胡高宇，張 翔，林興管，蔡逸龍，蔡景波，肖國(guó)強(qiáng)，3，柴雪良，3，*

(1.上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306； 2.浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，浙江 溫州 325005； 3.浙江省近岸水域生物資源開(kāi)發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325005)

文蛤(Meretrixpetechialis)屬于軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusca)瓣鰓綱(Lamellibranchia)異齒亞綱(Heterodonta)簾蛤目(Veneroida)簾蛤科(Veneridae)文蛤?qū)?Meretrix)，是我國(guó)沿海重要的灘涂經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)。文蛤具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，有“天下第一鮮”的美譽(yù)，深受東南亞沿海人民的青睞。

呼吸耗氧、攝食排泄是貝類(lèi)新陳代謝的基本生理指標(biāo)，是對(duì)貝類(lèi)長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)行判斷的依據(jù)，也是貝類(lèi)響應(yīng)環(huán)境變化的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)之一[1]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)貝類(lèi)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，養(yǎng)殖規(guī)模逐漸壯大。漁民為了提高產(chǎn)量，無(wú)視環(huán)境承載力，過(guò)度追求高密度養(yǎng)殖，致使病害滋生、水質(zhì)惡化、貝類(lèi)品質(zhì)降低等現(xiàn)象頻發(fā)。如何合理規(guī)劃生產(chǎn)布局，科學(xué)布置養(yǎng)殖密度，是當(dāng)今養(yǎng)殖生產(chǎn)中急需解決的難題，也是今后引導(dǎo)傳統(tǒng)養(yǎng)殖業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)的重要指南。研究不同環(huán)境因子下不同貝類(lèi)，如貽貝[2-3]、扇貝[4-5]和牡蠣[6-7]等的生理代謝響應(yīng)，可為指導(dǎo)貝類(lèi)的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)也可為貝類(lèi)養(yǎng)殖容量、生態(tài)生理學(xué)和生理能量學(xué)等研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

關(guān)于呼吸耗氧的測(cè)定，之前的研究多采用靜水法[4-7]和流水法[8-9]。靜水法操作簡(jiǎn)單，成本較低，至今仍被廣泛使用。國(guó)內(nèi)貝類(lèi)耗氧率的測(cè)量方法主要采用靜水法，其基本做法是將貝置于盛滿(mǎn)海水的容器中密封，以溫克勒(Winkler)碘量法測(cè)定實(shí)驗(yàn)前后水中溶解氧含量變化。但該方法的缺點(diǎn)也較明顯：實(shí)驗(yàn)證明，靜水法中溶解氧分布不均勻，測(cè)量過(guò)程容易造成水體中氧氣的泄露和消耗[10]；該方法只監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)始、末的數(shù)據(jù)，因而忽視了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的參數(shù)變化；而且，靜水法只能用于短期實(shí)驗(yàn)，對(duì)長(zhǎng)時(shí)間貝類(lèi)溶氧的監(jiān)測(cè)難度較大。流水法是將貝置于開(kāi)放的呼吸室內(nèi)，根據(jù)進(jìn)出水中溶解氧濃度差異確定耗氧率。相較于靜水法，流水法解決了不能長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題，但是流水法難以保證進(jìn)水口溶解氧濃度的一致性，流速太小可能導(dǎo)致供氧量不足，而流速過(guò)大又會(huì)使得實(shí)驗(yàn)期間溶解氧濃度變化太小。同時(shí)，流水法對(duì)貝類(lèi)形成的刺激也較大，容易降低濾食率效果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差增大[11]。

