker Avance III 500 MHz、Avance III 800 MHz核磁共振儀(瑞士Bruker公司)；Waters Autospec Premier p776質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)；CPA225D型分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；XT4-100A控溫型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(北京科儀電光儀器廠)；AB-8大孔吸附樹(shù)脂(南開(kāi)大學(xué)樹(shù)脂廠)；Flash C18色譜柱(日本島津公司)；MCI GEL CHP-20P樹(shù)脂(日本三菱化學(xué)公司)；Sephadex LH-20(美國(guó)pharmacia公司)；硅膠(粒徑75～150 μm、48～75 μm)及其余化學(xué)試劑(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

龍骨風(fēng)藥材購(gòu)于廣西靖西端午藥市，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為桫欏科植物桫欏(Alsophilaspinulosa(Wall.ex Hook.) Tryon)的莖干。

2 提取與分離

龍骨風(fēng)粗粉28 kg，用體積分?jǐn)?shù)80%乙醇冷浸提取3次，每次4 d。提取液減壓濃縮得到乙醇提取物，加水懸浮后依次用石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，得到石油醚部位85 g，乙酸乙酯部位230 g，正丁醇部位80 g。

取石油醚部位80 g，硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(80∶1 → 50∶1 → 30∶1 → 15∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶1，體積比)梯度洗脫，得到9個(gè)流份Fr.A1～Fr.A9。Fr.A4用硅膠、Sephadex LH-20柱色譜分離和重結(jié)晶，得到化合物1(210 mg)、2(4.6 mg)和3(5.1 mg)；Fr.A5用硅膠柱色譜純化，丙酮重結(jié)晶，得到化合物4(6.0 mg)；Fr.A6經(jīng)MCI GEL CHP-20P和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物5(6.0 mg)和6(20 mg)；Fr.A7經(jīng)MCI GEL CHP-20P和Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物7(20 mg)；Fr.A8用Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物8(4.6 mg)。

取乙酸乙酯部位100 g，熱水溶解，不溶物用硅膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇(20∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 3∶1→1∶1 → 0∶1，體積比)梯度洗脫，得到6個(gè)流份Fr.B1～Fr.B6。Fr.B2經(jīng)MCI GEL CHP-20P和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物9(2.8 mg)和10(3.2 mg)；Fr.B3經(jīng)MCI GEL CHP-20P柱色譜分段后，F(xiàn)r.B3-3用丙酮重結(jié)晶得化合物11(4.0 mg)；Fr.B3-5和Fr.B3-6分別用Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物12(3.2 mg)和13(6.0 mg)。乙酸乙酯部位水溶部分經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，以水-乙醇梯度洗脫，得到5個(gè)流份Fr.C1～Fr.C5。Fr.C2經(jīng)MCI GEL CHP-20P和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物14(5.0 mg)和15(2.6 mg)；Fr.C3經(jīng)MCI GEL CHP-20P和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物16(8.2 mg)、17(5.0 mg)和18(7.0 mg)。

取正丁醇部位180 g，用AB-8大孔樹(shù)脂柱色譜分離，用水-甲醇梯度洗脫，得到5個(gè)流份Fr.D1～Fr.D5。Fr.D3和Fr.D4分別用MCI GEL CHP-20P、Flash C18和Sephadex LH-20柱色譜反復(fù)純化，得到化合物19(2.8 mg)和20(2.6 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，m.p.165～167 ℃，三氯化銻反應(yīng)顯陽(yáng)性。與豆甾醇對(duì)照品共薄層色譜，在3種溶劑系統(tǒng)中展開(kāi)檢識(shí)，二者的Rf值均相同，且混合熔點(diǎn)不下降。故化合物1鑒定為豆甾醇。

化合物2：白色片狀結(jié)晶。EI-MS(m/z):256[M]+。1H-NMR(500 MHz,Pyr-d5):2.50(2H,t,J=7.4 Hz,H-2),1.76(2H,m,H-3),1.24～1.31(24H,m,H-4～15),0.86(—CH3)。13C-NMR(125 MHz,Pyr-d5):35.0(C-2),32.2(C-3),30.0(C-4～C-7),30.0(C-8,C-9),29.9(C-10,C-11),29.8(C-12),29.7(C-13),25.7(C-14),23.0(C-15),14.3(—CH3),176.1(—COOH)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故化合物2鑒定為棕櫚酸。

