崔藝燕 田志梅 李貞明 杜宗亮 容 庭 鄧 盾 魯慧杰 馬現(xiàn)永，3*

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所畜禽育種國家重點實驗室農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室 廣東畜禽肉品質(zhì)量安全控制與評定工程技術(shù)研究中心，廣東廣州510640；2.清遠市龍發(fā)種豬有限公司，廣東清遠511500；3.嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)廣東省實驗室茂名分中心，廣東茂名525000）

斷奶應(yīng)激是仔豬患病和死亡的重要誘因，斷奶引起仔豬體內(nèi)代謝紊亂，改變機體氧化還原狀態(tài)。氧化應(yīng)激降低仔豬血液、肝臟、腸道等的抗氧化能力[1]。生產(chǎn)中，抗生素廣泛應(yīng)用于斷奶仔豬。但濫用抗生素容易造成細菌耐藥性、環(huán)境污染等，尋找合適的抗生素替代品迫在眉睫。

柑橘是世界上種植最廣泛的水果，產(chǎn)量超過1.24億噸（2016年），其中約50%～60%作為新鮮水果食用，40%～50%用于加工業(yè)[2]。柑橘加工業(yè)每年都會產(chǎn)生大量的廢棄物，僅果皮廢棄物占濕果質(zhì)量的50%[3]。柑橘類水果是黃酮類化合物的關(guān)鍵來源，Zhang等[4]測定19個基因型柑橘的總酚和類黃酮含量，發(fā)現(xiàn)果皮中總酚、總黃酮含量最高，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）值和2,2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）值分別為21.92 mg 和78.70 mg 維生素C 當量抗氧化能力/g干重。柑橘副產(chǎn)物是一種理想、可持續(xù)、可再生的資源，可用于獲取生物活性化合物[5]。

柑橘提取物有顯著的抗氧化功能和自由基清除特性[6]。提取物中酚類物質(zhì)容易被機體吸收，并產(chǎn)生抗氧化活性，主要是由于它們作為還原劑、供氫體和單態(tài)氧猝滅劑的作用[7]。此外，柑橘提取物還具有抗利什曼原蟲[8]、抗誘變[9]、抗菌[9]和抗炎活性[10]等生物學(xué)功能。動物試驗表明，甜橙提取物可以改善肉雞的免疫應(yīng)答和疾病抗性，不影響日增重、平均日采食量、飼料轉(zhuǎn)化率[11]。柑橘類黃酮化合物的強抗氧化特性增強了飼用抗生素添加劑的替代效果，有效緩解動物應(yīng)激，改善動物產(chǎn)品質(zhì)量[7]。前期研究表明，柑橘提取物可以改善仔豬免疫功能及腸道健康[12-13]，目前尚不清楚柑橘提取物能否提高仔豬血漿、肝臟、腸道抗氧化酶活力，柑橘提取物與抗生素對仔豬抗氧化能力的異同亦未見相關(guān)研究報道。因此，本研究探討了柑橘提取物對仔豬血漿、肝臟、十二指腸和空腸抗氧化能力的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

15%金霉素購自廣東新南都飼料科技有限公司，柑橘提取物由廣東潤森環(huán)?？萍及l(fā)展有限公司提供。柑橘提取物含有3.04%維生素C、2.38%維生素E、2.89%檸檬酸和20.77%總黃酮。

1.2 試驗飼糧及試驗動物分組

選取144頭28日齡(8.39±1.06) kg杜長大仔豬，公母各半。按體重隨機分為3 個處理組，每處理組6 個欄，每欄8 頭豬。試驗周期為28 d。空白組，為基礎(chǔ)飼糧；抗生素組，在基礎(chǔ)飼糧中添加75 g/t 金霉素；柑橘提取物組，在基礎(chǔ)飼糧中添加300 ml/t 柑橘提取物?；A(chǔ)飼糧組成和營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理與屠宰采樣

試驗在廣東省新興縣豐利田農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司豬場進行。根據(jù)豬場常規(guī)程序進行飼養(yǎng)管理。各組飼養(yǎng)管理、環(huán)境條件一致。每組選取每欄接近平均體重的2 頭仔豬，前腔靜脈采血。血液經(jīng)3 500 r/min、4 ℃離心10 min，收集血漿，-80 ℃保存。采血屠宰，取肝臟（右下葉）、十二指腸（中段）和空腸（距離十二指腸2～3 m），用生理鹽水清洗，-80 ℃保存。

1.4 抗氧化指標

測定總蛋白、總超氧化物岐化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）等指標，以上指標測定試劑盒均購買于南京建成生物工程研究所，采用多功能酶標儀測定，具體操作按說明書進行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ))

