趙芳娟，王 琦，尚書(shū)鳳，王楊科

(陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000)

如今隨著生活的精細(xì)化，以及污染物的多元化，人們已經(jīng)不像過(guò)去幾十年，只關(guān)注在環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間大量存在并有急性毒性或者致癌作用的污染物，具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的環(huán)境污染物已經(jīng)引起了人們的關(guān)注。

二氯苯氧氯酚[1](triclosan，TCS)，廣譜抗菌劑，可以殺滅和抑制多種細(xì)菌及病毒，同時(shí)也能保護(hù)有益細(xì)菌，廣泛應(yīng)用于香皂、洗衣液、消毒洗手液等個(gè)人護(hù)理品中。由于應(yīng)用范圍廣闊，其對(duì)于水體的污染也越來(lái)越多地受到重視。最初研究的主要是TCS在環(huán)境中的分布及殘留風(fēng)險(xiǎn)[2]。近年來(lái)在地表水、湖底沉積物、污水和污泥中檢測(cè)出TCS的報(bào)道越來(lái)越多，河魚(yú)體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了TCS的積累[3]。甚至是在人類女性的乳汁中也檢測(cè)出了TCS[4]。在對(duì)中國(guó)五大水系中TCS污染研究時(shí)發(fā)現(xiàn)水體中的質(zhì)量濃度為0.48 μg/L，底泥中的質(zhì)量濃度為2.7 μg/L[5]。水環(huán)境中TCS的含量逐年增加[6]。目前發(fā)現(xiàn)水環(huán)境中的TCS會(huì)對(duì)一些敏感的物種產(chǎn)生危害，主要研究方向集中在魚(yú)類，發(fā)現(xiàn)TCS對(duì)于某些魚(yú)類的生殖和發(fā)育有很強(qiáng)的毒性。同時(shí)對(duì)兩棲類也有相關(guān)研究，比如董玉瑛等[7]研究發(fā)現(xiàn)，二氯苯氧氯酚使蝌蚪體內(nèi)的過(guò)氧化氫酶活性顯著升高，馬玥等[8]研究認(rèn)為TCS可通過(guò)食品包裝、日化用品等，危害人體的健康。

十二烷基苯磺酸鈉[9](sodium dodecyl benzene sulfonate，SDBS)，是一種陰離子表面活性劑，由于其去污性好，價(jià)格低廉，廣泛應(yīng)用于一些洗滌用品中。SDBS排放在水中難以降解，影響水的氧氣交換，使水體富氧化速率提升，產(chǎn)生生物毒性。SDBS的產(chǎn)量逐年增加，在環(huán)境中分布廣泛[10]。地表水中SDBS的含量達(dá)到50 μg/L，河床沉積物中也達(dá)到1 mg/kg[11]。有研究發(fā)現(xiàn)[12]，過(guò)量的SDBS會(huì)造成人體皮膚過(guò)敏，還可產(chǎn)生腹瀉等現(xiàn)象。陳清香等[13]發(fā)現(xiàn)SDBS能影響安氏偽鏢水藻的生殖。余坦健等[14]研究表明，SDBS使奧尼羅非魚(yú)的免疫功能得到明顯的抑制。葉遼遼等[15]發(fā)現(xiàn)當(dāng)SDBS≥2.5 mg/L時(shí)，大鱗副泥鰍受精卵的培育周期及孵化周期延長(zhǎng)，同時(shí)孵化率降低，鰍苗畸形率升高。

蝌蚪生活范圍廣闊，易于捕捉，因其特殊的軀體結(jié)構(gòu)、生理特點(diǎn)和生活史特征，對(duì)農(nóng)藥等環(huán)境污染物的影響極為敏感，是良好的實(shí)驗(yàn)材料。因此在生態(tài)毒理學(xué)研究中，兩棲動(dòng)物常被用作模式生物，相關(guān)的研究正成為生態(tài)毒理學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)[16]。

