孫繼超 陳晨 張東輝

摘要：氟苯尼考是氯霉素類廣譜抗菌化學(xué)藥物，主要用于敏感細(xì)菌所致的家禽、家畜和魚的細(xì)菌性疾病，特別是對(duì)呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染效果顯著。主要從氟苯尼考的理化性質(zhì)、臨床藥效、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、檢測(cè)方法等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為氟苯尼考的開發(fā)應(yīng)用和殘留檢測(cè)提供參考。

關(guān)鍵詞：氟苯尼考;理化性質(zhì);臨床藥效;藥物代謝動(dòng)力學(xué);檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)： S859.1? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A? 文章編號(hào)：1002-1302（2020）20-0031-06

氟苯尼考（florfenicol）別稱為氟甲砜霉素、氟洛芬、氟苯尼考，它的結(jié)構(gòu)如圖1所示，化學(xué)名稱為2，2-二氯-N-{（1R，2S）-3-氟-1-羥基-1-[4-（甲基磺?；┍?2-基]乙基}乙酰胺，分子式為C12H14Cl2FNO4S，分子量為358.22。氟苯尼考為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無臭，在二甲基甲酰胺中極易溶解，在甲醇中可溶解，在冰醋酸中微溶，在水或三氯甲烷中極微溶解，其0.5%水溶液中的pH值為4.5～6.5[1]。氟苯尼考是甲砜霉素的3位氟衍生物，屬新型酰胺醇類抗生素，其在動(dòng)物中的代謝產(chǎn)物為氟苯尼考胺、氟苯尼考醇、氟苯尼考草酸銨和單氯氟苯尼考等，其中氟苯尼考胺為最主要的代謝產(chǎn)物，且大部分存在于動(dòng)物肝臟中。

目前，氟苯尼考被廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床防治革蘭氏陽性、革蘭氏陰性以及甲砜霉素耐藥性細(xì)菌病，因其抗菌譜廣、吸收良好、體內(nèi)分布廣泛，特別是氟苯尼考不同于氯霉素和甲砜霉素，它不含硝基，不會(huì)造成劑量相關(guān)、可逆性骨髓抑制或不可逆轉(zhuǎn)的再生障礙性貧血[2-3]，也不會(huì)致畸、致癌、致突變。1988年，美國先靈葆雅公司成功研制出氟苯尼考，先后在日本、挪威、法國、英國、奧地利、墨西哥上市，用于豬、禽、魚細(xì)菌性疾病的治療。1999年氟苯尼考在我國獲得批準(zhǔn)為二類新獸藥，被用于預(yù)防和治療豬傳染性胸膜肺炎、黃痢、白痢，以及巴氏桿菌引起的牛呼吸道感染，雞大腸桿菌病、禽霍亂等細(xì)菌性疾病。

1 藥效學(xué)

氟苯尼考是甲砜霉素的單氟衍生物，其作用機(jī)制及抗菌譜與甲砜霉素、氯霉素相同，能通過抑制細(xì)菌70S核糖體，與50S亞基結(jié)合，抑制肽?；D(zhuǎn)移酶活性，從而抑制肽鏈的延伸，干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，因而對(duì)革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌均有抑制作用。甲砜霉素和氯霉素耐藥菌通常會(huì)產(chǎn)生乙酰轉(zhuǎn)移酶，該酶能夠使甲砜霉素和氯霉素α-甲基位上的-OH乙?；?，從而失去藥理活性。而氟苯尼考則因α-甲基上的-OH被-F取代，不會(huì)受乙酰轉(zhuǎn)移酶的破壞，所以甲砜霉素和氯霉素具有耐藥性的菌株仍會(huì)對(duì)氟苯尼考敏感。

2 抗菌作用

氟苯尼考和氯霉素一樣，是一種廣譜、抑菌的抗生素，對(duì)許多革蘭氏陽性菌和陰性菌有效[4]，雖然氟苯尼考與氯霉素、甲砜霉素的作用位置相同，但其藥理成分使其對(duì)已失活的細(xì)菌具有更強(qiáng)的抵抗力。研究發(fā)現(xiàn)，氟苯尼考對(duì)耐氯霉素的大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、普通變形桿菌、鼠傷寒沙門氏桿菌、金黃色葡萄球菌有效[5]。