1.5 組織勻漿

取約0.1 g 組織，加入9 倍體積0.9%生理鹽水制成10%勻漿液，4 ℃，3 500 r/min 離心15 min，取上清液測定抗氧化指標。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2010 整理數(shù)據(jù)，用SPSS 19.0 進行單因素方差分析（one-way ANOVA），并用Duncan's法進行多重比較。結(jié)果用“平均值±標準差”表示，P<0.05 為差異顯著，0.05≤P<0.10為有變化趨勢。

2 結(jié)果

2.1 柑橘提取物對仔豬血漿抗氧化指標的影響(見表2)

表2 柑橘提取物對仔豬血漿抗氧化指標的影響

由表2 可知，與抗生素組和空白組相比，柑橘提取物組血漿CAT 活性分別顯著提高90.29%、85.81%（P<0.05），抗生素組與空白組差異不顯著（P>0.05）。與空白組相比，柑橘提取物組T-SOD 活性顯著提高17.80%（P<0.05），與抗生素組差異不顯著（P>0.05）。三組間GSH-Px、T-AOC活性以及MDA含量差異均不顯著（P>0.05）。

2.2 柑橘提取物對仔豬肝臟抗氧化指標的影響(見表3)

表3 柑橘提取物對仔豬肝臟抗氧化指標的影響

由表3 可知，與空白組相比，抗生素組肝臟TAOC、GSH-Px活性分別顯著降低15.49%、15.68%（P<0.05），CAT 活性有降低趨勢（0.05≤P<0.10）。與空白組、抗生素組比較，柑橘提取物組肝臟T-AOC、GSHPx活性差異均不顯著（P>0.05）。

2.3 柑橘提取物對仔豬十二指腸抗氧化指標的影響（見表4）

由表4 可知，柑橘提取物對仔豬十二指腸CAT、T-AOC、T-SOD、GSH-Px 活性及MDA 含量均無顯著影響（P>0.05）。

表4 柑橘提取物對仔豬十二指腸抗氧化指標的影響

2.4 柑橘提取物對仔豬空腸抗氧化指標的影響（見表5）

由表5可知，與空白組、柑橘提取物組相比，抗生素組空腸T-AOC 活性分別顯著提高39.29%、44.44%（P<0.05）。各組間CAT、T-SOD 和GSH-Px 活性及MDA含量均無顯著差異（P>0.05）。

表5 柑橘提取物對仔豬空腸抗氧化指標的影響

3 討論

氧化應(yīng)激會損害細胞抗氧化系統(tǒng)，減少動物生產(chǎn)。在評估由氧化應(yīng)激引起的組織損傷時，T-SOD、GSH-Px和CAT是最常用的抗氧化酶[14]?？寡趸富钚缘慕档团c脂質(zhì)過氧化密切相關(guān)，其T-SOD、CAT 和GSH-Px 的活性隨著脂質(zhì)過氧化的增加而下降，通過添加外源物質(zhì)可以加強抗氧化防御機制[15]。

3.1 柑橘提取物對仔豬血漿抗氧化能力的影響

柑橘黃酮可通過增加酶和非酶抗氧化劑的水平來改善抗氧化防御機制[16]。血液中T-SOD 是反映機體抗氧化能力的重要指標，T-SOD是破壞超氧自由基和保護正常細胞對抗過氧化物、氫過氧化物介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化物的抗氧化酶[17]。CAT是必需的H2O2防御，它消除了羥基自由基的毒性并將過氧化氫（H2O2）分解成氧氣和水[18]。橙皮苷可提高肉雞血漿T-SOD活性，并降低MDA 含量[19]，柚皮苷可增加羔羊血漿T-SOD和GSH-Px 活性[20]，改善抗氧化狀態(tài)。本研究與前人報道一致，柑橘提取物組血漿T-SOD、CAT 活性顯著提高，效果優(yōu)于抗生素。柑橘葉提取物提高大鼠血漿T-SOD、CAT、GSH-Px 活性，改善谷胱甘肽（GSH）、抗壞血酸和多酚含量[21]，橙皮苷可抑制急性心肌梗死小鼠血清MDA 含量，增加T-SOD 和CAT 活性[22]?？梢姼涕偬崛∥飳ψ胸i血液有較好的抗氧化效果。

GSH-Px 降低脂質(zhì)或非脂質(zhì)氫過氧化物以及H2O2[15]，是抵抗氧化應(yīng)激重要防御線[17]。T-AOC 是反映機體抗氧化能力的綜合指標。不同的植物提取物的抗氧化效果有所差別，本研究柑橘提取物對仔豬血漿T-AOC、GSH-Px 活性無影響，與Gessner 等[23]研究相似。研究報道連翹提取物[24]提高血清T-AOC、GSH-Px活性。這些差異可能是由于提取物中主要成分不同造成的，如連翹提取物中主要成分為苷類，而柑橘提取物主要為黃酮。另外，檸檬精油能提高母羊血清T-AOC 活性[25]，橙皮苷提高肉雞血漿T-AOC活性[19]。本試驗與前述研究不同的原因可能在于添加劑量、動物品種。

