辛思培 ，蔣 蔚 ，李 健 ，張 強(qiáng) ，孫衛(wèi)東 ，王 權(quán)

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241；2.中華人民共和國(guó)上海海關(guān)，上海200002；3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，南京210095）

隨著生活水平的提高，我國(guó)現(xiàn)有肉牛的品質(zhì)和數(shù)量不足以滿足人們對(duì)優(yōu)質(zhì)肉品的需求，國(guó)內(nèi)供給側(cè)改革舉措的實(shí)施也正促進(jìn)肉品實(shí)現(xiàn)“一品多源”的目標(biāo)，因此我國(guó)與烏拉圭簽署了一系列協(xié)定，以期從烏拉圭進(jìn)口優(yōu)質(zhì)肉牛。然而在進(jìn)口貿(mào)易過(guò)程中，活體動(dòng)物很有可能成為外來(lái)疫病的攜帶者，一旦引入外來(lái)疫病將會(huì)對(duì)國(guó)內(nèi)動(dòng)物健康、食品安全、公共衛(wèi)生等多方面造成影響，所以實(shí)施動(dòng)物檢疫是不可或缺的流程[1]。根據(jù)世界貿(mào)易組織WTO《動(dòng)植物檢疫及衛(wèi)生措施協(xié)議》和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織OIE《國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生法典》要求，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是國(guó)際貿(mào)易中動(dòng)物檢疫必不可少的環(huán)節(jié)[2]，正確的評(píng)估可以篩選出潛在的疫病，分析各個(gè)疫病各個(gè)環(huán)節(jié)的風(fēng)險(xiǎn)，為制定貿(mào)易策略、優(yōu)化檢驗(yàn)檢疫措施、建立疫病防控體系等提供有利參考。本研究參考OIE制定的國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)分析方法，從釋放、暴露和后果評(píng)估三個(gè)方面對(duì)烏拉圭輸華牛的歷年檢測(cè)結(jié)果中較為高發(fā)的兩種疫?。ㄅ５胤搅餍行园籽BL和牛病毒性腹瀉BVD）進(jìn)行了定性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

1 材料與方法

根據(jù)貿(mào)易議定書(shū)要求，烏拉圭輸華肉牛需要在農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行初次檢疫，合格牛經(jīng)官方獸醫(yī)逐頭臨床檢查后，進(jìn)入境外隔離場(chǎng)進(jìn)行至少30天的隔離檢疫剔除疫病陽(yáng)性牛，并持有我國(guó)簽發(fā)的《進(jìn)境動(dòng)植物檢疫許可證》按照指定的路線，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)由指定口岸入境，進(jìn)入我國(guó)境內(nèi)隔離場(chǎng)隔離檢疫。根據(jù)以上的進(jìn)口流程，參考OIE進(jìn)口風(fēng)險(xiǎn)分析原則，分析識(shí)別我國(guó)自烏拉圭進(jìn)口肉牛過(guò)程中可能引入疫病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，構(gòu)建風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程圖（圖1），再分別進(jìn)行釋放評(píng)估、暴露評(píng)估和后果評(píng)估以得出最終定性結(jié)果。

1.1 危害確認(rèn)根據(jù)2014-2018年烏拉圭輸華牛檢測(cè)數(shù)統(tǒng)計(jì)分析疫病檢出種類，并對(duì)各疫病傳播過(guò)程中的危害因素進(jìn)行確認(rèn)。

1.2 釋放評(píng)估疫病的釋放建立在進(jìn)口肉牛攜帶某疫病病原，且在農(nóng)場(chǎng)隔離、境外隔離場(chǎng)、境內(nèi)隔離場(chǎng)檢疫環(huán)節(jié)發(fā)生漏檢基礎(chǔ)上。針對(duì)以上因素分別評(píng)估其可能性，并從佐證材料豐富程度對(duì)其不確定度進(jìn)行描述，分析得出釋放風(fēng)險(xiǎn)。

圖1 烏拉圭輸華肉牛風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程圖Fig.1 Flow chart of risk assessment for cattle imported from Uruguay

1.3 暴露評(píng)估從我國(guó)健康易感動(dòng)物比例、未接種疫苗/無(wú)免疫保護(hù)可能性、接觸病原可能性3個(gè)方面評(píng)估其可能性和不確定度，分析得出暴露風(fēng)險(xiǎn)。

1.4 事件發(fā)生可能性及不確定度分類參照OIE《動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品進(jìn)口風(fēng)險(xiǎn)分析手冊(cè)》及SNT2486-2010標(biāo)準(zhǔn)，將每種事件發(fā)生的可能性劃分為由“可忽略”至“高”7個(gè)程度（表1），將不確定度劃分為低、中、高3個(gè)級(jí)別（表2）。

表1 風(fēng)險(xiǎn)事件定性描述術(shù)語(yǔ)表Table 1 Glossary of qualitative descriptions of risk events

表2 不確定度描述術(shù)語(yǔ)表Table 2 Glossary of uncertainty descriptions

1.5 后果評(píng)估對(duì)進(jìn)口烏拉圭肉牛攜帶某疫病入境后帶來(lái)的直接后果及間接后果用4種程度進(jìn)行定義（表3），對(duì)其可能影響的范圍用4種水平進(jìn)行描述（表4），綜合各個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素的后果嚴(yán)重程度及影響范圍得出風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)（表5），參照SNT2486-2010標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)得出后果評(píng)估結(jié)果。

