□ 陳靖欣 中山市食品藥品檢驗(yàn)所

一次性無菌耗材愈來愈廣泛地應(yīng)用于微生物實(shí)驗(yàn)中，雖然一次性無菌耗材在生產(chǎn)和出廠時(shí)，已經(jīng)符合相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。但在貯存和運(yùn)輸過程中，不能完全保證無菌用品的密封性及其無菌狀態(tài)不被破壞，往往在實(shí)驗(yàn)中才發(fā)現(xiàn)使用的一次性無菌耗材已被污染，但已對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成不可挽回的影響。而目前依然沒有詳細(xì)標(biāo)準(zhǔn)要求微生物實(shí)驗(yàn)室需要對購進(jìn)的一次性無菌耗材進(jìn)行驗(yàn)收。微生物實(shí)驗(yàn)大多不能蟲谷，考慮到一次性無菌耗材可能會(huì)對微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果遭嚴(yán)重影響，需重視對一次性無菌耗材無菌的驗(yàn)收和管理。但如果每次都完全按照產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)對一次性耗材進(jìn)行驗(yàn)收，會(huì)大大增加微生物實(shí)驗(yàn)室的工作量。所以在此對購進(jìn)的一次性無菌耗材提出建立無菌驗(yàn)收和管理規(guī)程的建議。

1 目的

對食品微生物實(shí)驗(yàn)室購進(jìn)的一次性無菌耗材進(jìn)行無菌驗(yàn)收和集中管理，有效維持耗材的無菌狀態(tài)，從而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確有效。

2 適用范圍

食品微生物實(shí)驗(yàn)室一次性無菌耗材（一次性使用滅菌手套、滅菌/無菌口罩、一次性無菌培養(yǎng)皿、一次性無菌接種環(huán)、一次性無菌接種針、無菌采樣袋、無菌均質(zhì)袋等）[1—2]。

3 注意事項(xiàng)

同一運(yùn)輸日期、品牌、品類、型號(hào)規(guī)格、批號(hào)的樣品做一次驗(yàn)收。上述條件只要有一項(xiàng)不一樣均要求分別驗(yàn)收。

最小包裝：整個(gè)產(chǎn)品中，以最小密閉無菌環(huán)境包裝樣品的包裝稱為最小包裝，最小包裝內(nèi)的產(chǎn)品不能再拆分來銷售，檢驗(yàn)前不能開啟，以防污染。大包裝：以多個(gè)最小獨(dú)立包裝組成的包裝稱為大包裝。例如：規(guī)格為500 個(gè)平皿/箱，10 個(gè)平皿/包的一次性無菌培養(yǎng)皿中，10 個(gè)平皿/包的包裝打開后平皿可以直接使用，則10個(gè)平皿/包的包裝為最小獨(dú)立包裝，500 個(gè)平皿/箱為大包裝。

4 外觀驗(yàn)收

接收時(shí)，產(chǎn)品應(yīng)帶有合格證明，清晰標(biāo)注批號(hào)和/或生產(chǎn)日期、有效期及貯存條件，否則均應(yīng)拒收或退回。外包裝潔凈，形狀完好，表面不得有破損、污漬。樣品最小獨(dú)立包裝密封性完好，表面不得有破損、污漬。同時(shí)可向供應(yīng)商索取或官網(wǎng)下載檢測報(bào)告。

5 無菌驗(yàn)收

5.1 抽樣方法

每次抽樣至少取3 個(gè)最小包裝樣品作為平行樣。為使樣品具有良好的代表性，采取隨機(jī)抽樣方法，盡量選自多個(gè)大包裝，不得在同一批號(hào)內(nèi)的同一包裝內(nèi)鄰近部位集中選取所需的全部樣品。

5.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求

100 級(jí)潔凈室或100 級(jí)層流超凈工作臺(tái)(以下分別簡稱潔凈室與超凈臺(tái)）。

5.3 驗(yàn)收前準(zhǔn)備

潔凈室地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌面、超凈臺(tái)桌面擦凈消毒后，將試樣及其他所需器材放妥，毛巾和脫脂棉球需經(jīng)過濕熱滅菌處理，把所需耗材預(yù)先放入實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行紫外照射，開啟紫外線消毒至少30 min，此過程也對物體表面進(jìn)行了消毒。但培養(yǎng)基等試劑不能預(yù)先放入實(shí)驗(yàn)室，因?yàn)榕囵B(yǎng)基里的某些成分可能會(huì)分解，培養(yǎng)基在紫外后通過傳遞窗放入。

5.4 取樣方法

可剪碎的耗材（如手套、口罩）用酒精棉擦拭產(chǎn)品外包裝后，無菌操作打開外包裝，將樣品置于無菌器皿，用滅菌剪刀和鑷子將樣品剪碎，用于稱取的單個(gè)碎片面積應(yīng)不大于25 cm2（5 cm×5 cm）， 稱 取（10±1）g 樣品加入到200 mL 滅菌生理鹽水中，手動(dòng)混勻或均質(zhì)器拍打1 ～2 min，準(zhǔn)備5 個(gè)無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