化合物3：白色粉末，m.p.-6～-4 ℃。與正十三烷對(duì)照品共薄層色譜，在3種溶劑系統(tǒng)中展開(kāi)檢識(shí)，二者的Rf值均相同，且混合熔點(diǎn)不下降。故化合物3鑒定為正十三烷。

化合物4：白色針晶，m.p.212～215 ℃。與羽扇豆醇對(duì)照品共薄層色譜，用3種不同溶劑系統(tǒng)展開(kāi)檢識(shí)，二者的Rf值均相同，且混合熔點(diǎn)不下降。故化合物4鑒定為羽扇豆醇。

化合物5：白色針晶。EI-MS(m/z)：164[M]+,147[M - OH]+,119[M - COOH]+。1H-NMR(800 MHz,CD3OD):7.43(2H,d,J=8.0 Hz,H-2,6),6.79(2H,d,J=8.0 Hz,H-3,5),7.56(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),6.27(1H,d,J=16.0 Hz,H-8)。13C-NMR(201 MHz,CD3OD):127.4(C-1),131.0(C-2,6),116.8(C-3,5),161.0(C-4),145.9(C-7),115.8(C-8),171.7(C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，鑒定化合物5為對(duì)香豆酸。

化合物6：白色粉末。EI-MS(m/z):331[M+H]+，299,256,239,213,134,112,98,91,74。1H-NMR (500 MHz,CD3OD):4.16(1H,dd,J=4.4 Hz,H-1a),4.12(1H,dd,J=4.4 Hz,H-1b),3.82(1H,m,H-2),3.56(1H,m,H-3a),3.53(1H,m,H-3b),2.34(2H,t,J=7.5 Hz,H-2′),1.63(2H,m,J=7.2 Hz,H-3′),1.28～1.32(24H,m,H-4′～15′),0.88(3H,t,J=7.1 Hz,—CH3)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):66.5(C-1),71.1(C-2),64.0(C-3),175.5(C-1′),34.9(C-2′),26.0(C-3′),28.1(C-4′),30.2～30.8(C-5′～13′),33.1(C-14′),23.7(C-15′),14.4(—CH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，鑒定化合物6為棕櫚酸甘油酯。

化合物7：白色片狀結(jié)晶。EI-MS(m/z):429[M+H]+,414,411,400,269,245,227,152。1H-NMR(500 MHz,CDCl3):5.81(1H,s,H-4)，4.35(1H,s,H-6)，0.74(3H,s,H-18)，1.37(3H,s,H-19)，0.92(3H,d,J=6.6 Hz,H-21)，0.82(3H,d,J=6.9 Hz,H-26)，0.81(3H,d,J=6.9 Hz,H-27)，1.27(2H,m,H-28)，0.85(3H,dd,J=7.5 Hz,H-29)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3):37.1(C-1),34.3(C-2),200.5(C-3),126.3(C-4),168.6(C-5),73.3(C-6),38.5(C-7),29.7(C-8),53.6(C-9),38.0(C-10),21.0(C-11),39.6(C-12),42.5(C-13),56.0(C-14),24.2(C-15),28.2(C-16),55.9(C-17),19.5(C-19),36.1(C-20),18.7(C-21),33.9(C-22),26.0(C-23),45.8(C-24),29.1(C-25),19.8(C-26),19.0(C-27),23.1(C-28)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，鑒定化合物7為24(R)-乙基-6β-羥基-4-膽甾烯醇-3-酮。