表3 后果嚴(yán)重程度術(shù)語(yǔ)表Table 3 Glossary of the effect severity

表4 后果影響范圍術(shù)語(yǔ)表Table 4 Glossary of scope of effect

1.6 最終定性結(jié)果首先對(duì)釋放風(fēng)險(xiǎn)和暴露風(fēng)險(xiǎn)中各風(fēng)險(xiǎn)事件的可能性進(jìn)行分析和定性描述，依據(jù)風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則（表6）合并各事件可能性，分別得出進(jìn)口烏拉圭肉牛攜帶某疫病傳入我國(guó)的釋放和暴露風(fēng)險(xiǎn)。然后按照烏拉圭輸華肉牛攜帶疫病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程圖逐級(jí)合并風(fēng)險(xiǎn)，即先綜合釋放和暴露的風(fēng)險(xiǎn)，再結(jié)合后果評(píng)估結(jié)果，綜合描述得出烏拉圭肉牛攜帶某疫病進(jìn)入我國(guó)的最終定性評(píng)估結(jié)果。

表5 后果風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)評(píng)估表Table 5 Risk level assessment form for effect

2 結(jié)果

2.1 危害確認(rèn)根據(jù)議定書(shū)要求，烏拉圭輸華牛需對(duì)口蹄疫、布桿菌病、結(jié)核?。╰uberculosis，TB）、副結(jié)核?。↗ohne's disease，JD）、牛地方流行性白血病（enzootic bovine leukosis，EBL）、牛病毒性腹瀉（bovine viral diarrhoea，BVD）等疫病進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)近年來(lái)烏拉圭輸華牛檢測(cè)數(shù)據(jù)可知（圖2），牛地方流行性白血病是檢出數(shù)最多的疫病，牛病毒性腹瀉次之，副結(jié)核病檢出較少，偶有布氏桿菌病及結(jié)核病檢出。因此，本研究選取檢出數(shù)較多的EBL、BVD進(jìn)行進(jìn)一步風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

牛地方流行性白血病的病原是牛白血病病毒（Bovine leukemiavirus，BLV）。該病毒是C型致瘤病毒群、反轉(zhuǎn)錄病毒科的一類單股RNA病毒[3]，自然情況下僅能感染牛[4]，目前根據(jù)gp51基因分為10個(gè)基因型[5-8]。感染BLV的牛大多數(shù)并不表現(xiàn)明顯臨床癥狀，僅有30%會(huì)發(fā)生持續(xù)性淋巴增生，5%會(huì)發(fā)展為惡性淋巴瘤[9]，年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)等因素也是導(dǎo)致感染牛發(fā)病的重要誘因。

表6 風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則表Table 6 Description of the possibility of risk events merge rules

牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）是引起牛病毒性腹瀉/黏膜病的病原。BVDV是黃病毒科瘟病毒屬的單股正鏈RNA病毒[10-11]，瘟病毒的命名是根據(jù)其最初發(fā)現(xiàn)的宿主來(lái)確定的，但在多種家畜和野生動(dòng)物中均發(fā)現(xiàn)并分離到BVDV[12]。BVDV可根據(jù)5'UTR序列分為Ⅰ型和Ⅱ型兩種基因型[13]，目前已發(fā)現(xiàn)1a-1u及2a-2d共25個(gè)亞型[14]，根據(jù)能否產(chǎn)生細(xì)胞病變將其分為非致細(xì)胞病變型NCP和致細(xì)胞病變型CP兩種生物型[15]。

圖2 近年烏拉圭輸華牛檢疫情況Fig.2 Quarantine situation of cattle imported from Uruguay to China in recent years

2.2 釋放評(píng)估

2.2.1 牛地方流行性白血病的釋放評(píng)估

2.2.1.1 烏拉圭輸華肉牛攜帶BLV可能性 BLV屬于反轉(zhuǎn)錄病毒，易感動(dòng)物感染后，BLV將整合到CDS+B細(xì)胞的DNA中形成前病毒，造成感染動(dòng)物終生帶毒，因此動(dòng)物血清中抗體呈陽(yáng)性即可說(shuō)明該動(dòng)物攜帶有BLV。本研究收集了有關(guān)烏拉圭輸華牛境內(nèi)外隔離檢疫的數(shù)據(jù)，李志榮[16]在一批烏拉圭進(jìn)口奶牛的境外預(yù)檢中，發(fā)現(xiàn)該批牛在農(nóng)場(chǎng)檢疫及境外隔離場(chǎng)檢疫時(shí)BLV抗體陽(yáng)性率為18.28%；據(jù)相關(guān)資料，我國(guó)近年來(lái)共計(jì)9個(gè)批次（A-I）烏拉圭輸華牛檢疫結(jié)果顯示（圖3），其中一批牛在農(nóng)場(chǎng)、境內(nèi)外隔離場(chǎng)BLV的累積檢出率可達(dá)30.75%。

圖3 9個(gè)批次烏拉圭輸華牛BLV檢疫結(jié)果Fig.3 Detection results of BLV about nine batches of Uruguayan cattle exported to China