間歇式呼吸測(cè)量法是一種廣泛應(yīng)用于水生生物中的測(cè)量技術(shù)[12-15]。該技術(shù)配備自動(dòng)化程序，可實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)全程的數(shù)據(jù)測(cè)量，有效地減少人為操作導(dǎo)致的誤差，便于操作；采用熒光光纖氧氣測(cè)量技術(shù)測(cè)定溶解氧，測(cè)量精度更高，穩(wěn)定性更強(qiáng)。該方法的整個(gè)測(cè)量過(guò)程分為水體交換、等待和溶氧測(cè)量3個(gè)部分。由于在測(cè)量中有水泵帶動(dòng)水流，因此不存在溶解氧分布不均勻的問(wèn)題。同時(shí)，在交換階段通過(guò)每次更換呼吸室內(nèi)水體，排出了呼吸室內(nèi)積累的代謝產(chǎn)物，確保了長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)的可能性。目前，該方法在貝類(lèi)生理代謝中已得到應(yīng)用。如Sui等[14]通過(guò)模擬高CO2和低氧條件，使用間歇式呼吸測(cè)量法，發(fā)現(xiàn)厚殼貽貝在72 h內(nèi)的耗氧率顯著降低；Kim等[15]采用該設(shè)備進(jìn)行為期96 h的實(shí)驗(yàn)，探究高溫與低氧共同脅迫對(duì)蛤仔的影響，發(fā)現(xiàn)耗氧率受到影響且顯著降低。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外發(fā)表的關(guān)于鹽度、溫度、pH等環(huán)境因子對(duì)文蛤能量代謝影響的報(bào)道中，文蛤耗氧率的測(cè)定方法仍然以靜水法或流水法為主[16-18]。本研究采用間歇式呼吸測(cè)量法對(duì)文蛤耗氧率進(jìn)行測(cè)量，以便更加準(zhǔn)確地反映文蛤在環(huán)境溫度脅迫下的呼吸變化規(guī)律，并通過(guò)測(cè)定攝食率和排泄率，獲得文蛤在不同水溫下的生理響應(yīng)，以期為文蛤環(huán)境容量的研究提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，研究結(jié)果也將有助于文蛤養(yǎng)殖水平提升和養(yǎng)殖產(chǎn)量提高。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

文蛤取自浙江省樂(lè)清市翁垟街道的貝類(lèi)養(yǎng)殖區(qū)。采集活力強(qiáng)、無(wú)損傷、規(guī)格整齊的個(gè)體帶回實(shí)驗(yàn)室，用刷子清洗表面附著物后置于實(shí)驗(yàn)桶內(nèi)暫養(yǎng)7 d以上，每天早、晚各投喂藻液(等鞭金藻)1次，連續(xù)充氣，每天換水1次。養(yǎng)殖海水經(jīng)沉淀砂濾后使用，海水鹽度為2.5%～2.6%，水溫在15 ℃左右。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溫度設(shè)置

根據(jù)樂(lè)清灣沿岸水溫周年變化規(guī)律，共設(shè)置5個(gè)溫度梯度——15、20、25、30、35 ℃。水溫通過(guò)冷水機(jī)調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)前，文蛤在各個(gè)溫度梯度里饑餓暫養(yǎng)24 h。

文蛤生長(zhǎng)參數(shù)測(cè)定方法：用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測(cè)殼長(zhǎng)、殼寬、殼高(精確到0.01 mm)，用Mettler Toledo精密電子天平稱(chēng)其總重(精確到0.01 g)，并取軟組織烘干測(cè)量干重(精確到0.000 1 g)。

1.2.2 攝食排泄排氨實(shí)驗(yàn)

按照文蛤的規(guī)格設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組(每組5只)——大規(guī)格組、中規(guī)格組、小規(guī)格組，及1個(gè)對(duì)照組(不加貝)。將每個(gè)實(shí)驗(yàn)組的5只文蛤放入3 L錐形瓶中，水浴控溫，以文蛤貝殼張開(kāi)開(kāi)始計(jì)時(shí)，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2 h，實(shí)驗(yàn)期間全程充氧并遮光。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每組文蛤進(jìn)行多次測(cè)量，取平均值用于后續(xù)計(jì)算。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)量文蛤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)，解剖取軟組織，60 ℃烘干并稱(chēng)重。收集錐形瓶?jī)?nèi)的水，測(cè)定實(shí)驗(yàn)前后葉綠素a濃度變化，用于計(jì)算攝食率。葉綠素a濃度參照HJ 897—2017《水質(zhì) 葉綠素 a 的測(cè)定 分光光度法》，采用丙酮萃取，分光光度法測(cè)定。測(cè)定實(shí)驗(yàn)水體中氨氮含量，用于計(jì)算排氨率。排氨率測(cè)定參照《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范 第4部分：海水分析》，采用靛酚藍(lán)分光光度法測(cè)定。用300目濾網(wǎng)收集實(shí)驗(yàn)后文蛤的糞便，烘干測(cè)定顆粒態(tài)有機(jī)物(POM)值，計(jì)算排糞率。