MDA是機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的指標，脂質(zhì)過氧化與氧化應(yīng)激成正比[14]，可反映出細胞受損情況[17]。較多研究認為植物提取物能夠降低MDA 的產(chǎn)生[26]。但是本研究結(jié)果表明柑橘提取物、抗生素對仔豬血液、肝臟、腸道MDA含量無影響，與陳麗[27]一致。Zhao等[24]發(fā)現(xiàn)連翹提取物可降低仔豬第14 d血清MDA濃度，第28 d無影響。這也許是植物提取物在不同階段發(fā)揮的作用不同。而Simitzis等[7]認為，橙皮苷和柚皮苷能夠降低羔羊（35 d）血漿MDA水平。這可能與動物種屬有關(guān)，反芻動物與單胃動物對于柑橘黃酮的吸收代謝不一樣。

3.2 柑橘提取物對仔豬肝臟抗氧化能力的影響

早期斷奶是仔豬的關(guān)鍵階段，易發(fā)生氧化應(yīng)激，損壞肝臟功能，影響機體健康。柚皮苷可抑制輻射誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化升高和GSH、GSH-Px、TSOD和CAT的消耗，通過提高抗氧化狀態(tài)和降低脂質(zhì)過氧化作用，保護小鼠肝臟免受輻射損傷[15]。柑橘橙皮苷能提高肉雞肝臟T-AOC、T-SOD活性，降低MDA含量[28]。柑橘黃酮柚皮素和橙皮素改善24 月齡大鼠肝臟抗氧化狀態(tài)，提高T-SOD、GSH-Px、谷胱甘肽還原酶、GSH 活性，降低硫代巴比妥酸反應(yīng)物（TBARS）含量[29]。本研究抗生素組肝臟T-AOC、CAT、GSH-Px活性低于空白組，這可能是由于抗生素的促生長作用不是通過肝臟抗氧化能力提高實現(xiàn)的。大鼠補充柑橘提取物可降低肝臟MDA 的產(chǎn)生，對肌肉MDA 含量無影響[30]。本試驗結(jié)果表明柑橘提取物不影響肝臟抗氧化能力。柑橘提取物對機體抗氧化能力可能取決于組織類型，其作用可能通過不同的機制實現(xiàn)。另外，較多試驗采用藥物誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，應(yīng)激強度大，與生產(chǎn)中斷奶應(yīng)激的強度不一樣，因此，添加柑橘提取物或其純化物質(zhì)的效果有差別。

3.3 柑橘提取物對仔豬腸道抗氧化能力的影響

仔豬斷奶后易出現(xiàn)腸道功能障礙，抑制抗氧化系統(tǒng)（T-SOD 活性下降，MDA、H2O2濃度升高）[31-32]，從而增加對疾病、腹瀉的易感性，降低斷奶后動物的健康和生長。因此，保持小腸的正常功能，促進腸道成熟，是仔豬斷奶后生長發(fā)育的必要條件。關(guān)于植物提取物、黃酮對小腸抗氧化影響的研究有限。柚皮苷降低了大鼠（缺血再灌注）小腸MDA含量，增加T-SOD、GSH-Px活性并增強了抗氧化防御，但降低CAT活性[14]。用橙皮苷預(yù)處理減輕了腸缺血/再灌注損傷Wistar 白化大鼠的肺形態(tài)變化，降低MDA 水平和髓過氧化物酶活性，提高GSH水平[33]。橙皮苷通過降低MDA含量，增強T-SOD、GSH活性，上調(diào)Nrf2抗氧化途徑，增加HO-1和NQO1蛋白表達，繼而改善腸道炎癥[34]。Elshazly等[35]研究發(fā)現(xiàn)，橙皮苷可降低炎癥因子表達，增強抗氧化能力（Nrf2 和HO-1 表達），減輕胃潰瘍導(dǎo)致的應(yīng)激。本試驗中，柑橘提取物、抗生素不影響十二指腸抗氧化指標，抗生素顯著提高空腸T-AOC活性。這說明抗生素緩解腸道氧化應(yīng)激的效果優(yōu)于柑橘提取物。我們前期結(jié)果表明，柑橘提取物可以改善仔豬腸道消化酶活力以及腸道形態(tài)[13]。結(jié)合抗氧化結(jié)果可得，柑橘提取物對仔豬腸道的有益影響并不是通過提高腸道抗氧化能力實現(xiàn)的，具體機理還需要進一步研究。

4 結(jié)論

柑橘提取物可以提高仔豬血漿中CAT、T-SOD活性，抗生素可以提高仔豬空腸T-AOC活性，緩解斷奶應(yīng)激。