上述BLV的累積檢出率并不能完全反映當(dāng)?shù)貙?shí)際流行率，因?yàn)閮蓢?guó)議定書(shū)條款對(duì)輸華牛農(nóng)場(chǎng)的動(dòng)物衛(wèi)生條件有相對(duì)較高的要求，當(dāng)?shù)仄胀ㄞr(nóng)場(chǎng)的BLV流行情況可能更為嚴(yán)峻。有報(bào)道顯示，烏拉圭周邊國(guó)家的牛BLV個(gè)體陽(yáng)性率約為33%～50%，群體陽(yáng)性率可達(dá)84%[17]，阿根廷一項(xiàng)調(diào)查對(duì)363個(gè)牛群的10 000份以上的血液樣本進(jìn)行了檢測(cè)，個(gè)體陽(yáng)性率達(dá)到32.85%[18]。烏拉圭與阿根廷之間僅有烏拉圭河分隔，與巴西幾乎不存在地理分隔與自然屏障，也不存在OIE承認(rèn)的非疫區(qū)，烏拉圭牛群中BLV的實(shí)際流行率較檢出結(jié)果很有可能高于32.85%，因此據(jù)表1認(rèn)定烏拉圭輸華牛感染BLV可能性為“輕微”，不確定性為“低”。

2.2.1.2 BLV感染牛發(fā)生漏檢可能性 根據(jù)議定書(shū)規(guī)定的檢疫流程，烏拉圭輸華牛在農(nóng)場(chǎng)檢疫及境外隔離檢疫期間，針對(duì)該病需要進(jìn)行AGID瓊擴(kuò)試驗(yàn)或ELISA檢測(cè)，采用的試劑盒由IDEXX公司或Synbiotics公司生產(chǎn)，均具有ISO9001:2000認(rèn)證且符合歐盟ECC認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)。趙祥平[19]、王作佳等[20]重復(fù)驗(yàn)證了ELISA、AGID兩種方法用于檢測(cè)3998頭烏拉圭進(jìn)口奶牛BLV感染情況，結(jié)果顯示，兩種方法在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著，而且ELISA方法檢出率略高。有報(bào)道顯示，ELISA方法的敏感性和特異性可達(dá)97.2%和97.5%[18]。除檢測(cè)方法的敏感性影響可能產(chǎn)生漏檢，動(dòng)物的感染階段和個(gè)體發(fā)育水平也會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾，BLV感染后期的體液免疫反應(yīng)降低導(dǎo)致血清中抗體水平下降[21-22]，ELISA檢測(cè)可能會(huì)發(fā)生假陰性；而利用gp51的AGID試驗(yàn)由于靈敏度低于ELISA，在對(duì)早期感染樣本或者分娩前后的母牛樣本檢測(cè)時(shí)，由于血清抗體水平下降也可能出現(xiàn)假陰性[23]，趙祥平等[19]也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

李志榮[16]報(bào)道，經(jīng)農(nóng)場(chǎng)檢疫后的烏拉圭牛在后續(xù)境外隔離場(chǎng)中BLV仍然有2.18%的檢出率；本研究收集數(shù)據(jù)顯示，9個(gè)批次烏拉圭輸華牛經(jīng)過(guò)農(nóng)場(chǎng)檢疫后在后續(xù)境外隔離及境內(nèi)隔離檢疫均有陽(yáng)性樣本檢出，比例由0%～5.06%不等，可證實(shí)有部分感染牛在檢疫環(huán)節(jié)發(fā)生漏檢。據(jù)表1可認(rèn)為烏拉圭感染BLV的牛發(fā)生漏檢的綜合可能性為“低”，不確定性為“中”。

若風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的各風(fēng)險(xiǎn)事件均為非獨(dú)立事件，組合后發(fā)生的可能性會(huì)降低（表6），烏拉圭輸華牛攜帶BLV的可能性、發(fā)生漏檢的可能性分別為“輕微”、“低”，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則，可得出牛地方流行性白血病的釋放風(fēng)險(xiǎn)為“很低”。

2.2.2 牛病毒性腹瀉釋放評(píng)估

2.2.2.1 烏拉圭輸華肉牛攜帶牛病毒性腹瀉病毒可能性 據(jù)報(bào)道，烏拉圭約69%的肉牛群體感染過(guò)BVDV[24]，然而抗體陽(yáng)性率并不能全面反映牛群中帶毒牛的概率，因?yàn)锽VDV主要的攜帶者和傳染源是發(fā)生持續(xù)性感染（persistent infection，PI）的牛。有研究認(rèn)為，在受感染的牛群中PI牛的數(shù)量約占0.5～2%[25]。雖然疫苗接種在一定程度上可以降低PI牛的出生，但烏拉圭僅有3%肉牛群體定期進(jìn)行免疫[24]，一項(xiàng)對(duì)烏拉圭3個(gè)省份牛血樣進(jìn)行的抗原捕捉ELISA（AC-ELISA）試驗(yàn)顯示，未接種BVDV疫苗的?？乖?yáng)性率可達(dá)4.1%[26]。竇樹(shù)龍等[27]報(bào)道，2017年烏拉圭輸華牛BVDV檢出率為1.67%；李志榮[16]報(bào)道，在烏拉圭境外預(yù)檢中農(nóng)場(chǎng)及境外隔離場(chǎng)BVDV檢出率分別為0.54%和0.05%；2014-2018年，烏拉圭輸華牛BVDV檢出率為0.62%～2.03%。綜上，烏拉圭輸華牛BVDV陽(yáng)性率小于5%，攜帶BVDV可能性為“很低”。

