梁春瀅，李小江，陳虹蓁

（廣東省藥品監(jiān)督管理局審評認證中心，廣東 廣州 510080）

根據(jù)計量學溯源標準給出的定義，校準品是具有在校準函數(shù)中用作獨立變量值的參考物質(zhì)[1]。而現(xiàn)行法規(guī)《體外診斷試劑注冊管理辦法》從產(chǎn)品預期使用風險的角度，對體外診斷試劑校準品明確了分類管理，即與二、三類體外診斷試劑配合使用的校準品，則按對應試劑的類別進行管理，與一類試劑配合使用時，要按二類產(chǎn)品管理[2]。然而，即便法規(guī)賦予的風險管理類別有所不同，其賦值準確度和實現(xiàn)計量學溯源的要求卻是等同的。因此，體外診斷試劑校準品生產(chǎn)企業(yè)均應嚴格根據(jù)分析物特點和國內(nèi)外指南及標準承擔起校準品的量值溯源研究工作。

近年來，試劑廠家明顯重視和規(guī)范產(chǎn)品校準品的溯源工作，這得益于法規(guī)體系的不斷完善和與國際標準接軌進程的推進，從監(jiān)管和技術(shù)兩方面促進了該項研究工作的發(fā)展。

1 從法規(guī)層面明確溯源工作的要求

現(xiàn)行《體外診斷試劑注冊管理辦法》中有明確規(guī)定：中國食品藥品檢定研究院負責組織國家標準品、參考品的制備和標定工作[2]，當中對國家標準品的制定工作明確了責任主體和提出了要求，從而推進了國家標準品的制備工作，為校準品溯源提供參考物質(zhì)基礎。另外，國家食品藥品監(jiān)督管理總局在2014年發(fā)布的第44號文中明確提出：校準品應提交完整的溯源性文件。由此，作為上市前評估校準品有效性的證明性文件，生產(chǎn)企業(yè)則不可避免地重視起校準品的溯源工作。

2 國內(nèi)外標準實施規(guī)范了溯源工作

國際標準化組織于2003年發(fā)布實施ISO 17511體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性、ISO 18153體外診斷醫(yī)療器械：生物樣品中量的測量：酶催化濃度校準物質(zhì)和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性等標準，有利于指導和規(guī)范各國標準物質(zhì)的計量學溯源工作。而國內(nèi)也對上述兩個標準進行了轉(zhuǎn)化，于2008年開始實施GB/T21415-2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性，另外YY/T0638-2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)中酶催化濃度賦值的計量學溯源性、JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示、YY/T1455-2016應用參考測量程序?qū)γ复呋钚詽舛荣x值及其不確定度評定指南等相繼發(fā)布，不僅對量值的傳遞途徑進行了規(guī)范，還對具體賦值的不確定度等內(nèi)容提供了研究方法。

3 溯源工作研究情況

基于國內(nèi)外標準的支持，從校準品廠家提供的注冊申報資料-溯源性文件可以看出，廠家對校準品計量學溯源的認知有所提高，研發(fā)過程基本能依據(jù)計量學溯源標準和相應指南逐步規(guī)范溯源性文件。目前生產(chǎn)企業(yè)主要依據(jù)GB/T21415-2008來開展校準品溯源工作的研究，下面則從溯源文件中包含的三部分內(nèi)容來闡述校準品廠家的溯源工作情況。

3.1 校準傳遞方案的選擇 通過對校準品的溯源性文件分析得知，目前相當一部分校準品廠家會選擇GB/T21415-2008標準中5.6的情況[1]進行溯源，即溯源鏈的終端為制造商選定的測量程序，即便分析物已經(jīng)有國際約定的參考物質(zhì)或參考方法。選擇此方案一方面是廠家從可獲得性和成本方面考慮，但從量值傳遞本身而言，會帶進更多系統(tǒng)和操作因素的影響（因為廠家未必都完全了解選定的測量程序），不利于賦值和不確定度的評定，為保證校準品量值的準確性和互換性，應盡可能溯源至分析物現(xiàn)行的最高計量級別；另一方面原因是客觀存在的，分析物目前國際尚無約定參考物質(zhì)和參考方法，在計量水平上只能溯源至選定的測量程序，以自身抗體相關(guān)分析物較為常見。

另外還有較為普遍的情況是，分析物如國家已明確了具體的參考方法或有標準物質(zhì)的，廠家一般能選擇其作為溯源鏈的終端，如《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中有明確，血紅蛋白的結(jié)果無論采用何種原理檢測，均應溯源至ICSH推薦的氰化高鐵血紅蛋白分光光度法[3]，而WS/T341-2011血紅蛋白測定參考方法中則詳細介紹了該參考方法。另外衛(wèi)生部頒布很多如WS/T417-2013 γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶催化活性濃度測定參考方法、WS/T349-2011 α-淀粉酶催化活性濃度測定參考方法等標準均有指定了具體分析物質(zhì)的參考方法。因此，校準品廠商在研發(fā)階段可根據(jù)分析物具體的情況，盡可能結(jié)合臨床實驗室中的校準方案、相關(guān)標準及參考物質(zhì)可獲得性等方面去選擇校準傳遞方式，從而建立和保證分析物的計量學溯源。