攝食排泄排氨實(shí)驗(yàn)使用的文蛤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

1.2.3 呼吸耗氧實(shí)驗(yàn)

文蛤的呼吸耗氧實(shí)驗(yàn)通過(guò)DAQ-M水生生物呼吸代謝測(cè)量系統(tǒng)(Loligo Systems公司，丹麥)測(cè)量。系統(tǒng)由呼吸室、水泵、溶解氧測(cè)量裝置、流通池、水管等組成。呼吸室采用圓形呼吸室，體積約為1 600 mL。受呼吸室體積限制，每個(gè)呼吸室放入5個(gè)文蛤。同樣按照文蛤的規(guī)格設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組。流通池使用加熱棒進(jìn)行控溫，每個(gè)呼吸室各裝有一個(gè)溶氧探頭與主機(jī)相連。每個(gè)測(cè)量周期采用如下參數(shù)：測(cè)量360 s，水體交換200 s，等待60 s。通過(guò)連接電腦，在軟件中顯示溶解氧濃度變化曲線，每次測(cè)量10個(gè)周期以上，取平均值，計(jì)算耗氧率。

呼吸耗氧實(shí)驗(yàn)使用的文蛤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 呼吸耗氧實(shí)驗(yàn)用的文蛤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)Table 2 Biology data of Meretrix petechialis used in oxygen consumption test

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2016統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)和作圖，在SPSS 18.0軟件上做單因素方差分析(one-way ANOVA)。

按以下公式計(jì)算各個(gè)溫度區(qū)間內(nèi)攝食率、排氨率、排糞率、耗氧率的變化情況。

RIR=V[C0-Ct-(C1-C2)]/(N×T×W)。

(1)

式(1)中：RIR為攝食率(mg·g-1·h-1)，V為實(shí)驗(yàn)海水體積(mL)，C0、Ct分別為實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的餌料濃度(mg·L-1)，C1、C2分別為對(duì)照組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的餌料濃度(mg·L-1)，N為實(shí)驗(yàn)文蛤數(shù)量，T為實(shí)驗(yàn)時(shí)間(h)，W為軟組織干重(g)。

RNR=V[(Nt-N0)-(N2-N1)]/(1 000×T×W)。

(2)

式(2)中：RNR為排氨率(μg·g-1·h-1)，N0、Nt分別為實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)海水中的氨氮濃度(μg·L-1)，N1、N2分別為對(duì)照組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)海水中的氨氮濃度(μg·L-1)。

RFER=RIR×(1-RAE)；

(3)

RAE=(F-E)/[(1-E)×F]×100。

(4)

式(3)、(4)中：RFER為排糞率(μg·g-1·h-1)；RAE為同化率；F為餌料中有機(jī)質(zhì)的干重比例，即餌料中POM與總顆粒物含量之比；E為糞便中有機(jī)質(zhì)的干重比例，即糞便中POM與總顆粒物含量之比。

ROR=V|(D0-Dt)-(D1-D2)|/(1 000×T×W)。

(5)

式(5)中：ROR為耗氧率(mg·g-1·h-1)，D0、Dt分別為實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)海水中的氧氣濃度(mg·L-1)，D1、D2分別為對(duì)照組開(kāi)始和結(jié)束時(shí)海水中的氧氣濃度(mg·L-1)。

呼吸能(J·g-1·h-1)按照耗氧率和貝類(lèi)耗氧量的能量系數(shù)計(jì)算，1 mg O2折算為14.23 J[19]。

RO/N=(ROR/16)/(RNR/14)。

(6)

式(6)中RO/N為氧氮比。

A=(Y2-Y1)/Y1×100。

(7)

式(7)中：A為相應(yīng)指標(biāo)(攝食率、排氨率、排糞率、耗氧率)的變化率(%)，Y1、Y2分別為各個(gè)溫度區(qū)間內(nèi)相應(yīng)指標(biāo)的始、末值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度下文蛤的攝食率