2.2.2.2 帶毒牛發(fā)生漏檢可能性 根據(jù)議定書(shū)規(guī)定的檢疫流程，烏拉圭輸華牛在農(nóng)場(chǎng)檢疫及境外隔離檢疫期間，需要進(jìn)行病毒分離試驗(yàn)或用抗原捕捉ELISA（antigen capture enzyme linked immunosorbent assay，AC-ELISA）進(jìn)行檢測(cè)，在進(jìn)入隔離場(chǎng)后7 d內(nèi)再進(jìn)行一次AC-ELISA試驗(yàn)（IDEXX）[16,28]。病毒分離試驗(yàn)是檢測(cè)BVDV的金標(biāo)準(zhǔn)[29]，但無(wú)法鑒別發(fā)生持續(xù)性感染或處于急性感染期的牛，而且犢牛血液中游離病毒受母源抗體影響降低也會(huì)干擾檢測(cè)[30]。為了彌補(bǔ)這一缺陷，通常采用基于捕獲病毒復(fù)制過(guò)程中受感染細(xì)胞分泌的gp48蛋白的ACELISA，該方法可以有效檢出PI牛[31]。有研究報(bào)道，應(yīng)用Svanovir公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒，其敏感性和特異性分別可達(dá)到97.9%和99.7%[24]；Hill等[32]使用AC-ELISA對(duì)牛血清及耳部皮膚組織進(jìn)行BVDV檢測(cè)，結(jié)果與PCR檢測(cè)結(jié)果完全符合；Bhuyan[33]優(yōu)化了AC-ELISA條件，不僅降低了檢測(cè)限，同時(shí)與TaqMan qRT-PCR和傳統(tǒng)RT-PCR的檢測(cè)結(jié)果保持了高度一致；Kramps[34]利用針對(duì)豬瘟病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3的單克隆抗體構(gòu)建競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)BVDV，與病毒中和試驗(yàn)結(jié)果相比，其敏感性和特異性達(dá)99%和98%。丹麥等多個(gè)國(guó)家也將AC-ELISA方法應(yīng)用于監(jiān)測(cè)凈化BVDV計(jì)劃中。以上報(bào)道說(shuō)明，ACELISA可以與分子檢測(cè)方法達(dá)到相同的可靠性，然而，由于病毒感染的階段不同、動(dòng)物的個(gè)體差異或人員操作失誤，漏檢仍有可能發(fā)生。據(jù)本研究收集的2014-2018年我國(guó)從烏拉圭進(jìn)口牛檢疫數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，多個(gè)批次的烏拉圭輸華牛在農(nóng)場(chǎng)隔離檢疫后，在境外隔離場(chǎng)仍有0.05%～0.69%的BVDV檢出率，這些批次牛在境內(nèi)BVDV檢出率最高可達(dá)0.22%。綜上，可以認(rèn)為感染BVD的烏拉圭肉牛發(fā)生漏檢的概率為“很低”，不確定度為“低”。

根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則（表6），由烏拉圭肉牛攜帶BVDV可能性為“很低”和帶毒牛發(fā)生漏檢的概率為“很低”，得出BVD的釋放風(fēng)險(xiǎn)為“可忽略”。

2.3 暴露評(píng)估

2.3.1 牛地方流行性白血病的暴露評(píng)估

2.3.1.1 我國(guó)健康易感動(dòng)物比例 1978年，我國(guó)于新疆首次發(fā)現(xiàn)BLV感染病例[35]，根據(jù)多項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查顯示，BLV在我國(guó)江蘇、上海、重慶等多個(gè)省市自治區(qū)均有分布，李凱航等[36]調(diào)查了2007-2009年上海市規(guī)?；?chǎng)的BLV陽(yáng)性率為11.3%～32%；楊澤林等[37]報(bào)道了重慶市11個(gè)區(qū)縣，BLV總體陽(yáng)性率達(dá)11.2%；陳小麗[38]對(duì)福建7個(gè)規(guī)?；?chǎng)和14個(gè)散養(yǎng)農(nóng)戶的牛群進(jìn)行了檢測(cè)，BLV陽(yáng)性率達(dá)到18.1%；我國(guó)牦牛的BLV分子流行病學(xué)調(diào)查顯示，甘肅天?？h和甘南藏族自治州的牦牛BLV陽(yáng)性率分別為18.93%和19.14%，青海省和四川省牦牛BLV陽(yáng)性率也達(dá)到14.83%和14.94%[39]；2016年，一項(xiàng)調(diào)查檢測(cè)了我國(guó)19個(gè)省份3353份牛血液樣本，結(jié)果顯示，在我國(guó)15個(gè)省份的肉牛場(chǎng)BLV陽(yáng)性率為1.5%，6個(gè)省份的奶牛場(chǎng)BLV陽(yáng)性率為49.1%[40]。綜上，我國(guó)牛群中BLV流行率約為11.2%～49.1%，可認(rèn)為我國(guó)健康易感動(dòng)物的比例為“中”，不確定度為“低”。

2.3.1.2 我國(guó)健康易感動(dòng)物未接種疫苗可能性 該病目前尚無(wú)有效的疫苗可用于預(yù)防接種，澳大利亞、新西蘭等國(guó)家均采用血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)合撲殺陽(yáng)性動(dòng)物來(lái)凈化該病并取得了成功[41-42]。也有很多研究者試圖從持續(xù)感染的細(xì)胞系中提取BLV制備滅活疫苗，盡管有些產(chǎn)生了一定的免疫保護(hù)，但由于保護(hù)性抗體滴度下降過(guò)快或存在潛在的傳播疫病風(fēng)險(xiǎn)，因此還沒(méi)有穩(wěn)定可靠的商品化疫苗上市[43-47]。在新型疫苗的探索過(guò)程中，有研究者使用重組牛痘病毒作為載體的BLV疫苗，雖然能同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中僅能降低人工感染綿羊體內(nèi)前病毒的載量[48]；同樣，DNA疫苗雖然在短時(shí)間能產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，但最終也不能產(chǎn)生可靠的保護(hù)效果[49]。鑒于國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品化的BLV疫苗可供使用，因此可以認(rèn)為我國(guó)健康易感動(dòng)物未接種疫苗的可能性為“高”，不確定度為“低”。