3.2 賦值及測量不確定度的研究 標準GB/T21415-2008指出：校準品應具有賦值和已知的測量不確定度[1]，也可理解為在量值傳遞過程每一級別的校準品均應有對應賦值結(jié)果和測量不確定度。通常，廠家申報的校準品在溯源鏈中屬于產(chǎn)品校準品的等級，也是提供給終端客戶如醫(yī)院實驗室用來校準檢測系統(tǒng)用。目前國產(chǎn)已注冊的校準品預期用途基本是明確與廠家自己的檢測系統(tǒng)配套使用，故賦值和不確定度通常圍繞常規(guī)測量程序（配套的體外診斷試劑和檢測儀器）來進行研究，相應地用戶在使用過程根據(jù)說明書預期用途，局限在對配套的檢測系統(tǒng)進行校準，這也是國內(nèi)商業(yè)化校準品的短板，目前校準水平尚未達到如朗道、伯樂等知名廠商的校準品，其賦值結(jié)果可校準不同的測量系統(tǒng)。這除了與校準品的計量學溯源有關(guān)外，還與校準品原材料的穩(wěn)定性和純度密切相關(guān)。

本部分闡述的賦值，是對產(chǎn)品校準品的賦值，是用高一級參考物質(zhì)校準常設測量程序后，用該常設測量程序檢測產(chǎn)品校準品得到一組結(jié)果，該結(jié)果可通過統(tǒng)計學處理（中位數(shù)或均值等）或修正最終成為固定的量值，而測量不確定度則是表征該量值分散性的非負參數(shù)[4]，在臨床上可以用來表征檢測真值的分布范圍，對于輔助臨床檢驗結(jié)果的解釋具有重要意義。另外根據(jù)標準GB/T21415-2008要求：制造商應提供賦值的不確定度[1]，因此，廠家除了提供校準品具體的量值外，還應報告該賦值下的測量不確定度，以保證臨床檢驗結(jié)果的準確性。從注冊申報的溯源性文件可知，目前廠家均能提供賦值和測量不確定度研究的具體過程，但針對不確定度的研究與相關(guān)標準和指南的要求尚存在一定差距，主要體現(xiàn)以下方面：（1）未明確不確定度的評定方法：不確定度的評定方法有“GUM”法、“自上而下”法、“蒙特卡洛”（MCM法）等，目前大部分廠家會選擇前兩種方法，評定方法通常與測量模型、數(shù)據(jù)分布情況有關(guān)。基于“GUM”法的具體研究流程可以參考標準JJF1059.1-2012，MCM法則可參考標準JJF1059.2-2012來評定。目前提供的不確定度研究資料中，最為典型的情況是研究方案中未明確評價不確定度所使用的方法，而直接得出校準品的測量不確定度=校準品賦值過程標準差的結(jié)論。（2）片面識別和錯誤歸類測量不確定度的來源：測量不確定度通常由多個分量組成，是基于正確定義被測量物質(zhì)后（包括組分、制備方法和檢測原理等），識別整個測量過程的影響因素，進而將重要的影響因素作為不確定度的來源，貢獻量小的因素忽略不計的過程。識別不確定度來源的原則是不遺漏且不重復，獲取不確定度的分量主要步驟為：①采用因果圖作為識別工具來確定各不確定度分量的來源；②將納入的不確定度來源進行分類評定（即標準不確定度A類評定和B類評定）；③根據(jù)不同分類采用不同的方法或測量模型量化具體的不確定度分量。目前廠家識別測量不確定來源不充分主要體現(xiàn)在未針對被分析物和測量流程考慮影響因素，如所有的分析物均只考慮校準品的不均勻性和不穩(wěn)定性引起的不確定度，未充分考慮測量分析前對分析物的制備、分析中測量系統(tǒng)操作和分析后數(shù)據(jù)修約和統(tǒng)計等引起的不確定度。另外，在衛(wèi)生部標準關(guān)于不確定度評定指南中有提及，酶類分析物基本都應考慮溫度和pH兩個分量作為不確定度的來源[5]。

此外，溯源性文件存在的問題還體現(xiàn)在容易錯誤歸類不確定度的來源，主要原因是對標準不確定度A類評定和B類評定定義理解不準確，或認為歸為B類評定后可以避免大量復雜的統(tǒng)計工作，直接可參考經(jīng)驗數(shù)據(jù)等信息即可，這樣往往導致計算不確定度分量時的結(jié)果差別較大。

