□ 何嘉明 佛山市食品藥品檢驗檢測中心

食品微生物培養(yǎng)基種類繁多、原料復(fù)雜、品牌批次差異大，目前常見的問題：顯色培養(yǎng)基特殊色澤不明顯、血平板溶血圈不明顯、pH值偏離、培養(yǎng)基選擇性不佳與洗滌劑殘留影響熒光反應(yīng)等。為了提升食品衛(wèi)生微生物檢驗質(zhì)量，需要做好培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。

1 可參考標(biāo)準(zhǔn)

目前涉及培養(yǎng)基質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)有 CNAS—CL01—A001：2018、SN/T 1538.1—2016、GB 4789.28—2013 與GB/T 27405—2008等。這些標(biāo)準(zhǔn)均明確要求實驗室應(yīng)結(jié)合實際工作設(shè)立相應(yīng)的培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序，包括廠家材料核查、培養(yǎng)基的技術(shù)驗收（拒收）、儲存條件核對與配置使用等，并對關(guān)鍵信息進行有效記錄，做到溯源和控制。

2 質(zhì)量控制措施

2.1 培養(yǎng)基采購與廠家材料驗收

如今培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家繁多，產(chǎn)品質(zhì)量差異很大，因此在采購培養(yǎng)基時要對生產(chǎn)廠家的資質(zhì)進行認(rèn)定。需要求培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)提供相應(yīng)材料，主要包含以下內(nèi)容：培養(yǎng)基、獨立成分、添加劑名稱和產(chǎn)品編碼，培養(yǎng)基最終pH，儲藏信息和有效期，質(zhì)控證書和所用的測試菌株，性能測試結(jié)果和驗收標(biāo)準(zhǔn)，技術(shù)數(shù)據(jù)清單以及必要的安全、危害數(shù)據(jù)等。同時，應(yīng)檢查每批次產(chǎn)品的批號、合格證明、包裝完整性、品牌規(guī)格與有效期；記錄產(chǎn)品驗收日期、首次開封日期、感官評價，保留有效的培養(yǎng)基目錄清單，如果采購后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基存在問題，一律不能投入到食品衛(wèi)生微生物檢驗中。

2.2 存儲條件核對

目前實驗室常采用脫水合成培養(yǎng)基和商品化即用型培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基應(yīng)保存在供應(yīng)商要求的貯存條件下，需根據(jù)實際保質(zhì)期制訂購買計劃，保證使用效果。目前培養(yǎng)基有以下儲存條件：粉末（顆粒）脫水合成培養(yǎng)基常溫保存2～3年；商品化即用型平板在2～8 ℃保存3個月（血平板夏季2個月）；即用型液體培養(yǎng)基在2～8 ℃保存6個月；血制品在2～8 ℃保存7～14天。接收時需留意物流箱內(nèi)溫度，偏離過大應(yīng)予以拒收[1]。

2.3 配置滅菌和保存

配置培養(yǎng)基的實驗用水中的微生物不應(yīng)超過103CFU/mL，應(yīng)按照實驗室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明配置，記錄所有相關(guān)數(shù)據(jù)。每次滅菌應(yīng)使用濕熱滅菌指示條進行監(jiān)測，關(guān)鍵培養(yǎng)基可采用濕熱滅菌生物指示劑同時監(jiān)測。高壓鍋運行結(jié)束后，應(yīng)及時取出培養(yǎng)基冷卻至室溫，長時間高溫悶熱環(huán)境會使培養(yǎng)基出現(xiàn)顏色變深、水分蒸發(fā)、pH偏離等問題。錯誤使用滅菌條件會造成培養(yǎng)基成分破壞或滅菌不徹底等后果，大部分培養(yǎng)基需在121 ℃濕熱滅菌15 min，需留意部分特殊條件：121 ℃滅菌20 min（TTB、PDA），115 ℃滅菌20 min（GB8538中 的 EC、EC—MUG），115 ℃ 滅 菌10 min（3%NACL堿性胰蛋白胨水、含鐵牛奶培養(yǎng)基），加熱煮沸（VRBA、KF鏈球菌瓊脂、顯色培養(yǎng)基等）[2]。

2.4 關(guān)鍵培養(yǎng)基的性能測試

CNAS—CL01—A001:2018 中規(guī)定培養(yǎng)基是外部提供的產(chǎn)品和服務(wù)，對于關(guān)鍵培養(yǎng)基和試劑，要求進行技術(shù)性驗收，可參考ISO/TS 11133、CNAS—CL01—A001、SN/T 1538.1—2016、GB 4789.28—2013、B/T 27405—2008、SN/T1538等標(biāo)準(zhǔn)。對于即用型培養(yǎng)基和脫水合成培養(yǎng)基，每批培養(yǎng)基除用標(biāo)準(zhǔn)菌株行測試驗收；含有指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，應(yīng)使用能證明其指示或選擇作用的菌株進行試驗。

對于即用型培養(yǎng)基，SN/T1538.1—2016要求，若生產(chǎn)商已通過ISO9000體系認(rèn)證，應(yīng)在適當(dāng)位置有質(zhì)量聲明并提供品質(zhì)證書，使用者至少要求進行定性測試；GB 4789.28—2013驗證必需的質(zhì)量控制要求外，還需要抽取至少一個（或1%）平板和試管，置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h，以控制微生物污染。脫水合成培養(yǎng)基的實驗室驗 收 標(biāo) 準(zhǔn) SN/T 1538.1—2016 和 GB 4789.28—2013要求基本一致，根據(jù)培養(yǎng)基特性采用目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌對培養(yǎng)基進行定量、半定量或定性測試。

3 GB 4789.28-2013在應(yīng)用中遇到的問題

GB 4789.28—2013實行期間，在實際工作中存在以下問題：①標(biāo)準(zhǔn)中培養(yǎng)基種類有限，對部分常用培養(yǎng)基暫無覆蓋：如假單胞菌CN培養(yǎng)基（飲用水）；②霉菌和蠟樣芽胞桿菌等菌落較大，在半定量劃線法中難以判斷；③弧菌顯色培養(yǎng)基測試使用霍亂弧菌，在2006年發(fā)布的《人間傳染的病原微生物名錄》中的危害等級分類為第二類，需嚴(yán)格規(guī)范其使用期間的生物安全性；④標(biāo)準(zhǔn)菌株和培養(yǎng)基性能測試是互為驗證的關(guān)系，當(dāng)出現(xiàn)異常，需要采取進一步手段判斷問題，例如金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在血平板上沒有β溶血環(huán)，需采用多品牌對比，以判斷菌株退化或培養(yǎng)基該性能不合格。

4 結(jié)語

培養(yǎng)基質(zhì)量的不穩(wěn)定性會對檢驗準(zhǔn)確性產(chǎn)生直接影響，不同實驗室由于實際條件不同，對培養(yǎng)基的質(zhì)量控制存在很大的差異；在微生物檢驗時應(yīng)強調(diào)對培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，從采購、制備、滅菌與存儲等多環(huán)節(jié)采取質(zhì)量控制，并重視關(guān)鍵培養(yǎng)基的性能測試，確保食品微生物檢驗的質(zhì)量。