2.3.1.3 我國(guó)易感動(dòng)物接觸該病原的可能性 該病的病原BLV自然狀況下可感染牛（包括瘤牛及水牛）[50]，也可人工感染綿羊[22]、羊駝[51]等動(dòng)物，其傳播方式有垂直傳播和水平傳播，垂直傳播即感染母牛通過(guò)胎盤(pán)、產(chǎn)道或哺乳將該病傳給胎?；驙倥52]。本案例中僅討論烏拉圭進(jìn)口屠宰用牛，所進(jìn)口的牛不作繁殖種用，在臨床檢查時(shí)均已對(duì)妊娠期母牛予以剔除，因此可忽略其垂直傳播帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。而水平傳播途徑主要通過(guò)手術(shù)器械交叉使用[41]、吸血昆蟲(chóng)叮咬[53]或與感染牛分泌物、排泄物接觸[54]感染。一項(xiàng)2013年的調(diào)查表明，盡管日本的牛場(chǎng)已基本避免重復(fù)使用注射針頭和直腸檢查塑料手套等手術(shù)器械[41]，然而同實(shí)驗(yàn)室調(diào)查顯示，日本奶牛和肉牛群中BLV的陽(yáng)性率分別是1980-1982年的報(bào)道的10倍和4倍[55]，可見(jiàn)除手術(shù)器械交叉感染外，其他傳播途徑造成牛群感染BLV更為嚴(yán)重。烏拉圭輸華牛部分用于急宰銷(xiāo)售，幾乎不會(huì)與其他動(dòng)物接觸，我國(guó)也明令禁止向反芻動(dòng)物飼料中添加動(dòng)物源性成分，因此多數(shù)牛不具備與我國(guó)易感動(dòng)物直接接觸的可能。然而有研究發(fā)現(xiàn)，在感染BLV的牛相鄰圈舍飼養(yǎng)的健康牛感染的危險(xiǎn)系數(shù)明顯升高，在間隔4～6個(gè)月的二次檢測(cè)中即可發(fā)現(xiàn)健康牛遭受感染[56]，說(shuō)明無(wú)需直接接觸也會(huì)造成BLV的傳播。本研究認(rèn)為這很有可能是通過(guò)吸血昆蟲(chóng)進(jìn)行傳播。據(jù)報(bào)道，蚊、虻、蜱、廄蠅、角蠅等多種吸血昆蟲(chóng)均可傳播BLV[57]，而我國(guó)蚊[58]、虻[59]、蜱[60]種類豐富、分布廣泛，給BLV的暴露提供了機(jī)械性傳播的蟲(chóng)媒?？紤]到進(jìn)口牛中存在青年牛、架子牛，在后續(xù)的育肥飼養(yǎng)、運(yùn)輸銷(xiāo)售、分群混群等過(guò)程中存在著通過(guò)水平傳播途徑將攜帶的BLV暴露給我國(guó)易感動(dòng)物的可能，因此認(rèn)為烏拉圭輸華牛將BLV暴露給我國(guó)易感動(dòng)物的可能性為“中”，不確定度為“中”。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則（表6），兩次逐級(jí)評(píng)估可得出EBL的暴露風(fēng)險(xiǎn)為“中”（圖4）

2.3.2 牛病毒性腹瀉的暴露評(píng)估

2.3.2.1 我國(guó)健康易感動(dòng)物比例 1983年，我國(guó)首次分離并鑒定了該病的病原BVDV[61]，此后，我國(guó)多個(gè)省市自治區(qū)都有相關(guān)報(bào)道，何小麗等[62]對(duì)寧夏地區(qū)的BVDV流行病學(xué)調(diào)查顯示抗原陽(yáng)性率為0.3%；2018年，勃林格殷格翰公司調(diào)查顯示，我國(guó)46.7%牛場(chǎng)抗原呈陽(yáng)性，其中PI牛的數(shù)量約占2.2%。其他研究也表明我國(guó)牛群體和個(gè)體感染率處于很高的水平。劉澤宇等[63]對(duì)吉林某牛場(chǎng)157份血清樣本進(jìn)行BVDV檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抗原陽(yáng)性率達(dá)到12.1%；張信軍等[64]對(duì)江蘇省5個(gè)市和不同地區(qū)11個(gè)牛場(chǎng)的100份血清樣品進(jìn)行了BVDV抗原和抗體的檢測(cè)，其中有15%的樣本呈現(xiàn)抗原陽(yáng)性而抗體陰性，分析認(rèn)為這些?？赡苁翘幱跈z測(cè)窗口期或PI牛；孫文梅等[65]對(duì)上海市規(guī)模牛場(chǎng)的BVDV監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，2016年和2017年抗原陽(yáng)性率分別為12.7%和16%，呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)；新疆地區(qū)牛抗原陽(yáng)性率甚至高達(dá)39.06%～43%[66-67]。綜上，可以認(rèn)為我國(guó)健康易感BVDV動(dòng)物比例為“中”，不確定度為“低”。