對于可用于直接培養(yǎng)的耗材（如無菌采樣袋、無菌均質(zhì)袋），用酒精棉擦拭產(chǎn)品外包裝后，無菌操作打開外包裝，加入200 mL 滅菌生理鹽水于樣品容器內(nèi)部，手動(dòng)混勻或均質(zhì)器拍打1 ～2 min，準(zhǔn)備5 個(gè)無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

一次性無菌培養(yǎng)皿雖為可用于直接培養(yǎng)的器皿，但其最小包裝內(nèi)通常含有多個(gè)平皿，如平皿表面污染也會(huì)造成平皿內(nèi)部污染，所以建議采用該方法取樣。

不可剪碎的耗材（如一次性接種環(huán)、一次性接種針、一次性移液管、一次性槍頭或一次性培養(yǎng)皿）：用酒精棉擦拭產(chǎn)品外包裝后，無菌操作打開外包裝，稱取（10±1）g 樣品加入到200 mL 滅菌生理鹽水中，可根據(jù)樣品重量按比例增加生理鹽水的量，用生理鹽水充分浸泡樣品內(nèi)外面。手動(dòng)混勻1 ～2 min，準(zhǔn)備5 個(gè)無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

5.5 樣品培養(yǎng)

向每個(gè)裝有樣液的平皿中加入15 ～20 mL 的營養(yǎng)瓊脂，混勻，待冷卻凝固后，置于（35±2）℃培養(yǎng)48 h后，計(jì)算平板菌落數(shù)。

5.6 實(shí)驗(yàn)區(qū)空白對照

無菌驗(yàn)收過程中，應(yīng)同時(shí)檢查潔凈室或超凈臺(tái)空氣的菌落數(shù)。用至少2個(gè)直徑9 cm 的培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的約15 ～20 mL 營養(yǎng)瓊脂，在潔凈室或超凈臺(tái)的中間位置打開上蓋，暴露30 min 后對空氣采樣后，蓋上蓋置于（35±2）℃培養(yǎng)48 h，取出檢查培養(yǎng)皿上是否生長菌落，均無菌落生長則檢測環(huán)境合格，若有菌落生長此次試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)判為無效。

5.7 結(jié)果判定

所有平板均不生長菌落，該樣品則達(dá)標(biāo)，可判為合格，通過驗(yàn)收，可投入使用。

若有平板生長菌落，該樣品不達(dá)標(biāo)，判為不合格，應(yīng)聯(lián)系供應(yīng)商退回樣品。

6 一次性無菌用品管理

建立一次性無菌耗材文檔，用于存放一次性無菌耗材的合格證明、質(zhì)檢報(bào)告和驗(yàn)收記錄。建立一次性無菌耗材購進(jìn)領(lǐng)用記錄。

7 一次性無菌耗材的存放

一次性無菌耗材應(yīng)存放于陰涼干燥、通風(fēng)良好的物架上或儲(chǔ)物柜中，距離地面不少于20 cm，距天花板不少于50 cm。應(yīng)分類放置，不建議與其他物品混放，未驗(yàn)收與已驗(yàn)收的應(yīng)分開標(biāo)識(shí)，新到耗材應(yīng)貼上“未驗(yàn)收”標(biāo)簽，驗(yàn)收通過的應(yīng)貼上“已驗(yàn)收”標(biāo)簽，同時(shí)遵循先進(jìn)先出的原則。不能將運(yùn)輸包裝直接帶入潔凈室，應(yīng)去除最外層包裝或更換潔凈包裝方可帶入實(shí)驗(yàn)區(qū)。每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)估耗材用量，按需帶入實(shí)驗(yàn)區(qū)，不建議實(shí)驗(yàn)區(qū)長期存放大量一次性無菌耗材，避免污染。存放時(shí)間超過6 個(gè)月的一次性無菌耗材應(yīng)再次進(jìn)行無菌驗(yàn)收。在儲(chǔ)存過程中有懷疑儲(chǔ)存條件已對一次性無菌耗材造成污染時(shí)，耗材應(yīng)立即停用，重新進(jìn)行驗(yàn)收。根據(jù)驗(yàn)收結(jié)果重新判斷是否可以繼續(xù)使用。

8 結(jié)語

在建立了食品微生物實(shí)驗(yàn)室一次性無菌耗材無菌驗(yàn)收和管理規(guī)程后，一次性無菌耗材得到有序的集中管理，改變了以往無序存放、隨機(jī)拿取的無序管理狀態(tài)，有效避免了使用已污染的一次性無菌耗材進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)，大大降低了一次性耗材污染給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的影響，工作效率也得到了提高。