3.3 互換性研究 為了實現(xiàn)不同常規(guī)測量系統(tǒng)間測量臨床樣本的結(jié)果具有可比性，也為了判斷校準品量值的正確傳遞，制造商需要在溯源工作中進行校準品的互換性研究。根據(jù)溯源性文件中的互換性研究情況分析，主要總結(jié)以下兩方面：（1）互換性的判斷標準各異：評價兩個測量程序之間的測量結(jié)果是否具有互換性，首先應確定互換性的判斷標準。而從資料可知各廠家依據(jù)的判斷標準有所不同，大致可歸納為：①依據(jù)EP9-A3指南，經(jīng)校準品校準后的常規(guī)測量程序與參考測量程序測量的兩組測量結(jié)果之間是否具有顯著性差異來判斷；②根據(jù)EP14-A3或《WS/T356-2011基質(zhì)效應和互通性指南》，校準品的測量結(jié)果是否落在參考測量程序和常規(guī)測量程序檢測結(jié)果回歸方程的95%預測區(qū)間內(nèi)；③依據(jù)IFCC互換性評價更新方案，校準品在參考測量程序和常規(guī)測量程序間的偏移±不確定度是否小于該項目的醫(yī)學允許偏移[6]。上述判斷標準選擇均有一定的依據(jù)，但也有研究表明，相同的分析物如用不同的標準進行判斷時，會出現(xiàn)不同的結(jié)論，目前EP14-A3、IFCC方案的評價標準是臨床實驗室中較為常用的判斷標準。（2）驗證互換性的樣本考慮不足：根據(jù)標準GB/T21415-2008的要求，互換性應使用參考測量程序和常規(guī)測量程序同時檢測一組相關(guān)的人體樣本，以評估校準品的互換性。目前廠家選擇樣本存在的問題主要體現(xiàn)在：①選擇的樣本為添加純品的樣品，非標準要求的天然真實樣本；②樣本例數(shù)無統(tǒng)計學意義；③樣本濃度分布過于集中，未覆蓋測量系統(tǒng)的可測量范圍；④重復使用賦值過程的一組人體樣本來進行互換性研究；⑤未經(jīng)評估而選擇大量凍存樣本。

4 改進建議

針對文中提及校準品溯源工作現(xiàn)狀的不足及校準品校準測量系統(tǒng)的局限性，提出以下建議供參考：（1）生產(chǎn)企業(yè)盡可能收集和學習計量學溯源相關(guān)標準和指南文件：目前的標準和指南基本比較完善，針對比較復雜的研究與統(tǒng)計方法附錄已給出對應的例子作為對照理解，可操作性更強。另外更有專有產(chǎn)品的對應指南供作參考，如酶類物質(zhì)，因此，校準品生產(chǎn)企業(yè)基本能從標準和指南中得到具體的規(guī)范指導。（2）校準品應溯源至當前最高計量水平，提高校準品的量值準確度：目前部分廠商的溯源工作還停留在為符合注冊審評審批的最低要求，出于成本和縮減上市時間考慮，往往選擇市面普通的上市同類產(chǎn)品測量系統(tǒng)作為溯源的終端，會造成校準品水平參差不齊，且局限在校準本檢測系統(tǒng)中使用，甚至到臨床使用中出現(xiàn)檢測結(jié)果互換性不過關(guān)的情況。因此，建議針對該情況，如校準品不能溯源至國際單位制（SI），也盡可能選擇最高參考物質(zhì)或參考方法作為溯源終端，另外選擇參考物質(zhì)應來源正規(guī)，保證參考物質(zhì)的正確性。（3）建議生產(chǎn)企業(yè)積極參與到臨床實驗室的室間評價工作：據(jù)了解，國內(nèi)已有不少生產(chǎn)企業(yè)積極參與到臨床實驗室的室間評價工作中，這對驗證產(chǎn)品檢測結(jié)果準確性和提高企業(yè)檢測能力具有重要的意義，尤其對計量學溯源過程不確定度評定析、互換性評價等方面獲得臨床使用上的指導意見。（4）建立收集用戶端校準結(jié)果的數(shù)據(jù)庫：建議生產(chǎn)企業(yè)借鑒知名廠家的做法，開發(fā)常規(guī)測量系統(tǒng)時能考慮自動收集臨床用戶端使用過程的校準、質(zhì)控數(shù)據(jù)，或為客戶端定期進行校準等方面的數(shù)據(jù)，集成一個回顧性分析數(shù)據(jù)庫，對以后評估測量系統(tǒng)的檢測水平和不斷分析改進提供研究和分析基礎。