2.3.2.2 我國(guó)健康易感動(dòng)物無(wú)免疫保護(hù)可能性 BVD的預(yù)防可以使用滅活或減毒苗，但無(wú)法區(qū)分野毒感染給血清學(xué)監(jiān)測(cè)帶來(lái)難度[68]?，F(xiàn)今的疫病控制措施對(duì)疫苗的要求已經(jīng)從減輕或預(yù)防BVDV引起的消化道、呼吸道臨床癥狀轉(zhuǎn)變?yōu)轭A(yù)防胎牛受感染形成PI牛，但是研究發(fā)現(xiàn)一些經(jīng)注冊(cè)的疫苗并不能完全有效阻斷胎盤(pán)感染途徑，最高有15%的胎?？赡軣o(wú)法獲得保護(hù)[69-71]。同時(shí)由于BVDV存在兩種生物型及多種基因型和亞型，疫苗的生產(chǎn)廠商只能生產(chǎn)單價(jià)或有限種類的多價(jià)疫苗，而且疫苗對(duì)同源的毒株保護(hù)效力通常都優(yōu)于其他型毒株[72]，因此可能無(wú)法對(duì)其他型毒株提供充足的保護(hù)力。有研究證明，BVDV1aNADL疫苗僅能在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)BVDV2型毒株產(chǎn)生保護(hù)，對(duì)BVDV2型野毒株無(wú)法產(chǎn)生交叉保護(hù)[73]，所以疫苗的選擇和免疫策略需要根據(jù)當(dāng)?shù)谺VDV流行情況和動(dòng)物健康狀況進(jìn)行選擇才能起到良好的保護(hù)作用，處于急性感染期的?？赡軙?huì)產(chǎn)生免疫抑制，此時(shí)進(jìn)行免疫接種可能導(dǎo)致免疫失敗。疫苗的接種率也是評(píng)價(jià)有無(wú)免疫保護(hù)的重要因素，據(jù)統(tǒng)計(jì)，進(jìn)口來(lái)源國(guó)烏拉圭僅有3%肉牛群定期接種[24]，而美國(guó)2004年以來(lái)許多州自發(fā)組織的BVD的控制計(jì)劃中80%的牛接種BVDV滅活或減毒苗，使得動(dòng)物陽(yáng)性率逐步得到控制[74]（USAD2007）。我國(guó)尚未有類似歐洲國(guó)家嚴(yán)格的BVDV防控凈化措施實(shí)施，生產(chǎn)者趨利避害的博弈心理可能導(dǎo)致我國(guó)牛群的疫苗接種情況不容樂(lè)觀，BVDV的廣泛流行也說(shuō)明我國(guó)有相當(dāng)部分的牛并無(wú)定期接種BVDV疫苗。綜上，可以認(rèn)為我國(guó)健康易感動(dòng)物無(wú)免疫保護(hù)的可能性為“高”，不確定度為“中”。

2.3.2.3 我國(guó)易感動(dòng)物接觸該病原的可能性 BVD是由BVDV引起的一類消化、呼吸、生殖系統(tǒng)損害的疫病[31]。BVDV與豬瘟病毒、綿羊邊界病毒同屬黃病毒科瘟病毒屬，且具有血清學(xué)交叉反應(yīng)，因此除各種牛外，豬、綿羊、山羊、鹿等多種家畜及野生動(dòng)物都可感染[75-76]。BVDV的傳播主要是水平途徑以及垂直途徑，口鼻接觸患病動(dòng)物的排泄物、分泌物或被污染的飲水、飼料是引起感染的主要方式，溫度適合情況下BVDV可以在糞便或土壤中存活2周以上[77]，鮮有報(bào)道其可通過(guò)空氣傳播[78]。牛群中的PI牛是主要的傳染源，其不易檢出且終身可向外界排毒造成牛群中重復(fù)感染[79-80]。此外，過(guò)高的種群密度也會(huì)造成BVDV的迅速傳播，一項(xiàng)調(diào)查顯示，在超過(guò)500頭數(shù)的牛群中抗原陽(yáng)性率可高達(dá)12.8%[74]，從烏拉圭進(jìn)口牛主要依靠輪船裝運(yùn)，每批次進(jìn)口頭數(shù)多、裝運(yùn)船只的空間過(guò)小將增大群體密度，可能為BVDV提供良好傳播條件。同樣，吸血昆蟲(chóng)[81]、共用的診療器械[78]、受污染的疫苗[68]等也是重要的傳播媒介。綜上，BVDV的易感動(dòng)物種類豐富、傳播途徑多樣，進(jìn)口感染牛在我國(guó)隔離場(chǎng)期間，可能通過(guò)間接途徑感染隔離場(chǎng)周?chē)募倚蠹耙吧赘袆?dòng)物，其中青年牛、架子牛在后續(xù)的育肥飼養(yǎng)、運(yùn)輸銷(xiāo)售、分群混群等過(guò)程中，也存在著將攜帶的BVDV暴露給我國(guó)易感動(dòng)物的可能，因此認(rèn)為烏拉圭輸華牛將BVDV暴露給我國(guó)易感動(dòng)物的可能性為“中”，不確定度為“中”。

根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)可能性描述合并規(guī)則，2次逐級(jí)評(píng)估可得出BVD的暴露風(fēng)險(xiǎn)為“中”。

2.4 后果評(píng)估

2.4.1 牛地方流行性白血病的后果評(píng)估 2歲以下的牛感染BLV后多數(shù)并不表現(xiàn)臨床癥狀，隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)，病程復(fù)雜多變，3～6歲的牛發(fā)病率較高。早期臨床癥狀常表現(xiàn)為持續(xù)性淋巴細(xì)胞增多癥且持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，研究認(rèn)為僅有5%左右的感染牛會(huì)發(fā)展成淋巴肉瘤或其他腫瘤，發(fā)生淋巴肉瘤的牛中約有5%的牛呈急性經(jīng)過(guò)，因內(nèi)出血而突然死亡。肉牛的養(yǎng)殖周期較短，即使發(fā)生感染也很少表現(xiàn)臨床癥狀，因此認(rèn)為對(duì)動(dòng)物發(fā)病率死亡率的影響為“次要”。

