郭 靜，周 凱，蔡冬青

（1.青海省心腦血管病專(zhuān)科醫(yī)院門(mén)診辦公室，青海 西寧 810000；2.寧波立華制藥有限公司鎮(zhèn)海分公司，浙江 寧波 315174）

大豆中含有天然的活性物質(zhì)—大豆異黃酮，其含量約為0.2%～0.4%，是大豆生成過(guò)程中的次級(jí)代謝產(chǎn)物，在自然界以游離型和糖苷型兩種形式存在，具有類(lèi)雌激素樣作用。大豆異黃酮能治療和預(yù)防婦女更年期綜合征，對(duì)于改善更年期婦女出現(xiàn)的潮熱、盜汗、失眠、抑郁等有顯著效果[1-2]。此外，大豆異黃酮還具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，在免疫、抑制腫瘤等方面有重要作用[3]。本文研究大豆異黃酮在體液免疫調(diào)節(jié)方面的作用，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD雌性大鼠80只，160～180 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)一周。

1.2 儀器

全自動(dòng)生化分析儀，離心機(jī)，電子天平，酶標(biāo)儀，細(xì)胞培養(yǎng)箱等。

1.3 受試物

大豆異黃酮軟膠囊（0.25 g/粒，推薦量每日2粒，大豆異黃酮含量22 mg/粒）。

1.4 給藥方式

根據(jù)人體推薦量，按5倍、10倍和30倍設(shè)計(jì)，將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組分為對(duì)照組、低劑量組（25 mg/kg）、中劑量組（50 mg/kg）、高劑量組（100 mg/kg），以玉米油為溶劑配制相應(yīng)濃度的受試物藥液，對(duì)照組灌胃玉米油，灌胃體積均為10 ml/kg。連續(xù)灌胃15 d。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 血清溶血素測(cè)定（血凝法）

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠摘眼球取血，置于離心管內(nèi)，放置1 h，剝離，離心10 min，將生理鹽水稀釋血清，倍比稀釋?zhuān)糠菹♂?2孔。將不同濃度的血清置于血凝板中，100 μL/孔，再加入0.5% SRBC（綿羊紅細(xì)胞）懸液100 μL，混勻，37℃濕盒內(nèi)放置3 h。記錄每孔凝結(jié)程度，計(jì)算抗體積數(shù)。

1.5.2 抗體生成細(xì)胞檢測(cè)（Jerne改良玻片法）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果后處死大鼠，取脾臟，攪碎過(guò)200目篩，Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培養(yǎng)成5×106個(gè)/mL細(xì)胞懸液備用。在含有0.5 mL表層培養(yǎng)基的小試管中加入50 μL10%SRBC和20 μL已經(jīng)配好的脾細(xì)胞懸液?；靹蚝?，掛膜玻片上，凝固后培養(yǎng)1.5 h，在玻片架凹槽內(nèi)加入SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體，繼續(xù)培養(yǎng)1.5 h后，計(jì)算溶血抗體生成細(xì)胞數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間均數(shù)比較使用方差分析，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大豆異黃酮對(duì)大鼠體重的影響

給予大豆異黃酮15 d后，各組之間體重?zé)o明顯差異（P＞0.05），說(shuō)明大豆異黃酮對(duì)大鼠體重?zé)o明顯影響。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體重變化（±s）

表1 各組大鼠體重變化（±s）

組別（n=10） 實(shí)驗(yàn)前（g） 實(shí)驗(yàn)后（g）對(duì)照組 169.23±12.54 268.32±20.21低劑量組 171.25±11.06 269.31±19.68中劑量組 169.81±10.33 271.48±22.16高劑量組 170.72±11.43 272.15±18.57

2.2 大豆異黃酮對(duì)大鼠血清溶血素及抗體生成細(xì)胞的影響

給予大豆異黃酮15 d后，中劑量組和高劑量組抗體積數(shù)明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.05）；三個(gè)劑量組的抗體生成數(shù)明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明大豆異黃酮對(duì)大鼠體液免疫調(diào)節(jié)有提高作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大鼠血清溶血素測(cè)定和抗體生成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

表2 大鼠血清溶血素測(cè)定和抗體生成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05

組別（n=10） 抗體積數(shù) 抗體生成細(xì)胞數(shù)/106（脾細(xì)胞）對(duì)照組 189.36±22.82 267.31±25.65低劑量組 211.43±21.04 319.76±21.98*中劑量組 229.21±18.89* 326.76±30.57*高劑量組 235.56±21.78* 338.49±22.31*

3 討 論

外來(lái)抗原刺激B細(xì)胞活化，B細(xì)胞在輔助性T細(xì)胞（Th細(xì)胞）的輔助下進(jìn)一步活化和分化產(chǎn)生抗體，是免疫系統(tǒng)參與體液免疫應(yīng)答的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[4]。小鼠經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免（SRBC）疫后，可刺激T細(xì)胞的活化增殖，產(chǎn)生SRBC特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答?；罨蟮腡細(xì)胞在細(xì)胞因子作用下，分化為效應(yīng)細(xì)胞，產(chǎn)生協(xié)同刺激信號(hào)，繼而激活B細(xì)胞進(jìn)一步分化，從而產(chǎn)生抗體。經(jīng)SRBC免疫后的小鼠可以產(chǎn)生溶血素，即抗SRBC抗體，這種抗體與補(bǔ)體一起作用可引起小鼠溶血反應(yīng)，釋放血紅蛋白，故小鼠血液離心、稀釋測(cè)定上清液可間接判斷出血清中抗體含量[5]。

本文研究結(jié)果顯示，中劑量組和高劑量組抗體積數(shù)明顯高于對(duì)照組，三個(gè)劑量組的抗體生成數(shù)明顯高于對(duì)照組，均有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明大豆異黃酮可通過(guò)刺激B細(xì)胞分化增殖來(lái)提高抗體水平，從而增強(qiáng)大鼠體液免疫功能。