許雄鋒 鐘麗園

【摘 要】目的：本文旨在探討FN1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法：運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胃癌組織及癌旁正常組織中FN1的表達(dá)水平并分析其與患者臨床參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果：在68例胃癌組織中FN1陽(yáng)性表達(dá)率為73.53%（50/68例），癌旁正常組織中FN1陽(yáng)性表達(dá)率為35.29%（24/68例），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在胃癌組織中，F(xiàn)N1的表達(dá)水平在胃癌患者的TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），與患者年齡、腫瘤大小、病理分級(jí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：FN1在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，其可能是胃癌患者病情進(jìn)展預(yù)測(cè)的潛在生物學(xué)標(biāo)志。

【關(guān)鍵詞】：FN1;胃癌;臨床意義

【中圖分類號(hào)】R735.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-3783（2020）07-21--01

胃癌是第四大最常見(jiàn)的癌癥，是癌癥死亡的第三大主要原因，已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)重要的健康問(wèn)題，尤其是在中國(guó)，韓國(guó)和日本。根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)的數(shù)據(jù)，2012年約診斷出950，000例胃癌新病例，和70萬(wàn)例死亡病例[1]。通常，該疾病被診斷已為晚期，并且大多數(shù)患者中可用的治療方法有限。目前，盡管外科手術(shù)結(jié)合放療，化學(xué)療法和靶向治療可以延長(zhǎng)患者生存期，但晚期胃癌患者的5年總生存率仍然很差。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)新的診斷方法和新療法以降低與胃癌相關(guān)的死亡率并改善患者的臨床療效。

纖維連接蛋白（FN）是一種高分子量的糖蛋白，分子量介于220，000和250，000之間。作為一種粘附分子，F(xiàn)N最初是從人血漿和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞表面分離出來(lái)的，并以高水平存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，包括存在于膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤中。纖維連接蛋白1（FN1）是FN家族的成員，它參與多種細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程，包括細(xì)胞粘附，遷移，生長(zhǎng)和分化在內(nèi)的多個(gè)細(xì)胞過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。研究還發(fā)現(xiàn)FN1與多種疾病的發(fā)生相關(guān)，如癌癥，關(guān)節(jié)炎和動(dòng)脈粥樣硬化等。研究已證實(shí)FN1在食道鱗狀細(xì)胞癌，口腔鱗狀細(xì)胞癌，鼻咽癌，結(jié)直腸癌，卵巢癌，腎癌和甲狀腺癌中促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移[2]。然而，關(guān)于FN1在胃癌中的研究尚少，且意見(jiàn)不一。因此有必要進(jìn)一步驗(yàn)證和闡明FN1在胃癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇2016年4月至2018年10月在我院住院患者手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本68例，所有病例術(shù)前均未采取放療、化療治療，同一患者手術(shù)標(biāo)本通過(guò)切緣正常組織作為正常對(duì)照組織。其中，≥60歲的患者42例，<60歲的患者26例;男性患者46例，女性患者22例;高、中分化患者28例，低分化或未分化患者40例;TNM分期I-II期患者30例，III-IV期患者38例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者50例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例。上述組織標(biāo)本的使用經(jīng)本院倫理委員會(huì)同意。

1.2 試劑免疫組化試劑盒（武漢博士德），DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋），F(xiàn)N1抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，二抗購(gòu)自上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法免疫組化采用SP 法。一抗為兔抗人FN1（稀釋倍數(shù)為1∶1000），稀釋后滴加于切片上，濕盒4 ℃過(guò)夜。第2天以羊抗兔二抗室溫下孵育半個(gè)小時(shí)，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。使用DAB顯色液室溫孵育10min，再用蘇木精復(fù)染，脫水，封片。

1.4 結(jié)果判定：FN1染色陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，均定位于胞質(zhì)中，根據(jù)光學(xué)顯微鏡下觀察陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)占瘤細(xì)胞總數(shù)比例以及染色程度分為：①陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%;②陽(yáng)性染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%～50%之間;③強(qiáng)陽(yáng)性染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于等于50%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)分析，當(dāng)P<0.05時(shí)，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FN1在胃癌與正常胃組織中的表達(dá)

