李 平，唐明宗，申金容，陳大芳，龍清孟，曾 金，張云淞，時 穎，吳光松，李 維

（1.貴州省種畜禽種質測定中心，貴州 貴陽 550018；2.思南縣畜牧發(fā)展中心，貴州 銅仁 565100；3.開陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽 550300；4.貴州省遺傳資源管理站，貴州 貴陽 550001）

隨著人工授精技術在現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)中發(fā)揮出巨大的作用[1]，豬人工授精的成敗在很大程度上取決于精液的質量，精子活力是評價精液品質的重要指標[2]。精子的活力是指有效精子占總精子數(shù)的百分率，是鑒定精液品質最主要的指標之一，一般情況下，正常精液的精子活力不應低于60%。種公豬精子的活力直接體現(xiàn)繁殖力的強弱，高質量的精液，能夠保證母豬的受孕率，降低種豬采精頻率，從而延長公豬的使用年限[3]。本研究以國外品種和地方品種為研究對象，檢測不同品種豬的精子活力，分析在不同檢測時間下精子活力，不同品種豬中差異性的原因。測定豬的精子活力有助于客觀評價公豬的精液質量。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

種豬常溫精液檢測于2020年6月在貴州省種畜禽種質測定中心進行精液檢測室測定。

1.2 試驗動物

試驗選擇健康無疾病的成年種公豬，并具有完整的系譜檔案，杜洛克、長白、大約克夏、柯樂豬4個品種各5頭份為試驗對象。

1.3 儀器設備

精子質量分析系統(tǒng)（Minitube）、恒溫預熱板、載玻片、蓋玻片、移液槍（Eppendorf）。

1.4 檢測環(huán)境

檢測室保持清潔衛(wèi)生，擺放整齊、安靜、無異味。室內(nèi)配備控溫、控濕設施，保證檢測環(huán)境要求：溫度控制在20～22℃，濕度控制在55%～65%。

1.5 試驗方法

取兩個劑量的常溫精液輕輕搖動均勻，分別用移液器吸取精液約20 μL置于載玻片上并加蓋玻片，在37℃條件下，用顯微鏡（200～400倍）觀察精子活力。觀察每個樣片不同液層內(nèi)的精子運動狀態(tài)，進行全面評定。計算公式如下：

M為活力；n1為第一視野活力；n2為第二視野活力；n3為第三視野活力。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用Excel表格處理，分析采用SPSS軟件，檢測數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 7 h種豬常溫精液精子活力的比較分析

杜洛克、長白、大約克夏、柯樂豬種豬常溫精液各5頭份在17℃條件下放置7 h精子活力，37℃恒溫載物臺上蘇醒不同時間精子活力比較分析，檢測結果見表1。由表1可知，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒5 min精子活力高于蘇醒3 min，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒3 min精子活力高于蘇醒1 min。蘇醒5 min精子活力順序依次為大約克夏＞柯樂豬＞杜洛克＞長白。

表1 7 h精子活力的檢測

2.2 24 h種豬常溫精液精子活力的比較分析

杜洛克、長白、大約克夏、柯樂豬種豬常溫精液各5頭份在17℃條件下放置24 h精子活力，37℃恒溫載物臺上蘇醒不同時間精子活力比較分析，檢測結果見表2。由表2可知，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒5 min精子活力高于蘇醒3 min，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒3 min精子活力高于蘇醒1 min。蘇醒5 min精子活力順序為大約克夏＞長白＞杜洛克＞柯樂豬。

表2 24 h精子活力的檢測

2.3 48 h種豬常溫精液精子活力的比較分析

杜洛克、長白、大約克夏、柯樂豬種豬常溫精液各5頭份在17℃條件下放置48 h精子活力，37℃恒溫載物臺上蘇醒不同時間精子活力比較分析，檢測結果見表3。由表3可知，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒5 min精子活力高于蘇醒3 min，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒3 min精子活力高于蘇醒1 min。蘇醒5 min精子活力順序為大約克夏＞長白＞杜洛克＞柯樂豬。

表3 48 h精子活力的檢測

2.4 72 h種豬常溫精液精子活力的比較分析

杜洛克、長白、大約克夏、柯樂豬種豬常溫精液各5頭份在17℃條件下放置72 h精子活力，37℃恒溫載物臺上蘇醒不同時間精子活力比較分析，檢測結果見表4。由表4可知，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒5 min精子活力高于蘇醒3 min，杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬蘇醒3 min精子活力高于蘇醒1 min。蘇醒5 min精子活力順序為大約克夏＞長白＞杜洛克＞柯樂豬。

表4 72 h精子活力的檢測

3 討論

根據(jù)《豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術規(guī)范》（GB/T 25172—2010）和《種豬常溫精液》（GB 23238—2009）中的定義，精子活力是指在37℃環(huán)境下直線前進運動精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率[2]。本研究以不同時間下檢測進行判斷精子活力，通過試驗研究發(fā)現(xiàn)精子在37℃下蘇醒5 min，精子活力最佳，3 min次之，1 min最差。精子在17℃下保存是處于休眠狀態(tài)，配種利用進入體內(nèi)是37℃環(huán)境下，通過試驗可以判斷精子在37℃環(huán)境下要蘇醒一段時間才可達到最好活力效果，在生產(chǎn)中可以通過先預熱常溫精液后再進行輸配。

本試驗采用了4個品種進行對比，無論哪一個豬種，蘇醒5 min的精子活力高于蘇醒3 min的，蘇醒3 min的精子活力高于蘇醒1 min的。并且4個品種的精子活力是大約克夏優(yōu)于其他品種，這可能與大約克夏高繁殖力特性有關。本試驗中，根據(jù)精子活力檢測，大約克夏精子活力最高，其次為長白、杜洛克、柯樂豬，大約克夏豬精子活力高于其他2個外來品種和1個地方品種，可能與大約克夏有中國地方豬的血統(tǒng)有關。當然，不同品種的種公豬的精子活力會因品種、季節(jié)、飼養(yǎng)管理等因素有所差異，并且這種差異是客觀存在的[4]。關于公豬精子其他運動參數(shù)比較以及不同條件下精子相關參數(shù)的變化等有待進一步研究和探討，不同品種的種公豬由于具有的遺傳特性區(qū)別，其精液品質間的差異是客觀存在的。

4 結論

在37℃下蘇醒5 min檢測杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬、柯樂豬精子活力，精子活力效果最高。37℃蘇醒5 min精子活力高于蘇醒3 min精子活力，37℃蘇醒3 min精子活力高于蘇醒1 min精子活力，本試驗以國外品種和地方品種進行研究，無論哪一個豬種，蘇醒5 min的精子活力是最佳的。此研究為檢驗檢測人員在檢測精子活力時提供方法參考。對比4個品種精子活力發(fā)現(xiàn)，大約克夏豬均優(yōu)于其他3個品種，本研究得出不同品種豬精子活力的差異為后續(xù)的研究提供參考。