雖然對(duì)于TCS和SDBS的研究較多，但是在環(huán)境中，污染物從來(lái)都不是單一存在的，目前對(duì)于TCS和SDBS的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。探討TCS聯(lián)合SDBS對(duì)蝌蚪生長(zhǎng)發(fā)育的影響，可以為洗滌用品和個(gè)人護(hù)理品的使用提出相關(guān)參考，為治理水體污染及環(huán)境保護(hù)提供建議，為研制新型洗滌用品和個(gè)人護(hù)理用品提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蝌蚪捕撈于陜西理工大學(xué)校園內(nèi)的天漢湖，經(jīng)顯微鏡鑒定為中華蟾蜍(Bufogargarizans)，發(fā)育時(shí)期大體為30期。把蝌蚪分為兩批，一批蝌蚪用曝氣自來(lái)水馴養(yǎng)一周，喂食雞蛋黃和青菜汁，馴養(yǎng)期間每隔兩天進(jìn)行喂食換水及清理蝌蚪排泄物，用于急性毒性實(shí)驗(yàn)[17]。另一批蝌蚪用湖里的水進(jìn)行飼養(yǎng)，用于后期實(shí)驗(yàn)。

顯微鏡(重慶中顯光電儀器有限公司)，電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)，雙筒解剖鏡(泰克儀器有限公司)，SDBS(天津市百世化工有限公司)，TCS(山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司)，二甲基亞砜(天津市大茂化學(xué)試劑廠)，香柏油(人造，中國(guó)上海懿洋儀器有限公司)，Giemsa染液。

1.2 急性毒性實(shí)驗(yàn)

以曝氣自來(lái)水為溶劑配出具有一定濃度梯度的TCS和SDBS溶液，在裝有1000 mL溶液的1 L燒杯中放入大小均勻的8只蝌蚪。每隔兩天換掉50%的溶液，保證溶液濃度不變，預(yù)實(shí)驗(yàn)找出TCS和SDBS對(duì)處于30期蝌蚪100%致死極限濃度和零致死極限濃度。100%致死極限濃度分別為0.8 mg/L和700 mg/L以及零致死極限濃度分別為0.25 mg/L和350 mg/L。急性毒性實(shí)驗(yàn)按照預(yù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置濃度組6組，3個(gè)平行組。TCS濃度分別為0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55 mg/L，SDBS濃度分別為400、450、500、550、600、650 mg/L。實(shí)驗(yàn)期間不喂食，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始連續(xù)觀察8 h，然后每12 h觀察一次，統(tǒng)計(jì)蝌蚪死亡數(shù)，使用SPSS計(jì)算24、48、72、96 h的半致死濃度。對(duì)于評(píng)價(jià)安全濃度目前主要有以下兩種方法：安全濃度(Sc)和最大容許濃度(MPC)，評(píng)價(jià)公式分別為[18]

Sc=0.1×96 hLC50，
MPC=0.01×96 hLC50。

1.3 慢性毒性實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前挑選發(fā)育時(shí)期均在36期的蝌蚪，測(cè)量每一組的體長(zhǎng)、體重。采用半靜態(tài)養(yǎng)殖法，依據(jù)蝌蚪急性毒性實(shí)驗(yàn)的半致死濃度各設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和3個(gè)平行組。依據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，TCS的濃度間距設(shè)置為：0(對(duì)照組)、0.06、0.18、0.54 mg/L，SDBS的濃度間距設(shè)置為：0(對(duì)照組)、60、180、540 mg/L。根據(jù)單一毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行TCS與SDBS的聯(lián)合毒性實(shí)驗(yàn)，其濃度間距設(shè)置為：0(對(duì)照組)、0.06 mg/L+60 mg/L、0.18 mg/L+180 mg/L、0.54 mg/L+540 mg/L。為短時(shí)間內(nèi)研究?jī)煞N藥物對(duì)蝌蚪生長(zhǎng)發(fā)育的影響，排除其他污染物對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的干擾，實(shí)驗(yàn)期間不喂食，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為15 d，每?jī)商鞊Q掉50%的溶液，保證溶液濃度不變，及時(shí)處理掉蝌蚪排泄物，觀察方法同急性毒性實(shí)驗(yàn)。

1.4 發(fā)育時(shí)期觀察、體長(zhǎng)測(cè)量、體重稱量

發(fā)育時(shí)期觀察：將蝌蚪置于培養(yǎng)皿中，在雙筒解剖鏡下用玻璃分針撥動(dòng)蝌蚪，依據(jù)趙爾宓[19]對(duì)蝌蚪發(fā)育分期的鑒定方法結(jié)合蝌蚪的特征，對(duì)蝌蚪的發(fā)育時(shí)期進(jìn)行鑒定并記錄。

體長(zhǎng)測(cè)量：將鑒定完發(fā)育時(shí)期的蝌蚪放在濾紙上，用玻璃分針將其身體舒展成一條直線，用分度值為0.5 mm的直尺進(jìn)行測(cè)量并記錄。

