許紹強(qiáng),周道銀,吳 茅,張時民,黃道連,樊愛琳,段愛軍

君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺專家委員會 組 稿 閆立志 執(zhí) 筆

參加共識討論的專家（按姓氏拼音排序）：

柏世玉1， 曹 科2， 竇心靈3， 丁邦勝4， 段愛軍5， 樊愛琳6， 高菊興7， 顧劍飛8， 高建軍9， 高海燕10，何 勇11，黃 俊12，黃道連13，胡 晶14，蔣錦文15，金 鑫16，盧興國17，李相磊18，劉超群19，梁 勤20，林慧君21，繆 峰22，潘 巍23，茹進(jìn)偉24，孫宏華25，吳 茅26，王敏敏27，王 哲28，許紹強(qiáng)29，夏萬寶30，邢銘芬31，許銀懷32，岳保紅33，閆立志34，張軍格35，張時民36，張建富37，張春瑩38，曾強(qiáng)武39，趙成艷40，朱鳳嬌41，莊順紅42，周玉利43，周道銀44，周 麟45，鄭智弦46，鄭 瑞47

（1．山東省泰安市中心醫(yī)院，山東泰安 271000； 2.深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518026；3.酒泉市人民醫(yī)院，甘肅酒泉 735000；4.安徽省立醫(yī)院，合肥 230001；5.河南信合醫(yī)院，河南信陽 465200；6.空軍軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院，西安 710032；7.臨沂市人民醫(yī)院，山東臨沂 276002；8.復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院，上海 200040；9.邯鄲市第一醫(yī)院，河北邯鄲 056002；10.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，哈爾濱 150001；11.保靖縣人民醫(yī)院，湖南保靖 416500；12.成都市第三人民醫(yī)院，成都 610031；13.南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院，廣東中山 528400；14.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院，重慶 400016；15.東陽市人民醫(yī)院，浙江東陽 322100；16.浙江省立同德醫(yī)院，杭州 310012；17.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，杭州 310009；18.開封市中心醫(yī)院，河南開封475000；19. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬金華中醫(yī)院，浙江金華321017； 20.甘肅省中醫(yī)院，蘭州 730050；21.浙江省人民醫(yī)院，杭州 310014；22.原山東省寄生蟲病防治研究所，山東濟(jì)寧 272000；23.海鹽縣人民醫(yī)院，浙江海鹽 314300；24.樂昌市人民醫(yī)院，廣東樂昌 512200； 25.中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院，廣東深圳 518000；26.浙江省人民醫(yī)院，杭州 310014；27.杭州市第一人民醫(yī)院，杭州 310006；28.保定第一醫(yī)院，河北保定 071000；29.廣東三九腦科醫(yī)院，廣州 510510；30.上海市松江區(qū)中心醫(yī)院，上海 201600；31.湖州市南潯區(qū)人民醫(yī)院，浙江湖州 313009；32.濮陽市疾病預(yù)防控制中心，河南濮陽 457000；33.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州 450052；34.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014010；35.象山縣紅十字臺胞醫(yī)院，浙江象山 315731；36.北京協(xié)和醫(yī)院，北京100730；37.江蘇省人民醫(yī)院，南京 210029；38.四川大學(xué)華西醫(yī)院，成都 610041；39.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴陽 550001；40.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧大連 116000；41.浙大一院三門灣分院，浙江三門317100；42.金華市中心醫(yī)院，浙江金華 321000；43.杭州市第一人民醫(yī)院，杭州 310006；44.上海長海醫(yī)院，上海 200433； 45.諸暨市中醫(yī)醫(yī)院，浙江諸暨 311800；46.梧州市紅十字會醫(yī)院，廣西梧州 543000；47.浙江省臺州醫(yī)院，浙江臨海317000 。）

腦脊液是充滿腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)的一種無色透明液體。腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗對中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病、腦膜癌病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤及腦血管病等疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后評估等有重要的參考價值[1-2]。為進(jìn)一步推廣腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗，使其操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，經(jīng)國內(nèi)多位從事該領(lǐng)域研究的君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺專家共同商討，制定出腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗專家共識。

