姜玉芳，宣小龍，田曉霞

（1.寧夏回族自治區(qū)隆德縣城關(guān)畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏 隆德 756300；2.寧夏回族自治區(qū)隆德縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏 隆德 756300；3.寧夏回族自治區(qū)隆德縣張程畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏 隆德 756300）

近年來(lái)，國(guó)家規(guī)定散養(yǎng)戶(hù)豬強(qiáng)制免疫重大動(dòng)物疫病的種類(lèi)主要有豬瘟、口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病三種[1]，高致病性豬藍(lán)耳病已于2017年退出強(qiáng)制免疫接種計(jì)劃。豬瘟、豬口蹄疫（O型口蹄疫，A型口蹄疫）仍然實(shí)施國(guó)家強(qiáng)制免疫項(xiàng)目。豬瘟（classical swine fever，CSF）是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、發(fā)熱、接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性，本病在自然條件下只感染豬，不同年齡、性別、品種的豬和野豬都易感，一年四季均可發(fā)生。口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見(jiàn)于人和其他動(dòng)物。其臨診特征為口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰。兩種疫病是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病，接種疫苗是目前控制疫病的主要措施。規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的豬實(shí)行程序化免疫接種，免疫抗體水平一直維持在80%以上，散養(yǎng)戶(hù)的豬以春秋兩季集中免疫加平時(shí)加強(qiáng)免疫相結(jié)合的方式免疫接種，免疫抗體水平不太理想，易出現(xiàn)抗體水平不達(dá)標(biāo)甚至為0。為提高免疫抗體水平，本試驗(yàn)采取分類(lèi)分段免疫方法[2]，分類(lèi)即在同步免疫接種時(shí)，對(duì)豬口蹄疫O型疫苗、A型疫苗、豬瘟疫苗分別注射在豬的肩頸、臀部等不同部位，避免在同一部位免疫接種；分段就是免疫接種一種或兩種疫苗后間隔一定時(shí)間再進(jìn)行另外一種或兩種疫苗的免疫接種。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

散養(yǎng)豬，對(duì)豬的品種、年齡、體重、飼養(yǎng)環(huán)境、生物安全管理水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并劃分，日齡在 80 d以下初次免疫的豬做母源抗體檢測(cè)，并做好記錄。分類(lèi)免疫試驗(yàn)選擇相同品種、年齡、體重、飼養(yǎng)環(huán)境的散養(yǎng)豬400頭；分段免疫試驗(yàn)選擇母源抗體相同的80 d以下未免疫的散養(yǎng)豬90頭。

1.2 疫苗

豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗（細(xì)胞源），國(guó)藥集團(tuán)揚(yáng)州威客生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0418001，用量為1頭份/頭。O型口蹄疫疫苗，楊凌金海生物技術(shù)有限公司，批號(hào)JH170102，用量為2 ml/頭。A型口蹄疫疫苗，中農(nóng)威特生物科技股份有限公司，批號(hào)C170802J，用量為1 ml/頭。

1.3 試劑

豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司，規(guī)格96頭份)；改進(jìn)型口蹄疫病毒O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，規(guī)格50～100份血清樣品）；改進(jìn)型口蹄疫病毒A型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，規(guī)格50～100份血清樣品）。

1.4 試驗(yàn)方案及影響因素設(shè)計(jì)

按照散養(yǎng)戶(hù)豬重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫要求，制定分類(lèi)分段6個(gè)試驗(yàn)因素12個(gè)試驗(yàn)。

分類(lèi)試驗(yàn)即對(duì)豬瘟、口蹄疫實(shí)行分類(lèi)接種（豬瘟、O型口蹄疫、A型口蹄疫3個(gè)試驗(yàn)因素），間隔一定時(shí)間（5～7 d）進(jìn)行疫苗的免疫接種，分3個(gè)試驗(yàn)（見(jiàn)表1）。A組試驗(yàn)數(shù)量120頭，同一接種部位同時(shí)免疫豬瘟、O型口蹄疫、A型口蹄疫三種疫苗；B組試驗(yàn)數(shù)量130頭，第一次免疫口蹄疫疫苗（分別接種不同部位），間隔5～7 d后第二次免疫豬瘟疫苗；C組試驗(yàn)數(shù)量150頭，第一次免疫豬瘟疫苗，間隔5～7 d后第二次免疫口蹄疫疫苗（分別接種不同部位）。連續(xù)7 d測(cè)體溫，觀察有無(wú)精神萎靡、皮膚發(fā)紅、嘔吐、呼吸急促、食欲減退、死亡等免疫副反應(yīng)，記錄數(shù)量。