化合物8：白色粉末。EI-MS(m/z)：449[M+1]+。1H-NMR(500 MHz,Pyr-d5):4.82(1H,m,H-3),2.95(1H,dd,J=12.7,11.4 Hz,H-4a),2.26(1H,dd,J=12.7,3.5 Hz,H-4b),0.73(3H,s,H-18),1.66(3H,s,H-19),0.98(3H,d,J=6.6 Hz,H-21),0.86(3H,d,J=6.8 Hz,H-26),0.83(3H,d,J=7.2 Hz,H-27),0.86(3H,t,J=6.8 Hz,H-29)。13C-NMR(125 MHz,Pyr-d5):32.6(C-1),33.4(C-2),67.4(C-3),42.9(C-4),75.9(C-5),76.3(C-6),35.8(C-7),31.3(C-8),46.0(C-9),39.2(C-10),22.8(C-11),40.7(C-12),43.1(C-13),56.6(C-14),24.7(C-15),28.7(C-16),56.6(C-17),12.4(C-18),17.3(C-19),36.6(C-20),19.0(C-21),34.3(C-22),26.5(C-23),46.1(C-24),29.5(C-25),19.3(C-26),20.0(C-27),23.4(C-28),12.2(C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13-14]報(bào)道基本一致，鑒定化合物8為24(R)-24-ethyl-5α-cholestane-3β,5α,6β-triol。

化合物9：白色針晶。EI-MS(m/z):194[M]+，179[M-CH3]+。1H-NMR(500 MHz,CD3OD):7.17(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.81(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),7.06(1H,dd,J=2.0 Hz,H-6),7.60(1H,d,J=15.9 Hz,H-7),6.31(1H,d,J=15.8 Hz,H-8),3.88(3H,s,—OCH3)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):127.8(C-1),111.7(C-2),150.5(C-3),149.4(C-4),115.9(C-5),124.0(C-6),146.9(C-7),116.5(C-8),171.0(C-9),56.4(—OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，鑒定化合物9為阿魏酸。

化合物10：黃色粉末。EI-MS(m/z):270[M]+。1H-NMR(500 MHz,CD3OD):7.09(1H,brs,H-2),7.56(1H,brs,H-4),7.16(1H,d,J=2.5 Hz,H-5),6.53(1H,d,J=2.4 Hz,H-7),2.42(3H,s,—CH3)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):163.5(C-1),125.2(C-2),149.5(C-3),121.7(C-4),134.7(C-4a),110.2(C-5),166.7(C-6),109.1(C-7),168.1(C-8),110.5(C-8a),191.7(C-9),114.9(C-9a),183.3(C-10),136.8(C-10a),22.0(3-CH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，鑒定化合物10為大黃素。

化合物11：黃色粉末。EI-MS(m/z):432[M]+。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6):13.15(1H,s,5-OH),10.91(1H,brs,7-OH),10.33(1H,brs,4′-OH),6.76(1H,s,H-3),6.25(1H,s,H-6),8.02(2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.88(2H,d,J=8.9 Hz,H-3′,5′),4.68(1H,d,J=9.9 Hz,Glc-1″)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6):164.4(C-2),102.9(C-3),182.6(C-4),156.5(C-5),98.6(C-6),163.0(C-7),104.5(C-8),160.9(C-9),105.1(C-10),122.1(C-1′),129.4(C-2′,6′),116.3(C-3′,5′),161.6(C-4′),73.8(Glc-1″),71.3(Glc-2″),79.1(Glc-3″),71.0(Glc-4″),82.3(Glc-5″),61.7(Glc-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17-18]報(bào)道基本一致，鑒定化合物11為牡荊素。

化合物12：淡黃色粉末。EI-MS(m/z):270[M]+。1H-NMR(800 MHz,CD3OD):6.57(1H,s,H-3),6.18(1H,d,J=1.6 Hz,H-6),6.43(1H,d,J=0.81 Hz,H-8),7.84(2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′),6.92(2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(201 MHz,CD3OD):166.3(C-2),103.7(C-3),183.8(C-4),163.2(C-5),100.4(C-6),166.2(C-7),95.3(C-8),159.5(C-9),105.0(C-10),123.3(C-1′),129.4(C-2′,6′),117.1(C-3′,5′),162.9(C-4′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，鑒定化合物12為芹菜素。