體重稱量：測(cè)量完體長(zhǎng)的蝌蚪，小心的用玻璃分針撥動(dòng)在濾紙上濾干水分，將蝌蚪放在已經(jīng)調(diào)好的電子天平上，待讀數(shù)穩(wěn)定后進(jìn)行讀數(shù)并記錄。

1.5 蝌蚪紅細(xì)胞核異常計(jì)數(shù)

將稱量完體重的蝌蚪放培養(yǎng)皿中，使其腹部朝上放在雙筒解剖鏡下，小心剖開(kāi)胸部，找到心臟取血，將血滴加到標(biāo)有對(duì)應(yīng)濃度標(biāo)簽的載玻片上，以30°角用另一干凈的載玻片推動(dòng)使血液在載玻片上分布均勻，制成血涂片。用吹風(fēng)機(jī)吹干血涂片，在血膜處滴加適量的甲醇溶液固定15 min，吹干。后用Giemsa染液(pH 6.8)染色15 min，水沖洗，吹干。每只蝌蚪做一張血涂片。在本實(shí)驗(yàn)中核異常是指蝌蚪紅細(xì)胞的異常核數(shù)和微核數(shù)，核異常率=核異常數(shù)/觀察的總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.6 聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)

單一毒性和聯(lián)合毒性完成之后，依據(jù)核異常率用SPSS軟件進(jìn)行回歸分析計(jì)算得到LC50[20]。根據(jù)修瑞琴[21]水生毒理聯(lián)合效應(yīng)相加指數(shù)法計(jì)算出AI值。當(dāng)AI>0為協(xié)同作用，AI=0為相加作用，AI<0為拮抗作用。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 20.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，半致死濃度(LC50)及其95%置信區(qū)間的計(jì)算采用概率單位法用Regression進(jìn)行計(jì)算分析[22]，核異常采用One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果分析

2.1 蝌蚪的急性毒性實(shí)驗(yàn)

通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)，正常的蝌蚪游動(dòng)快速，反應(yīng)靈活，在燒杯的上中下三部分不停游動(dòng)，而在染毒液中游動(dòng)緩慢，反應(yīng)遲鈍，游動(dòng)至燒杯中部后自然沉在燒杯底部，一段時(shí)間后在杯底不動(dòng)呈現(xiàn)假死，用玻璃分針輕輕撥動(dòng)蝌蚪有反應(yīng)。當(dāng)蝌蚪尾巴彎曲，用玻璃分針輕輕撥動(dòng)無(wú)反應(yīng)，體表有白色粘液狀物體時(shí)，則判斷為死亡。蝌蚪在TCS和SDBS中剛死亡的狀態(tài)存在不同之處，TCS溶液中的蝌蚪死亡后尾巴基部彎曲，SDBS溶液中的蝌蚪死亡后尾巴端部彎曲。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)隨著污染物濃度的增加蝌蚪所排出來(lái)的糞便量也在增加，通過(guò)增設(shè)濃度為700 mg/L的SDBS兩個(gè)組，每組15尾蝌蚪，放入蝌蚪后一組立即喂食，一組不喂食，12 h后發(fā)現(xiàn)，不喂食的一組全部死亡，喂食的一組死了1尾。所以可以初步判斷蝌蚪通過(guò)增加排便來(lái)排毒。

隨著污染物濃度的增高，蝌蚪的累計(jì)死亡數(shù)目也隨之增加，并且SDBS對(duì)蝌蚪的毒性比TCS低的多。同時(shí)采用概率單位法用SPSS 20.0軟件計(jì)算半致死濃度(LC50)及其95%置信區(qū)間，及Sc和MPC結(jié)果如表1所示。

表1 TCS與SDBS對(duì)蝌蚪的毒性效應(yīng)及半致死濃度

2.2 蝌蚪的慢性毒性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪體重的影響

圖1(a)—(c)統(tǒng)計(jì)了不同濃度TCS、SDBS、TCS聯(lián)合SDBS在室溫條件下處理15 d后與處理前蝌蚪的體重。經(jīng)過(guò)15 d培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組體重較實(shí)驗(yàn)前都有明顯減輕，聯(lián)合組體重減少值大于單一組體重減少值。同一染毒組中對(duì)照組的蝌蚪體重減小值與低濃度的蝌蚪體重減小值接近，減小值在0.15 g左右，低于中濃度的體重減少值，中濃度的體重減少值最高，高濃度下體重減少值最少。說(shuō)明蝌蚪體重的減少值隨著濃度的增加先升高再降低。