有研究認(rèn)為BLV的感染對(duì)奶牛群體產(chǎn)奶量有影響[82-83]，尤其對(duì)處于高產(chǎn)期的牛群影響更為顯著[84]。此外感染BLV的牛產(chǎn)出的奶中體細(xì)胞數(shù)升高，導(dǎo)致乳品品質(zhì)下降[85]，甚至還有研究發(fā)現(xiàn)，在未經(jīng)加工的牛乳中可檢測(cè)到BLV核酸[86]；有報(bào)道稱，BLV可能與人類乳腺癌發(fā)病有關(guān)[87]，對(duì)公共衛(wèi)生和食品安全有著潛在的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，BLV的感染會(huì)使奶牛壽命縮短或因生產(chǎn)性能下降而提前淘汰[88-89]。因此認(rèn)為對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能影響為“嚴(yán)重”。

目前，國(guó)際公認(rèn)檢疫結(jié)合撲殺是逐漸凈化該病的方法，后續(xù)還需要進(jìn)行長(zhǎng)期持續(xù)的血清學(xué)監(jiān)測(cè)，這無(wú)疑增添了飼養(yǎng)管理的成本。澳大利亞和新西蘭用該方法，歷經(jīng)30年左右才實(shí)現(xiàn)該病凈化[42]。牛發(fā)生死亡或淘汰、母牛的產(chǎn)犢間隔延長(zhǎng)、產(chǎn)奶量降低及乳品質(zhì)量降低都將造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，可認(rèn)為對(duì)經(jīng)濟(jì)的影響為“嚴(yán)重”。

BLV傳播的方式限定了其僅能通過(guò)垂直傳播、直接接觸、媒介傳播進(jìn)行，在不發(fā)生大規(guī)模的長(zhǎng)途運(yùn)輸、混群飼養(yǎng)的情況下，其流行范圍可認(rèn)為“地區(qū)”。

依據(jù)外來(lái)牛攜帶的BLV對(duì)我國(guó)易感動(dòng)物感染發(fā)病、生產(chǎn)性能、經(jīng)濟(jì)影響結(jié)合影響范圍，依據(jù)表5將EBL的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)判為“C/D/D”，參照SNT2486-2010標(biāo)準(zhǔn)中描述：如果一個(gè)以上的風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)價(jià)結(jié)果是“D”，其后果可評(píng)估為“中”，即進(jìn)口烏拉圭肉牛將EBL傳入我國(guó)導(dǎo)致的后果評(píng)估為“中”。

2.4.2 牛病毒性腹瀉的后果評(píng)估 多數(shù)非妊娠牛感染BVDV后呈現(xiàn)一過(guò)性感染，從感染后3天開(kāi)始形成暫時(shí)性的病毒血癥，幾乎不表現(xiàn)臨床癥狀，通常在2周后能夠自愈[90]，也有少數(shù)牛出現(xiàn)急性高熱、腹瀉、跛行等癥狀，低于7月齡的牛易發(fā)生急性呼吸道癥狀導(dǎo)致死亡[91]；因此認(rèn)為對(duì)動(dòng)物發(fā)病死亡率的影響為“次要”。

對(duì)于妊娠期或有妊娠計(jì)劃的牛而言，BVDV的急性感染還會(huì)導(dǎo)致受孕率降低、胚胎早期死亡[92]、流產(chǎn)和胎牛先天性缺陷[93]；此外BVDV還會(huì)降低種用公牛的精子活力及密度，增高精子畸形概率[94]，降低受精率[95]；母牛在妊娠25天～90天感染BVDV還會(huì)造成胎牛形成PI牛[96-97]，PI牛可造成牛群中循環(huán)感染。因此對(duì)于動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響為“嚴(yán)重”。

除直接感染牛造成發(fā)病和死亡，BVDV還可通過(guò)自然感染或污染疫苗等途徑造成豬的感染[98-99]，據(jù)報(bào)道北美地區(qū)豬群BVDV感染率可達(dá)2%～40%[100]。自然感染的豬可出現(xiàn)類似低毒力豬瘟感染引起的發(fā)熱、嗜睡、腹瀉、敗血癥、消化道炎癥等癥狀，部分豬可能發(fā)生死亡，妊娠母豬感染可產(chǎn)下PI仔豬[101]。而且BVDV與豬瘟病毒存在抗原交叉性，給豬瘟的診斷和檢測(cè)造成了一定的干擾[102]。同樣，由于和羊邊界病毒也存在抗原交叉性，BVDV同樣可以感染山羊，引起生殖障礙以及產(chǎn)下PI羊羔[103-104]。因此可認(rèn)為BVDV的其他影響為“次要”。

BVDV對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng)，傳播方式復(fù)雜多樣，且能感染多種家畜和野生動(dòng)物，我國(guó)自1980年首次發(fā)現(xiàn)該病，近40年來(lái)已在我國(guó)各省市自治區(qū)廣泛分布[63-67,105-106]，可認(rèn)為其流行范圍為“全國(guó)”。

在以上分析基礎(chǔ)上，依據(jù)表5將BVD的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)評(píng)估為“D/E/D”，參照SNT2486-2010標(biāo)準(zhǔn)中描述：如果只有一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)價(jià)結(jié)果是“E”，其余風(fēng)險(xiǎn)因素評(píng)價(jià)結(jié)果是“D”或不全是“D”，其后果可評(píng)估為“高”，即進(jìn)口烏拉圭肉牛將BVD傳入我國(guó)導(dǎo)致的后果評(píng)估為“中”。