化合物13：白色粉末。EI-MS(m/z):272[M]+,153,152,120。1H-NMR(500 MHz,CD3OD):5.33(1H,dd,J=13.0,3.0 Hz,H-2),3.11(1H,dd,J=17.1,13.0 Hz,H-3a),2.68(1H,dd,J=17.1,3.0 Hz,H-3b),5.87(1H,d,J=2.2 Hz,H-6),5.89(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),7.31(2H,d,J=6.7 Hz,H-2′,6′),6.81(2H,d,J=6.7 Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(125 Hz,CD3OD):80.5(C-2),44.0(C-3),197.8(C-4),165.5(C-5),97.0(C-6),168.4(C-7),96.1(C-8),164.9(C-9),103.3(C-10),131.1(C-1′),129.0(C-2′,6′),116.3(C-3′,5′),159.0(C-4′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20-21]報(bào)道基本一致，鑒定化合物13為二氫芹菜素。

化合物14：橙黃色顆粒狀結(jié)晶。EI-MS(m/z):180[M]+,163[M-OH]+。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)∶7.02(1H,d,J=2.1 Hz,H-2),6.76(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.92(1H,dd,J=8.2,2.1 Hz,H-6),7.51(1H,d,J=15.9 Hz,H-7),6.21(1H,d,J=15.9 Hz,H-8)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):127.8(C-1),115.0(C-2),149.4(C-3),146.8(C-4),116.5(C-5),122.8(C-6),146.8(C-7),115.8(C-8),171.2(C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，鑒定化合物14為3,4-二羥基苯丙烯酸。

化合物15：白色粉末。EI-MS(m/z):268[M]+。1H-NMR(800 MHz,CD3OD):2.19(2H,d,J=7.2 Hz,H-2),1.59(2H,m,J=6.9 Hz,H-3),5.33(2H,m,H-9,10),2.02(4H,m,J=5.6 Hz,H-8,11),0.89(3H,t,H-18),1.23～1.35(18H,brm,9-CH2)。13C-NMR(201 MHz,CD3OD):179.4(C-1),36.5(C-2),26.9(C-3),130.9(C-9),130.9(C-10),33.1(C-15),23.7(C-16),14.5(C-17)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，鑒定化合物15為heptadec-(9Z)-enoic acid。

化合物16：淡黃色粉末，m.p.195～197 ℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紫紅色，Molish反應(yīng)陽(yáng)性，與蘆丁對(duì)照品共薄層色譜，在3種不同溶劑系統(tǒng)中展開(kāi)檢識(shí)，二者的Rf值均相同，且混合熔點(diǎn)不下降。故化合物16鑒定為蘆丁。

化合物17：黃色粉末。EI-MS(m/z):462[M]+，分子式為C25H18O9。1H-NMR(500 MHz,CD3OD):6.50(1H,s,H-4),6.70(1H,d,J=15.9 Hz,H-6),7.42(1H,d,J=15.9 Hz,H-7),7.07(1H,d,J=2.0 Hz,H-9),6.79(1H,d,J=8.2 Hz,H-12),6.99(1H,dd,J=8.3,2.0 Hz,H-13),1.97(3H,s,Me-1′),5.57(1H,s,H-2′),5.65(1H,s,H-5′),6.70(1H,d,J=1.4 Hz,H-7′),6.75(1H,d,J=8.3 Hz,H-10′),6.58(1H,dd,J=8.3,2.0 Hz,H-11′)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):160.6(C-1),99.5(C-2),176.8(C-3),95.6(C-4),167.0(C-5),116.6(C-6),139.9(C-7),128.5(C-8),115.1(C-9),146.9(C-10),149.4(C-11),116.6(C-12),122.7(C-13),192.9(C-1′),105.1(C-2′),203.1(C-3′),94.5(C-4′),95.9(C-5′),123.1(C-6′),115.4(C-7′),146.3(C-8′),147.8(C-9′),115.8(C-10′),120.2(C-11′),16.6(Me-1′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道基本一致，鑒定化合物17為inoscavin A。

化合物18：白色簇狀結(jié)晶。EI-MS(m/z):474[M]+,366,298。分子式C22H18O12，其1H-NMR(500 MHz,CD3OD)和13C-NMR(125 MHz,CD3OD)數(shù)據(jù)及歸屬分別見(jiàn)表1和表2。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道基本一致，鑒定化合物18為salviniside Ⅱ。