2.2.2 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪體長(zhǎng)的影響

蝌蚪體長(zhǎng)的減小情況與體重相似，如圖1(d)—(f)所示，最高濃度下的體長(zhǎng)減少值最少。低濃度的蝌蚪體長(zhǎng)減小值與對(duì)照組很相近。聯(lián)合濃度組低濃度蝌蚪的體長(zhǎng)減小值為0.31 cm高于單一低濃度組TCS的減小值0.29 cm和SDBS的減小值0.3 cm。聯(lián)合組中濃度蝌蚪的體長(zhǎng)減小值0.38 cm高于單一中濃度組TCS的減小值0.36 cm和SDBS的減小值0.28 cm。聯(lián)合組高濃度的體長(zhǎng)減少值0.29 cm低于單一高濃度組TCS的減小值0.28 cm和SDBS的減小值0.2 cm。以上結(jié)果說(shuō)明聯(lián)合組的體重減少值大于單一組體重減少值，且隨著濃度的增加蝌蚪體重的減少值先增高再降低。

圖1 污染物對(duì)蝌蚪體重體長(zhǎng)的影響

2.2.3 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪發(fā)育時(shí)期的影響

挑選處于36期的蝌蚪進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)15 d培養(yǎng)后觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組中的蝌蚪處于42—43期，43期較多。TCS濃度組中0.06 mg/L的蝌蚪基本處于42期，0.18 mg/L處于41—42期，41期較多，0.54 mg/L基本處于40期。SDBS濃度組中的60 mg/L基本處于42期，180 mg/L基本處于41期，540 mg/L基本處于40期。TCS聯(lián)合SDBS濃度組中的0.06 mg/L+60 mg/L基本處于42期，0.18 mg/L+180 mg/L基本處于40—41期，0.54 mg/L+540 mg/L處于38—39期，39期較多。通過(guò)對(duì)比分析，低濃度下TCS與SDBS的蝌蚪發(fā)育時(shí)期基本一致，聯(lián)合組中的蝌蚪明顯較TCS與SDBS的蝌蚪發(fā)育緩慢，隨著污染物濃度的升高對(duì)蝌蚪發(fā)育的抑制作用也逐漸加強(qiáng)。

2.3 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪紅細(xì)胞核的影響

2.3.1 微核和異常核的主要類型

用油鏡觀察發(fā)現(xiàn)，在染毒處理以后，蝌蚪的紅細(xì)胞出現(xiàn)了各種類型的異常核以及微核。正常的成熟紅細(xì)胞核為橢圓形，位于細(xì)胞中央。幼紅細(xì)胞核為圓形位于細(xì)胞中央，經(jīng)甲醇固定Giemsa染液染色后細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)顏色很淺。微核一般游離在主核周圍，體積比主核小很多，顏色比主核淺。異常核主要有雙核、核空泡、核縊縮等多種類型(見(jiàn)圖2)。

圖2 正常紅細(xì)胞和各類異常核細(xì)胞

2.3.2 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪紅細(xì)胞核異常率的影響

蝌蚪在不同污染物染毒15 d后，隨著污染物濃度的增加，蝌蚪核異常率逐漸提高，并且聯(lián)合組的核異常率高于單一污染物的核異常率。不同染毒組的蝌蚪紅細(xì)胞核異常率見(jiàn)表2。經(jīng)單因素多重比較，與對(duì)照組相比，TCS染毒組0.18、0.54 mg/L對(duì)蝌蚪核異常率有極顯著影響(P<0.01)，0.06 mg/L組存在顯著差異(P<0.05)。0.06 mg/L與0.18 mg/L組存在顯著差異(P<0.05)，其余不同濃度對(duì)蝌蚪核異常率兩兩之間存在極顯著影響(P<0.01)。

SDBS組中，對(duì)照組與180 mg/L組相比存在顯著差異(P<0.05)，與540 mg/L組相比存在極顯著影響(P<0.01)。除了對(duì)照與60 mg/L、60 mg/L與180 mg/L組，其余不同濃度對(duì)蝌蚪核異常率兩兩之間多數(shù)存在極顯著影響(P<0.01)，有些存在顯著差異(P<0.05)。

不同濃度的TCS聯(lián)合SDBS對(duì)蝌蚪紅細(xì)胞核異常率兩兩之間除了對(duì)照組和0.06 mg/L+60 mg/L、0.06 mg/L+60 mg/L和0.18 mg/L+180 mg/L外，都存在極顯著差異(P<0.01)或顯著差異(P<0.05)。