Doublet等發(fā)現(xiàn)，氟苯尼考中的抗性基因floR是大腸桿菌轉(zhuǎn)座子TnfloR 4284 bp中的一部分;floR是一種調(diào)節(jié)基因，TnfloR由floR基因組成;試驗(yàn)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)座子TnfloR具有潛在的遷移能力[6]。Kim等預(yù)測(cè)由1 122個(gè)由核苷酸組成的巴氏桿菌可轉(zhuǎn)移R質(zhì)粒衍生而來的氟苯尼考耐藥基因（pp-flo）的氨基酸序列與非酶抗氯霉素基因（cml-A）的同源性為47.4%[7]。pp-flo基因位于可轉(zhuǎn)移R質(zhì)粒的磺酰胺抗性基因的下游區(qū)域。Keyes等于1999年檢測(cè)到了雞源的氟苯尼考耐藥基因[8]。Cloeckaert等從家禽中分離出的沙門氏菌包含新的floR基因，其對(duì)氯霉素、氟苯尼考具有交叉耐藥性[9]。

在哺乳動(dòng)物中，氟苯尼考可用于治療與溶血性巴氏桿菌、睡眠嗜血桿菌有關(guān)的牛呼吸道疾病。Shin等對(duì)氟苯尼考用于豬呼吸道病原的研究發(fā)現(xiàn)，氟苯尼考效果優(yōu)于研究中使用的其他抗生素，在體外也顯示出較高的抗菌活性，其最低抑菌濃度（MIC）為0.12～4.00 mg/mL[10]。除抗生素耐藥性外，哺乳動(dòng)物中一個(gè)與氟苯尼考有關(guān)的并發(fā)癥是通過抑制吞噬作用或通過改變中性粒細(xì)胞形態(tài)減少氟苯尼考對(duì)免疫反應(yīng)的影響。

3 藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究

氟苯尼考給藥后在機(jī)體內(nèi)廣泛分布，通常在大多數(shù)組織如腦脊液中濃度較高。關(guān)于氟苯尼考的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究已經(jīng)在家畜、家禽、經(jīng)濟(jì)動(dòng)物以及水產(chǎn)養(yǎng)殖生物上進(jìn)行。

有大量的關(guān)于氟苯尼考在家畜中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，例如：程培培通過肌注復(fù)方氟苯尼考注射液，測(cè)定了其在豬體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，顯示達(dá)峰時(shí)間為（2.09±0.59） h，最大血藥濃度為（8.42±1.85） μg/mL，清除率為（203.75±3139） mL/h，藥時(shí)曲線下面積為（200.09±28.80） h·μg/mL[11]。黃仁美通過對(duì)仔豬肌注氟苯尼考注射液，測(cè)定藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果顯示其分布半衰期為62.12 min，消除半衰期為28484 min，藥時(shí)曲線下面積為 75 837 h·μg/mL，達(dá)峰時(shí)間為100.00 min，最大血藥濃度為 118.96 mg/L[12]。Wilson等將氟苯尼考用于治療牛乳房炎研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，氟氯青霉素與氯青霉素相比無明顯差異，對(duì)牛乳腺炎的療效不佳[13]。Varma等通過單次靜脈和口服給予小牛犢22 mg/kg氟苯尼考，結(jié)果顯示靜脈內(nèi)給藥后，消除半衰期為171.9 min，分配半衰期為5.9 min;體清除率和表觀分布體積分別為 2.85 mL/（kg·min） 和0.78 L/kg;口服氟苯尼考，禁食12 h后的生物利用度為0.88，投喂后 5 min 的生物利用度為0.65;表明口服給予的小牛對(duì)氟苯尼考有吸收延遲的現(xiàn)象[14]。Park等在單次通過靜脈內(nèi)或口服給予6只健康狗20 mg/kg氟苯尼考后，進(jìn)行了氟苯尼考的生物利用度和藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究[15]。通過高效液相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定血清中的氟苯尼考濃度，并分析靜脈或口服施用后的血漿濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)[15]。靜脈、口服施用的全身清除率分別為103 L·h/kg和0.49 L·h/kg，穩(wěn)態(tài)分布容積分別為1.45 L/kg和0.82 L/kg;氟苯尼考在靜脈注射后迅速分布并消除，靜脈、口服施用的消除半衰期分別為1.11 h和 0.94 h[15]。Koc等測(cè)定了靜脈和肌肉注射氟苯尼考的新西蘭白兔藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果顯示回收率為 （85.00±633）%，測(cè)出限和定量限分別為0.03、010 μg/mL[16]。Park等單次靜脈和口服給予家兔20 mg/kg氟苯尼考后，通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測(cè)定了氟苯尼考及其活性代謝物氟苯尼考胺的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù);靜脈注射后，氟苯尼考的終末半衰期、穩(wěn)態(tài)分布容積、全身清除率和平均停留時(shí)間分別為（0.90±0.20） h、（0.94±0.19） L/kg、（0.63±0.06） L/（h·kg）和（1.50±034） h;口服給藥后，在（0.90±0.38） h時(shí)觀察到氟苯尼考的峰濃度為（7.96±2.75） mg/mL;氟苯尼考的半衰期和生物利用度分別為（1.42±0.56） h和76.23%±12.02%;對(duì)兔子靜脈注射、口服氟苯尼考，結(jié)果顯示目標(biāo)物靜脈注射和口服的峰濃度分別為（5.06±1.79）、（3.38±0.97） mg/mL，達(dá)峰時(shí)間分別為（0.88±0.78）、（2.10±1.08） h，消除半衰期為（184±0.17）、（2.35±0.94） h[17]。Pentecost等通過給公羊駝靜脈注射20 mg/kg氟苯尼考，測(cè)定靜脈注射后的清除率和穩(wěn)態(tài)體積分別為 5 mL/（min·kg） 和775 mL/kg，平均停留時(shí)間為28 h;給藥后20 h，血清中的氟苯尼考濃度維持在1.0 μg/mL以上;發(fā)現(xiàn)血管外給藥后氟苯尼考吸收速率和程度的差異可能影響血管外給藥后對(duì)氟苯尼考的吸收[18]。