如表3和圖1所示，3種規(guī)格文蛤的攝食率為0.015～0.043 mg·g-1·h-1。隨溫度上升，同規(guī)格文蛤的攝食率總體呈先升后降的趨勢(shì)。大規(guī)格文蛤在25～30 ℃區(qū)間攝食率增加最多，中規(guī)格文蛤在20～25 ℃區(qū)間攝食率增加最多，小規(guī)格文蛤在15～20 ℃區(qū)間攝食率增加最多。小規(guī)格文蛤在25 ℃攝食率達(dá)到最大值(0.037 mg·g-1·h-1)，而大、中規(guī)格文蛤在30 ℃攝食率達(dá)到最大值，分別為0.043、0.035 mg·g-1·h-1。在20 ℃條件下，中規(guī)格文蛤的攝食率顯著(P<0.05)低于大、小規(guī)格的文蛤，而在其他溫度下不同規(guī)格文蛤的攝食率并無(wú)顯著差異。

表3 不同溫度區(qū)間下文蛤的攝食率變化率Table 3 Changes of ingestion rate of Meretrix petechialis under different temperature ranges %

2.2 不同溫度下文蛤的排氨率

如表4和圖2所示，3種規(guī)格文蛤的排氨率為1.26～135.25 μg·g-1·h-1。隨溫度上升，同規(guī)格文蛤的排氨率總體呈先升后降的趨勢(shì)。大規(guī)格文蛤在15～20 ℃區(qū)間排氨率增加最多，中規(guī)格文蛤在20～25 ℃區(qū)間排氨率增加最多，小規(guī)格文蛤在15～20 ℃區(qū)間排氨率增加最多。小規(guī)格文蛤在20 ℃排氨率達(dá)到最大值(65.21 μg·g-1·h-1)，大、中規(guī)格文蛤在30 ℃達(dá)到最大值，分別為69.15、135.25 μg·g-1·h-1。各規(guī)格文蛤的排氨率均在35 ℃最低。在15 ℃條件下，大規(guī)格文蛤的排氨率顯著(P<0.05)低于小規(guī)格文蛤，但中規(guī)格文蛤的排氨率分別與大、小規(guī)格文蛤相比差異均不顯著；在25 ℃條件下，3種規(guī)格文蛤的排氨率均存在顯著差異(P<0.05)，從高到低依次為中規(guī)格>大規(guī)格>小規(guī)格。在其他溫度下，不同規(guī)格文蛤的排氨率并無(wú)顯著差異。

相同溫度下柱上無(wú)相同字母的表示差異顯著(P<0.05)。下同。Bars marked without the same letters indicated significant difference at P<0.05 under the same temperature. The same as below.圖1 不同規(guī)格文蛤在不同溫度下的攝食率Fig.1 Ingestion rate of Meretrix petechialis under different temperature

圖2 不同規(guī)格文蛤在不同溫度下的排氨率Fig.2 Ammonia excretion rate of Meretrix petechialis under different temperature

表4 不同溫度區(qū)間下文蛤的排氨率變化率Table 4 Changes of ammonia excretion rate of Meretrix petechialis under different temperature ranges %

2.3 不同溫度下文蛤的同化率和排糞率

如表5所示，在15～30 ℃，3種規(guī)格的文蛤同化率隨溫度升高而升高；但在30～35 ℃，大、小規(guī)格文蛤的同化率隨溫度升高而降低，而中規(guī)格文蛤的同化率隨溫度升高進(jìn)一步升高。

表5 不同溫度區(qū)間下文蛤的同化率Table 5 Assimilation rate of Meretrix petechialis under different temperature

從表6和圖4可以看出，3種規(guī)格文蛤的排糞率為2.173～15.908 μg·g-1·h-1。大規(guī)格文蛤在15～20 ℃排糞率變化最大，中規(guī)格文蛤在30～35 ℃排糞率變化最大，小規(guī)格文蛤在25～30 ℃排糞率變化最大。大、小規(guī)格的文蛤在15 ℃排糞率最大，分別為15.91、13.42 μg·g-1·h-1，中規(guī)格文蛤在20 ℃排糞率最大，為11.71 μg·g-1·h-1。在15 ℃下，大規(guī)格文蛤的排糞率顯著(P<0.05)高于中規(guī)格文蛤，但小規(guī)格文蛤的排糞率分別與大、中規(guī)格文蛤相比差異均不顯著；在其他溫度件下，3種規(guī)格文蛤的排糞率均無(wú)顯著差異。