1 檢驗?zāi)康?/h2>

檢查患者腦脊液中各種細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)和比例的變化，分析腦脊液細(xì)胞學(xué)反應(yīng)類型，結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、影像檢查和實驗室相關(guān)檢查結(jié)果等綜合分析，做出細(xì)胞學(xué)診斷,為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別診斷、治療效果和預(yù)后評估提供檢驗診斷依據(jù)。

2 標(biāo)本采集

腦脊液標(biāo)本主要通過腰椎穿刺術(shù)獲得。為避免或減少血液混入對腦脊液細(xì)胞計數(shù)及分類造成的影響，一般采用第三管腦脊液用于細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查[3-5]，標(biāo)本量不少于2ml 為宜。推薦使用腰穿包內(nèi)帶蓋的無菌塑料試管作為采集容器，避免使用真空采血試管或痰杯等容器送檢。

3 標(biāo)本送檢

原則上，腦脊液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，一般不超過1h[3-5]，室溫保存。如標(biāo)本不能及時送檢，可置4 ～8℃冰箱暫時保存，2h 內(nèi)送檢。

4 標(biāo)本接收

標(biāo)本送達(dá)檢驗科后，工作人員核對標(biāo)本相關(guān)信息，檢查采集容器是否符合要求，是否有滲漏，標(biāo)本量是否足夠。

標(biāo)本接收后應(yīng)及時進(jìn)行檢驗，久置可致細(xì)胞破壞，影響細(xì)胞計數(shù)及分類[3-5]；對于部分不合格標(biāo)本(如標(biāo)本容器選擇錯誤、標(biāo)本量小于1ml、送檢不及時等情況），可執(zhí)行讓步接收和讓步檢驗，及時與臨床進(jìn)行溝通，并在報告單上備注說明標(biāo)本狀況對檢驗結(jié)果的影響。

5 檢驗程序

5.1 理學(xué)檢查 包括腦脊液外觀、透明度、球蛋白定性等[3,5,8,10]。

5.2 細(xì)胞計數(shù) 包括細(xì)胞總數(shù)、有核細(xì)胞計數(shù)及紅細(xì)胞計數(shù)等，計數(shù)結(jié)果以**×106/L 單位報告[3,5,8,10]。

5.3 制片 推薦采用細(xì)胞玻片離心法進(jìn)行細(xì)胞及其他有形成分的收集[1-2,4-5]。每次制片取混勻后的腦脊液約500μl（細(xì)胞數(shù)較多時，可適當(dāng)減少用量），離心速度800r/min，離心時間8 ～10min。試管離心沉淀后取沉淀物涂片的方法不適用于腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查。

5.4 染色 瑞-姫染色為腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗的常規(guī)染色方法[1-2,4-5]，必要時加做其它染色法，如墨汁染色、革蘭氏染色、抗酸染色、普魯士藍(lán)染色等。

5.5 閱片 低倍鏡下快速瀏覽全片，結(jié)合常規(guī)細(xì)胞計數(shù)結(jié)果，判斷涂片細(xì)胞收集效果是否滿意。如收集效果不滿意，應(yīng)重新制片。低倍鏡下觀察有無異常細(xì)胞或病原成分，發(fā)現(xiàn)異常成分時轉(zhuǎn)油鏡下進(jìn)一步確認(rèn)和識別[1-2]。

5.6 細(xì)胞分類 在油鏡下進(jìn)行有核細(xì)胞分類，結(jié)果以**%形式表示[1-2]。如全片有核細(xì)胞數(shù)不足50 個，可以“全片可見有核細(xì)胞多少個，其中**細(xì)胞多少個”的形式進(jìn)行描述。

6 報告

細(xì)胞學(xué)報告推薦采用圖文報告形式，內(nèi)容包括常規(guī)、細(xì)胞學(xué)和實驗室提示三部分。

6.1 常規(guī)部分 包括顏色、透明度、球蛋白定性、細(xì)胞總數(shù)、有核細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)及有核細(xì)胞分類等[3,5,8,10]。