氟苯尼考在家禽中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究亦有很多。Shen等單次肌肉注射和口服給予健康和被大腸桿菌感染的肉雞30 mg/kg氟苯尼考發(fā)現(xiàn)，在患病肉雞中，消除半衰期和表觀分布容積均減少;在對(duì)感染雞進(jìn)行靜脈注射和口服給藥后，氟苯尼考的消除半衰期分別為129和104 min，肌肉注射和口服后生物利用度分別為87%和71%[19]。梅獻(xiàn)等給鴨單劑量肌內(nèi)注射30 mg/kg氟苯尼考，并測(cè)定鴨體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù);結(jié)果顯示，健康鴨體內(nèi)的峰濃度為（2288±3.11） μg/mL，表觀分布容積為（2.39±0.81） L/kg，體清除率為（0.6±0.11） L/（h·kg），消除半衰期為（2.57±0.51） h，藥時(shí)曲線下面積為 （47.28±7.87） h·μg/mL;在感染鴨體內(nèi)的峰濃度為（19.77±1.82） μg/mL，表觀分布容積為（2.44±0.46） L/kg，體清除率為（063±0.08） L/（h·kg），消除半衰期為（2.74±0.54） h，藥時(shí)曲線下面積為（4811±6.62） h·μg/mL[20]。Switaa等在火雞中通過非房室方法計(jì)算氟苯尼考的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果顯示靜脈注射后 30 mg/kg 氟苯尼考、甲砜霉素、氯霉素的平均停留時(shí)分別為（3.37±0.63）、（2.43±0.29）和（2.12±0.21） h;口服后氟苯尼考、甲砜霉素、氯霉素的生物利用度分別為82%、69%、45%[21]。段新華等在麻鴨體內(nèi)靜脈注射氟苯尼考，結(jié)果顯示表觀分布容積為（8 388.45±850.43） mL/kg，消除半衰期為（6.61±0.83） h;肌內(nèi)注射氟苯尼考峰濃度為（1.42±0.16） μg/mL，達(dá)峰時(shí)間為（1.60±0.19） h，絕對(duì)生物利用度為7159%;氟苯尼考在麻鴨體內(nèi)具有良好的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征，分布迅速、廣泛、消除較緩慢，肌內(nèi)注射吸收迅速且吸收較完全;結(jié)合氟苯尼考對(duì)鴨疫里氏桿菌、沙門菌及大腸桿菌的MIC數(shù)據(jù)，計(jì)算得出對(duì)于上述3種細(xì)菌感染的治療，氟苯尼考推薦劑量應(yīng)該超過20 mg/kg[22]。