表6 不同溫度區(qū)間下文蛤的排糞率變化率Table 6 Changes of faecal egestion rate of Meretrix petechialis under different temperature ranges %

2.4 不同溫度下文蛤的耗氧率和代謝效率

經(jīng)測(cè)定，大、中、小規(guī)格文蛤的耗氧率均隨溫度升高而升高，范圍為0.290～1.780 mg·g-1·h-1，且均在35 ℃達(dá)到最大值，分別為1.47、1.78、1.72 mg·g-1·h-1。如表7所示，3種規(guī)格的文蛤均在20～25 ℃區(qū)間耗氧率變化最大，但大、

表7 不同溫度區(qū)間下文蛤的耗氧率變化率Table 7 Changes of oxygen consumption rate of Meretrix petechialis under different temperature ranges %

圖3 不同規(guī)格文蛤在不同溫度下的排糞率Fig.3 Faecal egestion rate of Meretrix petechialis under different temperature

中、小規(guī)格的文蛤分別在15～20、25～30、15～20 ℃耗氧率變化最小。從圖4可以看出，3種規(guī)格文蛤的呼吸能為4.13～25.35 J·g-1·h-1。在35 ℃，3種規(guī)格文蛤的呼吸能無(wú)顯著差異；在15、20 ℃，大規(guī)格文蛤的呼吸能顯著(P<0.05)低于中、小規(guī)格文蛤；在25、30 ℃，中規(guī)格文蛤的呼吸能顯著(P<0.05)高于大規(guī)格文蛤，但小規(guī)格文蛤的呼吸能分別與大、中規(guī)格文蛤相比差異均不顯著。

圖4 不同規(guī)格文蛤在不同溫度下的呼吸能Fig.4 Respiration energy of Meretrix petechialis under different temperature

如表8所示，在15～25 ℃，文蛤的氧氮比先降后升，在20 ℃達(dá)到最低值；在35 ℃，3種規(guī)格文蛤的氧氮比均劇增，遠(yuǎn)高于其他溫度下。

表8 不同溫度下文蛤的氧氮比Table 8 Ratio of oxygen to nitrogen of Meretrix petechialis under different temperature

3 討論

3.1 不同溫度對(duì)文蛤攝食、排泄、排氨的影響

文蛤是變溫動(dòng)物，外界環(huán)境溫度變化對(duì)文蛤新陳代謝具有重大影響。在本研究中，隨著水溫升高，不同規(guī)格文蛤的攝食率先上升后下降，大、中規(guī)格文蛤在30 ℃，小規(guī)格文蛤在25 ℃，攝食率達(dá)到最大值。J?rgensen等[20]認(rèn)為，在適宜的溫度內(nèi)，濾食性貝類(lèi)攝食率隨溫度升高而增加。其原因一方面可能是升溫導(dǎo)致海水黏滯性下降，加快了濾水速率；另一方面可能是溫度升高導(dǎo)致濾食性貝類(lèi)新陳代謝加快，鰓絲上纖毛擺動(dòng)加速等，使得單位時(shí)間內(nèi)濾水量加大。當(dāng)環(huán)境溫度處于適溫外時(shí)，貝類(lèi)生長(zhǎng)狀態(tài)會(huì)受到影響，生理代謝強(qiáng)度開(kāi)始減弱，濾食率也逐漸下降[21]。