表1 化合物18的氫譜數(shù)據(jù)Tab.1 1H NMR spectroscopic data for compound 18

表2 化合物18的碳譜數(shù)據(jù)Tab.2 13C-NMR spectroscopic data for compound 18

化合物19：白色片狀結(jié)晶。EI-MS(m/z):326[M]+,164[M-Glu]+,147,分子式C15H18O8。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)∶7.55(2H,d,J=8.3 Hz,H-2,6),7.12(2H,d,J=8.3 Hz,H-3,5),7.60(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),6.37(1H,d,J=16.0 Hz,H-8),4.96(1H,d,J=7.6 Hz,H-1′),3.73(1H,dd,J=5.2,3.9 Hz,H-2′),3.40(1H,dd,J=8.6,2.0 Hz,H-4′),3.46(1H,ddd,J=3.2,2.3,1.6 Hz,H-5′),3.90(1H,dd,J=6.6,2.1 Hz,H-6′)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):130.7(C-1),131.2(C-2,6),118.1(C-3,5),160.8(C-4),146.0(C-7),117.6(C-8),170.7(C-9),101.8(C-1′),77.9(C-2′),74.8(C-3′),71.3(C-4′),78.4(C-5′),62.5(C-6′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報(bào)道基本一致，鑒定化合物19為對(duì)香豆酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物20：黃色針晶。EI-MS(m/z):464[M]+,分子式為C21H20O12。1H-NMR(500 MHz,CD3OD):6.20(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),6.39(1H,d,J=2.1 Hz,H-8),7.70(1H,d,J=2.2 Hz,H-2′),6.87(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.59(1H,dd,J=2.2,2.2 Hz,H-6′),5.25(1H,d,J=7.7 Hz,H-1″),3.68(1H,dd,J=2.4,2.4 Hz,H-6″a),3.58(1H,dd,J=5.4,5.4 Hz,H-6″b)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD):159.0(C-2),135.6(C-3),179.5(C-4),166.2(C-5),99.9(C-6),163.1(C-7),94.7(C-8),158.5(C-9),105.6(C-10),123.2(C-1′),116.0(C-2′),145.9(C-3′),149.9(C-4′),117.5(C-5′),123.1(C-6′),104.3(C-1″),75.7(C-2″),78.1(C-3″),71.2(C-4″),78.4(C-5″),62.5(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，鑒定化合物20為異槲皮苷。

4 討論

本研究從龍骨風(fēng)中分離獲得的成分主要為黃酮類、酚酸類、內(nèi)酯類和甾體類化合物。其中牡荊素具有抗菌作用，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌均有明顯的抑制作用[27]；芹菜素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、心腦血管保護(hù)等多種活性[28]，可見(jiàn)這些黃酮類化合物的活性與龍骨風(fēng)的功效具有相關(guān)性，但是否為其中主要活性成分，還有待于深入研究加以證明。內(nèi)酯類成分inoseavin A、salviniside Ⅱ均是首次從桫欏科植物中分離得到，文獻(xiàn)報(bào)道inoseavin A都是從菌類中分得的，具有較好的抗氧化和清除自由基的活性[24,29]；salviniside Ⅱ?yàn)榇蟓h(huán)內(nèi)酯類成分，僅報(bào)道以α-Anomer和β-Anomer混合形式從水生蕨類植物人厭槐葉蘋(píng)中分離得到[25]，但其藥理活性研究還是空白，值得進(jìn)一步關(guān)注。對(duì)香豆酸、阿魏酸、3,4-二羥基苯丙烯酸、對(duì)香豆酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和前期分得的原兒茶醛和原兒茶酸，都屬于酚酸類成分，酚酸類化合物具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗氧化清除自由基等作用[30]。根據(jù)化學(xué)成分的研究結(jié)果我們對(duì)11個(gè)不同產(chǎn)地的龍骨風(fēng)藥材進(jìn)行HPLC指紋圖譜測(cè)定，確定了15個(gè)共有峰，并對(duì)其中5個(gè)峰進(jìn)行指認(rèn)，分別為原兒茶酸、原兒茶醛、3,4-二羥基苯丙烯酸、對(duì)香豆酸和阿魏酸。因此，本研究豐富了對(duì)龍骨風(fēng)化學(xué)成分多樣性的認(rèn)識(shí)，可為龍骨風(fēng)藥材化學(xué)品質(zhì)評(píng)價(jià)和闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。