在68例胃癌組織中，其中50例FN1呈陽(yáng)性表達(dá)（圖1），陽(yáng)性率為73.53%;相應(yīng)的癌旁正常胃組織中FN1陽(yáng)性表達(dá)僅24例，陽(yáng)性率為35.29%，之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 胃癌組織中FN1表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系

在68例胃癌組織中，F(xiàn)N1的表達(dá)在TNM分期I-II期患者中明顯低于III-IV期患者的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005）;在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中FN1的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）;而FN1的表達(dá)與患者年齡、性別和病理分級(jí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P > 0.05）（見(jiàn)表1）。

3 討論

FN1介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用，并在細(xì)胞粘附，遷移，生長(zhǎng)和分化中起重要作用。FN1是整聯(lián)蛋白受體家族眾多成員的配體，參與各種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明，乳腺癌中與腫瘤相關(guān)的FNs的表達(dá)明顯高于正常組織相關(guān)的FNs [3]。并且研究顯示，在抗癌藥物治療之前神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中FN呈高表達(dá)狀態(tài)，因此，當(dāng)FN功能成為治療目標(biāo)時(shí)，這種豐富程度的提高可能有助于腫瘤靶向效率[4]。FN是一種普遍存在的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，在整個(gè)人的一生中都被組裝到所有組織的原纖維基質(zhì)中。膠質(zhì)瘤微環(huán)境中大量的細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)膠質(zhì)瘤形態(tài)的維持至關(guān)重要，并且與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和分化有關(guān)。有報(bào)告表明，PI3K / AKT / mTOR途徑在FN轉(zhuǎn)錄和選擇性剪接中起重要作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞行為[5]。

研究表明，F(xiàn)N1參與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，并在多種癌癥中表達(dá)上調(diào)，例如食道鱗狀細(xì)胞癌，結(jié)腸直腸癌，口腔鱗狀細(xì)胞癌和甲狀腺癌。例如，F(xiàn)N1在口腔鱗狀細(xì)胞癌中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，F(xiàn)N1通過(guò)FAK激活增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C，淋巴管生成，并促進(jìn)EMT的發(fā)生。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)N1過(guò)表達(dá)是頭頸癌預(yù)后不良的指標(biāo)。FN1是頭頸部鱗狀細(xì)胞癌對(duì)放療耐藥性的潛在生物標(biāo)志物，F(xiàn)N1在具有順鉑耐藥性的卵巢癌中差異表達(dá)[6]。目前已有研究確定癌癥進(jìn)展的分子機(jī)制涉及FN誘導(dǎo)的基因表達(dá)變化。例如，F(xiàn)N1可以增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，這是促進(jìn)癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。在結(jié)直腸癌中，F(xiàn)N1可以下調(diào)P53并抑制細(xì)胞凋亡[7]。FN1在鼻咽癌中也被認(rèn)為是預(yù)后因子。據(jù)報(bào)道，鼻咽癌中的FN1過(guò)度表達(dá)與疾病晚期和生存期短有關(guān)[8]。

在本次研究中通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在68例胃癌患者組織中FN1以高表達(dá)為主。我們還觀察到，F(xiàn)N1在胃癌中的高表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小以及病理分級(jí)無(wú)關(guān)，但卻與胃癌患者的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床病理特征密切相關(guān)。提示FN1的高表達(dá)可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與文獻(xiàn)的報(bào)道基本相一致。綜上所述，F(xiàn)N1表達(dá)水平在胃癌分期中發(fā)揮了重要作用，其可能與胃癌病情進(jìn)展密切相關(guān)，F(xiàn)N1可作為預(yù)測(cè)胃癌病情進(jìn)展的一個(gè)潛在分子標(biāo)志物，同時(shí)也為胃癌的治療及預(yù)后提供新的理論依據(jù)。

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