貝類(lèi)的攝食、同化、排泄是相互影響的。van Erkom Schurink等[22]比較了4種南非貽貝(Aulacomyaater、Choromytilusmeridionalis、Mytilusgalloprovincialis、Pernaperna)的濾食、耗氧、同化等代謝指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)溫度在10～20 ℃區(qū)間，貽貝的吸收率不受影響，但耗氧率和排泄率受影響。Wilbur等[23]將溫度從15 ℃升到25 ℃，發(fā)現(xiàn)在貽貝(Geukensiademissa)上測(cè)得的生理參數(shù)除了吸收率外均隨升溫發(fā)生了顯著變化。然而，董波等[24]在研究菲律賓蛤仔時(shí)發(fā)現(xiàn)，在9～22 ℃，其攝食率和同化率均有上升，但在26 ℃下，其生理代謝指標(biāo)開(kāi)始降低；栗志民等[25]在研究企鵝珍珠貝時(shí)發(fā)現(xiàn)，溫度升高使該貝的同化率逐漸增加，并在29 ℃達(dá)到峰值，但當(dāng)溫度繼續(xù)升高至32 ℃后，同化率降低了13.5%。本研究結(jié)果與董波等[24]和栗志民等[25]的結(jié)果有相似的變化趨勢(shì)：在15～30 ℃，隨著文蛤攝食率逐漸增加，餌料的同化率上升，而排糞率持續(xù)降低；在30～35 ℃，伴隨著攝食率的下降，文蛤的同化率和排糞率均降低。這意味著，在適宜的環(huán)境里，水溫升高通過(guò)增強(qiáng)貝類(lèi)體內(nèi)消化酶活性可以增加貝類(lèi)對(duì)餌料的攝食強(qiáng)度，促進(jìn)攝食吸收，同時(shí)減少排泄；但當(dāng)水溫超過(guò)貝類(lèi)的適宜范圍之后，酶活受到抑制，攝食同化率開(kāi)始下降。關(guān)于造成不同研究結(jié)果差異性的原因：Laing等[26]認(rèn)為，可能是實(shí)驗(yàn)溫度范圍選取問(wèn)題，如某研究溫度下實(shí)驗(yàn)貝類(lèi)的吸收率與之無(wú)相關(guān)性；但也有可能是實(shí)驗(yàn)條件的不同所致，如餌料種類(lèi)和濃度[27]、海水鹽度和pH值等。

貝類(lèi)排泄物主要有氨、尿素、尿酸等，其中氨占比達(dá)到總排泄量的70%以上[28]。排氨率是反映貝類(lèi)代謝強(qiáng)度的重要指標(biāo)之一，排氨率升高意味著，當(dāng)貝類(lèi)遭受到溫度脅迫時(shí)，會(huì)通過(guò)提高代謝來(lái)加快能量物質(zhì)消耗以應(yīng)對(duì)不適條件。本研究中，溫度從15 ℃升高至30 ℃時(shí)，大、中規(guī)格文蛤的排氨率均有上升趨勢(shì)，而小規(guī)格文蛤的排氨率曲線處于波動(dòng)狀態(tài)。這可能是因?yàn)?種規(guī)格的文蛤?qū)囟鹊拿舾行圆灰粯?，小?guī)格文蛤?qū)囟茸兓^為敏感，體內(nèi)的內(nèi)環(huán)境平衡調(diào)節(jié)能力弱。

3.2 不同溫度對(duì)文蛤呼吸代謝的影響

耗氧率是指單位體重的生物在單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)生物氧化所消耗的氧氣量，是用來(lái)衡量生物體新陳代謝強(qiáng)度的基本指標(biāo)之一。文蛤這類(lèi)變溫動(dòng)物極易受到環(huán)境溫度的影響，從而改變自身的代謝效率。一般認(rèn)為，在正常的水溫條件下，水體溫度與耗氧率呈正比，一旦溫度超過(guò)某一極限就會(huì)導(dǎo)致貝類(lèi)自身生理功能出現(xiàn)異常，耗氧率下降。本研究中，文蛤耗氧率隨溫度上升而增加，在20～25 ℃增加最明顯，之后增加速率逐漸減慢，因此25 ℃可能是文蛤的最適溫度。該結(jié)果與在部分濾食性貝類(lèi)上的結(jié)果具有相似性。劉英杰[29]發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格青蛤在20～35 ℃隨溫度升高耗氧率也逐漸升高；櫛江珧在18～34 ℃，耗氧率隨溫度升高而增大，且在22～26 ℃增加率最大[30]；泥蚶在15～25 ℃，耗氧率與溫度成正比，在25 ℃時(shí)耗氧率達(dá)到最大值，之后隨溫度升高逐漸降低[31]。