分段試驗(yàn)是根據(jù)抗體產(chǎn)生曲線(xiàn)時(shí)間變化，在分類(lèi)免疫基礎(chǔ)上，再經(jīng)過(guò)一定時(shí)間采取加強(qiáng)免疫（10～20 d、20～30 d、30～40 d3個(gè)試驗(yàn)因素），以此來(lái)提高所有免疫項(xiàng)目的抗體水平，分9個(gè)試驗(yàn)（見(jiàn)表2）。第一組試驗(yàn)在分段免疫后間隔10～20 d加強(qiáng)免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗，第二組試驗(yàn)在分段免疫后間隔20～30 d加強(qiáng)免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗，第三組試驗(yàn)在分段免疫后間隔30～40 d加強(qiáng)免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗；第四組試驗(yàn)在分段免疫后間隔10～20 d加強(qiáng)免疫豬O、A型口蹄疫疫苗，第五組試驗(yàn)在分段免疫后間隔20～30 d加強(qiáng)免疫豬O、A型口蹄疫疫苗，第六組試驗(yàn)在分段免疫后間隔30～40 d加強(qiáng)免疫豬O、A型口蹄疫疫苗；第七組試驗(yàn)在分段免疫后間隔10～20 d加強(qiáng)免疫豬瘟疫苗，第八組試驗(yàn)在分段免疫后間隔20～30 d加強(qiáng)免疫豬瘟疫苗，第九組試驗(yàn)在分段免疫后間隔30～40 d加強(qiáng)免疫豬瘟疫苗。每組10頭，分別于分段免疫接種前，分段免疫后進(jìn)行采血，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)抗體水平。

表1 散養(yǎng)豬分類(lèi)免疫試驗(yàn)方案

表2 分段因素試驗(yàn)檢測(cè)

表3 不同試驗(yàn)組免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

1.5 免疫

所有免疫按照春秋兩季重大動(dòng)物疫病集中免疫執(zhí)行，免疫劑量：按照疫苗規(guī)定計(jì)量注射，對(duì)照組進(jìn)行生理鹽水注射。免疫方式按照《口蹄疫免疫接種技術(shù)規(guī)范》NYT 1955-2010中對(duì)疫苗的使用要求和日常防疫員實(shí)際行為開(kāi)展免疫，免疫方式均為皮下注射。

1.6 采血

按照抗體監(jiān)測(cè)采血要求和前面試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求進(jìn)行監(jiān)測(cè)采血，并做好記錄

1.7 檢測(cè)方法

采用《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 豬瘟診斷技術(shù)》GB/T 16551-2008、《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 口蹄疫診斷技術(shù)》GB/T 18935-2003進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 不同試驗(yàn)組免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

對(duì)表3數(shù)據(jù)進(jìn)行整理后，采用SPASS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方分析得出，A、B、C三組相比較，A組出現(xiàn)免疫副反應(yīng)總數(shù)達(dá)18例，免疫副反應(yīng)15%；B組免疫副反應(yīng)總數(shù)9例，免疫副反應(yīng)6.9%；C組免疫副反應(yīng)11例，免疫副反應(yīng)7.3%。A、B、C三組相比，B組與C組差異不顯著，B組、C組與A組差異顯著，說(shuō)明分類(lèi)免疫副反應(yīng)低的為B組和C組，所以，在重大動(dòng)物疫病免疫接種過(guò)程中，可采用B組或C組方案進(jìn)行免疫接種。

2.2 不同組免疫抗體合格率試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

對(duì)表4數(shù)據(jù)整理后，采用SPASS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)，分析得出CSF分段之前與分段之后九組數(shù)據(jù)差異不顯著，也就是說(shuō)，CSF進(jìn)行免疫接種，只要保證首免科學(xué)、規(guī)范、到位，再間隔10～20 d、20～30 d、30～40 d，注射部位在肩頸部或臀部，實(shí)驗(yàn)室免疫抗體水平均保持在80%以上，抗體水平合格率均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)以上。