6.2 細(xì)胞學(xué)部分 包括圖像和形態(tài)學(xué)描述。用圖像采集系統(tǒng)在鏡下選擇2 ～4 幅有代表性的圖片進(jìn)行報告。對細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行必要的形態(tài)描述，包括細(xì)胞分布、細(xì)胞大小、胞核大小、核形、核染色質(zhì)特點、核仁大小與數(shù)量、胞質(zhì)顏色及內(nèi)容物等。同時報告其他異常成分，如細(xì)菌、真菌及菌絲、寄生蟲、結(jié)晶等[1-2,9]。

6.3 實驗室提示 根據(jù)細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)，結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、影像檢查及實驗室檢查相關(guān)結(jié)果綜合分析，向臨床提供合理性提示和建議[1-2]。

7 涂片保存

報告發(fā)出后，對涂片進(jìn)行分類歸檔，妥善保管，保存時限按各實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行處置，一般保存3 ～5年。

8 生物安全防護(hù)

8.1 標(biāo)本的采集、運送必須符合生物安全要求，防止溢出。如標(biāo)本溢出后，應(yīng)立即對污染的環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行消毒處理。

8.2 檢驗人員在處理標(biāo)本時，需做好個人防護(hù)，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理程序，對有明確傳染性的標(biāo)本按級別進(jìn)行防護(hù)。

8.3 廢棄標(biāo)本及其它相關(guān)的廢棄物，嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)療廢物處理流程。

9 臨床意義[1-10]

9.1 常見細(xì)胞及臨床意義

9.1.1 紅細(xì)胞： 正常腦脊液中不存在紅細(xì)胞。腦脊液中出現(xiàn)紅細(xì)胞，見于各種原因引起的出血，如腦出血（病理性）、蛛網(wǎng)膜下腔出血（病理性）及腰穿損傷出血（非病理性）等。

9.1.2 淋巴細(xì)胞 ： 正常腦脊液中有少量的淋巴細(xì)胞，約占有核細(xì)胞總數(shù)的60%～70%。受抗原刺激后，淋巴細(xì)胞形態(tài)和功能可發(fā)生改變，按形態(tài)學(xué)分為小淋巴細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞、激活淋巴細(xì)胞等。

9.1.3 漿細(xì)胞：正常腦脊液中不存在漿細(xì)胞。漿細(xì)胞的出現(xiàn)，提示體液免疫反應(yīng)的存在。

9.1.4 單核細(xì)胞 ：正常腦脊液中有少量的單核細(xì)胞，形態(tài)與外周血中單核細(xì)胞相似，約占有核細(xì)胞總數(shù)的30%～40%，與淋巴細(xì)胞的比例為4∶6 或3∶7。疾病狀態(tài)下，單核細(xì)胞受到抗原或各種理化因素的刺激時，形態(tài)會發(fā)生變化，表現(xiàn)為胞體、胞核增大，胞膜不規(guī)整，可有瘤狀突起，胞質(zhì)著色加深，胞質(zhì)出現(xiàn)多個空泡，稱為激活單核細(xì)胞。

9.1.5 中性粒細(xì)胞：正常腦脊液中不存在中性粒細(xì)胞，但外周血中的中性粒細(xì)胞可因腰椎穿刺損傷隨紅細(xì)胞帶入，應(yīng)予識別。中性粒細(xì)胞的出現(xiàn)提示機(jī)體存在炎癥反應(yīng)，常見于各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，無診斷特異性；也可見于顱腦外傷、顱腦術(shù)后、腫瘤、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血等。

9.1.6 嗜酸性粒細(xì)胞：正常腦脊液中不存在嗜酸性粒細(xì)胞。嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量或比例明顯增多時，提示機(jī)體存在過敏反應(yīng)或寄生蟲感染的可能。

9.1.7 嗜堿性粒細(xì)胞：正常腦脊液中不存在嗜堿性粒細(xì)胞，它的出現(xiàn)提示存在過敏反應(yīng)，可見于各種炎癥、異物反應(yīng)、寄生蟲感染等，無診斷特異性。