2.5 最終風(fēng)險(xiǎn)定性結(jié)果

2.5.1 牛地方流行性白血病的最終風(fēng)險(xiǎn)定性結(jié)果 根據(jù)表6合并釋放與暴露風(fēng)險(xiǎn)，可得出EBL的釋放和暴露綜合風(fēng)險(xiǎn)為“很低”。再與其后果評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)合并，最終烏拉圭輸華牛引入EBL的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為“很低”（圖4）。

圖4 烏拉圭輸華肉牛傳入EBL的定性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果Fig.4 Qualitative risk assessment results of transmitting EBL by beef cattle imported from Uruguay

2.5.2 牛病毒性腹瀉的最終風(fēng)險(xiǎn)定性結(jié)果 根據(jù)表6風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估原則合并釋放與暴露風(fēng)險(xiǎn)，可得出BVD的釋放和暴露綜合風(fēng)險(xiǎn)為“可忽略”。再與其后果評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)合并，最終得出烏拉圭輸華牛引入BVD的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為“可忽略”（圖5）。

圖5 烏拉圭輸華肉牛傳入BVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果圖Fig.5 Qualitative risk assessment results of transmitting BVD by beef cattle imported from Uruguay

3 討論

本研究通過(guò)對(duì)烏拉圭輸華肉牛攜帶EBL和BVD入境、傳播、致病過(guò)程中各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行梳理，對(duì)其釋放、暴露風(fēng)險(xiǎn)及后果嚴(yán)重性進(jìn)行了評(píng)估，EBL釋放和暴露風(fēng)險(xiǎn)分別為“很低”和“中”，后果嚴(yán)重程度為“中”，最終得出烏拉圭輸華肉牛引入EBL的定性評(píng)估結(jié)果為“很低”；BVD釋放和暴露風(fēng)險(xiǎn)分別為“可忽略”和“中”，后果嚴(yán)重程度為“高”，最終得出烏拉圭輸華肉牛引入BVD的定性評(píng)估結(jié)果為“可忽略”。

在現(xiàn)有動(dòng)物衛(wèi)生狀況下，依據(jù)貿(mào)易規(guī)定檢疫流程進(jìn)行操作，烏拉圭牛攜帶EBL進(jìn)入我國(guó)境內(nèi)可能性“很低”，且具有大量文獻(xiàn)及詳實(shí)數(shù)據(jù)佐證，不確定度“低”。只要我國(guó)在進(jìn)口貿(mào)易過(guò)程中把控好各個(gè)檢疫環(huán)節(jié)，避免人為操作因素引起的漏檢，對(duì)灰區(qū)樣本采用數(shù)字PCR或其他更為靈敏的方法進(jìn)行復(fù)檢，就可大大降低該病入境可能，降低釋放風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)而從整體上降低該病最終風(fēng)險(xiǎn)。

EBL目前尚無(wú)有效的疫苗可用于防控，而我國(guó)存在著大量的易感牛群，其傳播模式?jīng)Q定了其通常呈現(xiàn)散發(fā)或地方性流行，所以烏拉圭輸華牛將該病暴露給我國(guó)易感牛群的可能性為“中等”，且隨著國(guó)內(nèi)牛的貿(mào)易、運(yùn)輸進(jìn)行，會(huì)使國(guó)內(nèi)牛群陽(yáng)性率逐步上升，凈化控制難度增加。因此降低暴露風(fēng)險(xiǎn)可以從以下方面進(jìn)行：第一，輸華牛中需要育肥飼養(yǎng)的青年牛、架子牛應(yīng)減少運(yùn)輸次數(shù)，杜絕與我國(guó)牛群混群飼養(yǎng)；第二，做好牛群廄舍的滅蚊、滅蠅以及牛的體外驅(qū)蟲(chóng)工作，阻斷昆蟲(chóng)媒介；第三，耳標(biāo)打孔器、直腸檢查手套等器械應(yīng)避免交叉使用。

BVD最終定性結(jié)果為“可忽略”的主要原因，是由于當(dāng)?shù)卦摬×餍新瘦^低和我國(guó)現(xiàn)行隔離檢疫措施合理可靠、抽樣檢測(cè)方法科學(xué)有效，使得釋放風(fēng)險(xiǎn)大大降低。然而，我國(guó)易感動(dòng)物的免疫接種不夠普及使得暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為“中”。由于BVDV可感染多種家畜、引起動(dòng)物發(fā)病死亡、生產(chǎn)性能下降，而且其傳播途徑多樣，可造成大范圍流行，帶來(lái)的后果評(píng)為“高”。因此需要對(duì)進(jìn)口來(lái)源國(guó)該病流行率的動(dòng)態(tài)變化保持密切關(guān)注，避免因流行率升高導(dǎo)致釋放風(fēng)險(xiǎn)升高而引入該病。

定性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估由于受到事件不確定性及數(shù)據(jù)豐富程度的影響，雖然有時(shí)不足以很好的量化風(fēng)險(xiǎn)，但仍不失為缺少數(shù)據(jù)時(shí)良好的評(píng)估手段[107]。本研究通過(guò)對(duì)烏拉圭輸華肉牛各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行梳理、收集數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)報(bào)道、逐步分析，為收集詳實(shí)的數(shù)據(jù)、開(kāi)展其定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估打下良好基礎(chǔ)。