表2 污染物對(duì)蝌蚪紅細(xì)胞核異常率

3 討論與分析

3.1 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪的毒性作用

由TCS和SDBS的急性毒性實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，高效廣譜抗菌劑TCS和陰離子表面活性劑SDBS都對(duì)蝌蚪有著明顯的毒性作用。TCS對(duì)蝌蚪96 h的LC50為0.445 mg/L，SDBS的96 hLC50為543 mg/L， TCS對(duì)蝌蚪的毒性比SDBS強(qiáng)1000多倍。造成這種毒性差異可能有多種因素。如Boehmer等[23]發(fā)現(xiàn)TCS的親水性低，親脂性強(qiáng)，容易融解于細(xì)胞的脂肪、脂質(zhì)中，并且TCS在環(huán)境之中較難降解，因此易于在生物體內(nèi)富集。宋書(shū)娟等[24]研究表明TCS會(huì)干擾兩棲動(dòng)物的甲狀腺功能，進(jìn)而影響其發(fā)育變態(tài)。Kristian等[25]認(rèn)為，SDBS可以使動(dòng)物細(xì)胞膜的通透性增加，從而引起動(dòng)物死亡。程呂柏等[26]認(rèn)為SDBS 可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，從而使細(xì)胞膜的通透性改變。所以綜合來(lái)說(shuō)TCS對(duì)動(dòng)物的毒性是由于TCS的親脂性和不易降解性導(dǎo)致很容易被吸收和積累，干擾蝌蚪內(nèi)分泌和新陳代謝從而引起動(dòng)物死亡。SDBS對(duì)動(dòng)物的毒性主要是SDBS使動(dòng)物蛋白質(zhì)降解，細(xì)胞膜通透性增加引起死亡。正因?yàn)門CS和SDBS不同的毒性作用造成它們對(duì)蝌蚪的毒性差異。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)中的數(shù)據(jù)，我們得到SDBS最大容許濃度為5.44 mg/L，安全濃度為54.40 mg/L。TCS最大容許濃度為0.004 5 mg/L，安全濃度為0.045 mg/L。以期為我國(guó)農(nóng)業(yè)灌溉用水等基本控制指標(biāo)的篩選及定值提供依據(jù)。

3.2 TCS和SDBS對(duì)蝌蚪發(fā)育的影響

實(shí)驗(yàn)中污染物對(duì)蝌蚪的生長(zhǎng)表現(xiàn)出一定的抑制作用，蝌蚪的體重體長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)前相比都在減少。并且隨著污染物濃度的增加，蝌蚪的體重體長(zhǎng)減少值先增加后減少，對(duì)照組的蝌蚪體重體長(zhǎng)減少值與低濃度下的蝌蚪體重體長(zhǎng)減少值很接近，高濃度下的體重體長(zhǎng)減少值最小。

同時(shí)發(fā)現(xiàn)蝌蚪在染毒15 d后，對(duì)照組中的蝌蚪基本處于42—43期，43期較多，而0.54 mg/L的TCS與540 mg/L的SDBS基本處于40期，0.54 mg/L+540 mg/L的TCS聯(lián)合SDBS處于38—39期，39期較多。這說(shuō)明TCS和SDBS都對(duì)蝌蚪的發(fā)育有著明顯的抑制作用，并且聯(lián)合毒性作用大于單一毒性作用。

眾所周知，蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育要經(jīng)歷變態(tài)，在蝌蚪變態(tài)過(guò)程中，26—40期處于發(fā)育期，主要表現(xiàn)為蝌蚪的生長(zhǎng)，體重增加，體長(zhǎng)延長(zhǎng)；40—46處于變態(tài)發(fā)育期，其中的42—46處于變態(tài)期，變態(tài)期的蝌蚪即處于42期的蝌蚪開(kāi)始前肢伸出，尾巴變短，體重減輕，所以發(fā)育處于42期以上的蝌蚪，其體重和體長(zhǎng)卻小于處于39期以及至41期的蝌蚪。