9.1.8 吞噬細(xì)胞：正常腦脊液中不存在吞噬細(xì)胞。紅細(xì)胞吞噬細(xì)胞、含鐵血黃素吞噬細(xì)胞及膽紅素吞噬細(xì)胞的出現(xiàn)提示陳舊性出血。吞噬細(xì)胞吞噬功能強(qiáng)大，可吞噬各種異物，包括變性的白細(xì)胞、吞噬細(xì)胞和病原體等。

9.1.9 脫落細(xì)胞：各種原因?qū)е履X室中的室管膜細(xì)胞、脈絡(luò)叢細(xì)胞及蛛網(wǎng)膜下腔中的蛛網(wǎng)膜細(xì)胞脫落時，可在腦脊液中偶然發(fā)現(xiàn)，無診斷特異性。

9.1.10 腫瘤細(xì)胞：腦脊液中的腫瘤細(xì)胞來源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤和繼發(fā)性腫瘤。前者可見于惡性程度較高的髓母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤、生殖細(xì)胞瘤、室管膜瘤和腦膜瘤等；后者常見于肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、胃癌、白血病及淋巴瘤等向中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移。

9.2 常見細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)及臨床意義

9.2.1 正常腦脊液細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)：外觀呈無色透明，白細(xì)胞數(shù)不高于5×106/L，由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞組成，兩者比值為7:3 或6:4，細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，無明顯的細(xì)胞激活表現(xiàn)。

9.2.2 淋巴細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞計數(shù)可正?；蝻@著升高，鏡下可見淋巴細(xì)胞比例明顯增多，可見激活淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及少量單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等。臨床意義：常見于病毒性腦膜炎，也可見于其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病、免疫性疾病和腫瘤。

9.2.3 中性粒細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞數(shù)中度至顯著升高，鏡下可見大量的中性粒細(xì)胞，可伴少量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞或漿細(xì)胞，有時可見病原菌。臨床意義：提示急性炎性反應(yīng)，見于細(xì)菌性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎滲出期，也可見于腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血及顱腦手術(shù)后等非急性炎性反應(yīng)。

9.2.4 嗜酸性粒細(xì)胞-漿細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞數(shù)可正常或輕中度升高，鏡下可見嗜酸性粒細(xì)胞和漿細(xì)胞比例明顯升高，常伴少量淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等。臨床意義：常見于腦寄生蟲感染，也可見于結(jié)核性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、顱腦手術(shù)后及蛛網(wǎng)膜下腔出血病患者。

9.2.5 淋巴-單核細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞數(shù)基本正?；蜉p度增高，鏡下可見少量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，部分淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞可見激活表現(xiàn)。臨床意義：多見于疾病的恢復(fù)期，需與先前的細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行比較分析。

9.2.6 淋巴-中性粒細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞數(shù)中度至顯著升高，鏡下可見中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞明顯增多，偶見單核細(xì)胞或漿細(xì)胞等。臨床意義：提示炎性反應(yīng)。多見于中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)菌感染治療后、結(jié)核性腦膜炎、真菌感染和顱腦術(shù)后等，需結(jié)合病史、患者臨床癥狀及體征和實驗室相關(guān)檢查結(jié)果綜合考慮。

9.2.7 混合細(xì)胞反應(yīng)型：有核細(xì)胞數(shù)中度至顯著升高，鏡下可見中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種細(xì)胞同時存在，以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，也可伴少量漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的出現(xiàn)。臨床意義：提示炎性反應(yīng)，與淋巴-中性粒細(xì)胞反應(yīng)型臨床意義基本一致。多見于中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)菌感染治療后、結(jié)核性腦膜炎、真菌感染和顱腦術(shù)后等，需結(jié)合病史、患者臨床癥狀及體征和實驗室相關(guān)檢查結(jié)果綜合考慮。部分結(jié)核性腦膜炎患者抗結(jié)核治療后，在相當(dāng)長一段時間內(nèi)細(xì)胞學(xué)可表現(xiàn)為混合細(xì)胞反應(yīng)型，這一特點對診斷結(jié)核性腦膜炎具有一定的參考價值。