在對(duì)文蛤開(kāi)展的研究中，由于大部分結(jié)果是以靜水法獲得的，而本研究采用的是間歇式呼吸測(cè)量法，因此耗氧率的測(cè)量結(jié)果與其他研究存在差異。Bougrier等[32]認(rèn)為，研究結(jié)果出現(xiàn)不同的原因可能在于貝類(lèi)的馴化程度或者實(shí)驗(yàn)方法不同。范建勛[33]的結(jié)果與本研究相似，溫度與耗氧率成正相關(guān)，但是其設(shè)置的最高水溫僅為30 ℃，低于本研究的最高水溫。王盛青等[34]和馮建彬等[35]在對(duì)文蛤的研究中發(fā)現(xiàn)，文蛤耗氧率隨溫度升高先上升后下降，但本研究中文蛤耗氧率隨著溫度升高并未出現(xiàn)下降的現(xiàn)象；因此，若要判斷文蛤耗氧率的最高耐受溫度，還需要進(jìn)一步開(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

文蛤的規(guī)格對(duì)耗氧率也有較大影響。Bayne等[36]發(fā)現(xiàn)，貝類(lèi)耗氧率隨單位軟體部干重的增大呈下降趨勢(shì)；姜祖輝等[37]認(rèn)為，毛蚶在生長(zhǎng)過(guò)程中，脂肪和肌肉積累增多，造成重要臟器與肌肉等組織比重增大，從而導(dǎo)致其規(guī)格變大而代謝下降。本研究得出的結(jié)論與上述結(jié)果存在差異：在15～20 ℃升溫過(guò)程中，各規(guī)格文蛤的耗氧率由大到小依次是小規(guī)格>中規(guī)格>大規(guī)格；在20～35 ℃，各規(guī)格文蛤的耗氧率由大到小依次是中規(guī)格>小規(guī)格>大規(guī)格，但是中、小規(guī)格文蛤耗氧率與溫度的擬合曲線差異較小。

3.3 生物氧氮比

由于氮主要存在于蛋白質(zhì)中，脂肪和糖類(lèi)含氮較少，因此生物氧氮比可以用來(lái)判斷生物體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解代謝比率。Widdows等[38]認(rèn)為，氧氮比與環(huán)境脅迫有關(guān)，是判斷生物體對(duì)環(huán)境適應(yīng)性程度的指標(biāo)之一。通常認(rèn)為，當(dāng)氧氮比接近7時(shí)，生物體能量需求較低，可以完全由蛋白質(zhì)作為主要能源物質(zhì)[39]；當(dāng)氧氮比約為24時(shí)，此時(shí)蛋白質(zhì)供能不足，代謝物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì)和脂肪聯(lián)合供能[40]；當(dāng)氧氮比超過(guò)24甚至無(wú)窮大時(shí)，碳水化合物替代蛋白質(zhì)，與脂肪共同承擔(dān)供能的職責(zé)[41]。本研究中，在15～30 ℃，文蛤的氧氮比值基本處于7～24，說(shuō)明文蛤在能量代謝中基本上以蛋白質(zhì)和脂肪供能為主，且小規(guī)格文蛤較大、中規(guī)格文蛤的變化率更大，推測(cè)小規(guī)格文蛤代謝較為劇烈，能量消耗較大。在對(duì)魁蚶(15～25 ℃)[9]、菲律賓蛤仔(9～22 ℃)[24]和墨西哥灣貝(10～31 ℃)[42]的研究中發(fā)現(xiàn)，其供能均以蛋白質(zhì)和脂肪為主，而且環(huán)境溫度升高可以提升蛋白質(zhì)的利用率，降低碳水化合物和脂肪代謝率。上述結(jié)果與本研究中大、中規(guī)格文蛤(10～30 ℃)的結(jié)果類(lèi)似。在35 ℃，3種規(guī)格文蛤的氧氮比均遠(yuǎn)超24，直接原因在于此時(shí)文蛤排氨率過(guò)低。可能的原因是，高溫環(huán)境使文蛤酶活性降低，影響了正常的排氨機(jī)能，此時(shí)能量來(lái)源于碳水化合物和脂肪的分解。