圖3 蝌蚪39期和43期的對(duì)比

蝌蚪體重體長(zhǎng)減少值隨著污染物濃度的增加逐漸增大，但實(shí)驗(yàn)中蝌蚪的體重和體長(zhǎng)減少值先增加后減少。這是因?yàn)槭前l(fā)育時(shí)期的影響，隨著污染物濃度的增加，蝌蚪的發(fā)育時(shí)期大致處于43至40—39期，而處于40—39期的蝌蚪體重與體長(zhǎng)明顯大于43期的蝌蚪。這也就是為什么隨著污染物濃度的增加，蝌蚪的體重和體長(zhǎng)減少值先增加后減少。如圖3所示，39期的蝌蚪體重體長(zhǎng)明顯大于發(fā)育較快處于43期的蝌蚪。

3.3 污染物對(duì)蝌蚪紅細(xì)胞核的影響

細(xì)胞受外界影響后形成微核和異常核，可以根據(jù)動(dòng)物紅細(xì)胞核異常的數(shù)量多少來(lái)判斷生物的受損程度。通常認(rèn)為，核異常包括異常核以及微核，微核由有絲分裂的細(xì)胞在細(xì)胞分裂后期細(xì)胞內(nèi)的部分染色體斷裂所形成，其裂片或整條染色體沒(méi)有隨著紡綞絲進(jìn)入子細(xì)胞的細(xì)胞核中，而是停留在細(xì)胞質(zhì)中，形成單獨(dú)的一微小核，此小核的體積遠(yuǎn)小于細(xì)胞核，稱為微核。微核可進(jìn)一步分為，染色體斷裂劑打斷染色體產(chǎn)生的小微核，紡錘體毒劑打斷紡錘絲造成的一條或一組染色體滯后形成的大微核[27]。也有人認(rèn)為微核由核外突形成[28]，在本次實(shí)驗(yàn)中也觀察到核外突、核不均等縊縮現(xiàn)象，所以推測(cè)這有可能是蝌蚪微核形成的過(guò)程。因此SDBS可能是染色體斷裂劑的一種，如形成小微核以及大微核。Giudice等[29]發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中會(huì)激活降解核酸的酶，從而把核酸切成小碎片，而TCS也有這種性質(zhì)。

本次實(shí)驗(yàn)中觀察到聯(lián)合污染物組中的核異常種類多于單一污染物組。因此，TCS可能是使核酸結(jié)構(gòu)出現(xiàn)多種損傷，SDBS可能是使染色體斷裂。所以當(dāng)蝌蚪接觸到TCS、SDBS這種有毒物質(zhì)時(shí)，蝌蚪的正常細(xì)胞分裂過(guò)程將受到影響從而產(chǎn)生異常核、微核。

根據(jù)相加指數(shù)法算出S值為1.81，代入公式計(jì)算出AI的值為0.81>0，所以聯(lián)合毒性作用為協(xié)同作用。

綜上所述，TCS和SDBS在高濃度下對(duì)蝌蚪有急性致死作用，在低濃度下對(duì)蝌蚪也具有潛在的危害，隨著濃度的增加直接影響蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育。在TCS聯(lián)合SDBS作用下，由于SDBS可以使動(dòng)物細(xì)胞膜的通透性增加，這就會(huì)使得細(xì)胞對(duì)TCS的吸收量增加，對(duì)蝌蚪的毒性作用更加明顯，SDBS與TCS表現(xiàn)出協(xié)同作用。2006年，楊承信等[11]對(duì)LAS的安全評(píng)估工作中檢測(cè)到地表水中的含量低于50 μg/L，密西西比河測(cè)出的含量低于28 μg/L，河床沉積物中低于1 mg/kg，地表水和沉積物中的SDBS處于本實(shí)驗(yàn)所得出的安全容許溶度5.44 mg/L內(nèi)。2009年，趙建亮等[5]對(duì)中國(guó)五大水系中TCS污染進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)水體中的質(zhì)量濃度為0.48 μg/L，底泥中的質(zhì)量濃度為2.7 μg/L，均處于本實(shí)驗(yàn)所得出的安全容許溶度4.5 μg/L內(nèi)。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，人民生活水平提高，TCS和SDBS使用量逐年增加[6，10]，大量未經(jīng)處理的生活污水排入環(huán)境中，導(dǎo)致水體環(huán)境中TCS和SDBS的含量增加，并且TCS和SDBS對(duì)蝌蚪的毒性作用表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。因此應(yīng)加強(qiáng)TCS和SDBS對(duì)水產(chǎn)品及農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全方面影響研究，以及生產(chǎn)污水和生活污水的排放處理方面的風(fēng)險(xiǎn)管理，以便合理科學(xué)的使用TCS和SDBS。