FMD分段之前與分段之后前六組數(shù)據(jù)差異極顯著。第一組A-FMD免疫抗體合格率76.2%（分段前）80.1%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率74.5%（分段前）79.6%（分段后）。第二組A-FMD免疫抗體合格率76.3%（分段前）85.6%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.0%（分段前）84.9%（分段后）。第三組A-FMD免疫抗體合格率75.9%（分段前）80.2%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.8%（分段前）81.2%（分段后）。第四組A-FMD免疫抗體合格率73.6%（分段前）83.3%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率77.0%（分段前）82.3%（分段后）。第五組A-FMD免疫抗體合格率74.8%（分段前）88.7%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率77.2%（分段前）88.1%（分段后）。第六組A-FMD免疫抗體合格率78.3%（分段前）83.1%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.9%（分段前）82.5%（分段后）?？ǚ綑z驗(yàn)得出FMD分段之后第七、八、九組免疫抗體合格率與前六組結(jié)果差異極顯著，從表4可以看出，9組數(shù)據(jù)免疫抗體合格率均達(dá)到70%以上，符合國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，尤其是第七組、第八組、第九組A-FMD免疫抗體合格率、O-FMD免疫抗體合格率與前六組相比較，前六組均高于73%，第二組（免疫間隔20d～30 d）、第四組（免疫間隔10～20 d）FMD免疫抗體合格率與其他第一組、第三組、第五組、第六組結(jié)果差異顯著。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)免疫間隔10～20 d、20～30 d、30～40 d免疫不同疫苗時(shí)動(dòng)物血清的抗體水平得出CFS免疫抗體合格率與分段因素?zé)o關(guān)，F(xiàn)MD免疫抗體合格率在分段20～30 d間隔時(shí)最佳，即采用第二組方案最佳。

表4 不同試驗(yàn)組不同間隔時(shí)間免疫抗體合格率（為均數(shù)）

3 試驗(yàn)結(jié)論及展望

3.1 試驗(yàn)結(jié)論

通過(guò)分類(lèi)分段試驗(yàn)及研究結(jié)果顯示，散養(yǎng)戶(hù)豬分類(lèi)免疫的確可以降低免疫副反應(yīng)造成的損失，尤其對(duì)豬口蹄疫（O、A）與豬瘟疫苗間隔5～7 d進(jìn)行免疫注射，副反應(yīng)最小，均低于7.3%；從表4數(shù)據(jù)分析得出，分段免疫過(guò)程中，豬瘟分段免疫差異不顯著，所以豬瘟在首次免疫中做好免疫注射就能達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。但是口蹄疫必須進(jìn)行加強(qiáng)免疫，免疫間隔時(shí)間最佳方案為間隔20～30 d時(shí)再次免疫口蹄疫疫苗，方能達(dá)到最佳效果。

3.2 展望

影響免疫抗體水平因素雜多，既有主觀因素，又有客觀因素。主觀因素比如每個(gè)防疫技術(shù)人員操作技能、免疫注射消毒、疫苗保存運(yùn)輸，是否按照劑量要求操作和按照疫苗使用說(shuō)明書(shū)操作等等。客觀因素包括畜禽個(gè)體差異，飼養(yǎng)環(huán)境、應(yīng)激、科學(xué)飼喂，疫苗生產(chǎn)廠(chǎng)家等等。但從多年的重大動(dòng)物疫病免疫接種副反應(yīng)統(tǒng)計(jì)匯總及此次試驗(yàn)結(jié)果可以看出，同時(shí)進(jìn)行豬瘟、口蹄疫免疫接種，副反應(yīng)很大，不食、發(fā)燒、死亡、流產(chǎn)等比較嚴(yán)重，進(jìn)行分類(lèi)免疫可以大大降低免疫副反應(yīng)造成的經(jīng)濟(jì)損失，尤其在分類(lèi)免疫過(guò)程中不能同時(shí)接種兩種以上疫苗，間隔5～7 d，免疫副反應(yīng)最小，所以在首次免疫過(guò)程中分類(lèi)免疫特別必要。但為了有效提高免疫抗體水平，必須進(jìn)行加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫的時(shí)間間隔點(diǎn)20～30 d，也就是分段免疫的時(shí)間點(diǎn)為20～30 d，分段免疫是根據(jù)免疫抗體應(yīng)答過(guò)程中產(chǎn)生抗體水平的曲線(xiàn)和抗體峰值進(jìn)行有必要的再次加強(qiáng)免疫，由于時(shí)間點(diǎn)把握不準(zhǔn)確都會(huì)影響抗體水平和免疫質(zhì)量，通過(guò)此次試驗(yàn)，再次驗(yàn)證了分段加強(qiáng)免疫的最佳時(shí)間段為20～30 d。此試驗(yàn)的驗(yàn)證對(duì)于今后廣大獸醫(yī)工作者開(kāi)展免疫服務(wù)中能夠提供準(zhǔn)確的技術(shù)指導(dǎo)和參考，對(duì)于全面有效提高豬瘟、口蹄疫免疫接種質(zhì)量起到一定的參考依據(jù)，并有一定的推廣和應(yīng)用價(jià)值。