關(guān)于特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的研究，李云芝等發(fā)現(xiàn)，氟苯尼考在家蠶體內(nèi)不同時(shí)間的血藥濃度受環(huán)境溫度影響，高溫環(huán)境下蠶體對(duì)藥物的吸收快，但消除也快，因此在夏秋蠶季高溫環(huán)境下使用氟苯尼考防治家蠶細(xì)菌病，需要適當(dāng)增加添食藥物的濃度，該研究為不同養(yǎng)蠶季節(jié)的蠶病防治合理用藥提供了科學(xué)依據(jù)[23]。

氟苯尼考在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及其對(duì)水生病原菌的作用已得到研究。大多數(shù)水生病原體是革蘭氏陰性菌，這些微生物通常容易受到幾種細(xì)菌的影響。氟苯尼考之所以被批準(zhǔn)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，是因?yàn)樗哂泻芎玫倪m口性和耐受性，并且在淡水和鹽水環(huán)境中用于治療由易感細(xì)菌引起的魚的疾病都是有效的。氟苯尼考具有較高的血漿和組織濃度，并在魚體內(nèi)被緩慢消除。Park等通過給韓國鯰魚靜脈注射和口服施用20 mg/kg氟苯尼考，研究氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，靜脈注射（推注）氟苯尼考后，終末半衰期、穩(wěn)態(tài)分布容積、總體間隙分別為（11.12±1.06） h、（1.09±0.09） L/kg、（0.07±001） L/（h·kg）;口服氟苯尼考后，半衰期、峰濃度、達(dá)峰時(shí)間、口服生物利用度分別為（15.69±259） h、（9.59±0.36） mg/mL、8 h、92.61%±101%，所有魚類均檢測(cè)到氟苯尼考胺[24]。Gaunt等在平均水溫為25.4 ℃的淡水中，通過給斑點(diǎn)叉尾魚靜脈注射或口服給予單劑量10 mg/kg氟苯尼考后，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）檢測(cè)分析研究氟苯尼考在血漿中的分布和體內(nèi)濃度發(fā)現(xiàn)，靜脈注射氟苯尼考后，終末半衰期、穩(wěn)態(tài)分布容積、中心分布容積分別為8.25 h、0.9 L/kg、0381 L/kg;口服氟苯尼考后，末端半衰期、峰濃度、達(dá)峰時(shí)間、口服生物利用度分別為9.11 h、7.6 μg/mL、9.2 h、1.09%，口服給藥時(shí)滯后吸收時(shí)間為1.67 h[25]。黃郁蔥等以10 mg/kg單劑量腹注和口灌健康紅笛鯛，腹注給藥后，血漿、肝臟、腎臟和肌肉的峰濃度分別為10.62 μg/mL、8.36 μg/g、22.57 μg/g、476 μg/g，達(dá)峰時(shí)間分別為1.2、1.0、10、6.0 h，消除半衰期分別為29.76、17.84、17.23、19.48 h，口灌給藥后血漿、肝臟、腎臟和肌肉的峰濃度分別為2355 μg/mL、145 μg/g、4.06 μg/g、1.73 μg/g，達(dá)峰時(shí)間分別為2.69、1.50、1.50、4.00 h[26]。黃聚杰等以20 mg/kg氟苯尼考混飼口灌花鱸，給藥后血漿的藥時(shí)曲線下面積為257.591 mg/（L·h），表觀分布容積為 1.401 L/kg，平均滯留時(shí)間和消除半衰期分別為18505、12.508 h，達(dá)峰濃度和達(dá)峰時(shí)間分別為 18.356 μg/mL 和3 h[27]。藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)在不同種屬間的數(shù)據(jù)高度可變。

爬行動(dòng)物體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)研究很少。朱麗敏等以30 mg/kg劑量分別單次肌注或灌服中華鱉，高效液相色譜法測(cè)定中華鱉血漿和肌肉藥物殘留濃度，肌注給藥的藥時(shí)曲線下面積為 76.45 μg/（mL·h），吸收半衰期為1.31 h，半衰期為4.48 h，最高血藥濃度為7.09 μg/L;口服給藥的藥時(shí)曲線下面積為109.42 μg/（mL·h），吸收半衰期為1.73 h，半衰期為3.63 h，最高血藥濃度為 10.64 μg/L;試驗(yàn)結(jié)果表明，氟苯尼考在口服情況下在中華鱉體內(nèi)吸收快，血藥濃度高，維持時(shí)間長，生物利用度高，藥物在肌肉中消除緩慢[28]。

同時(shí)需要注意的是，水生病原菌對(duì)氯霉素、硫代氨基酚和氟苯尼考具有一定的交叉耐藥性，而氟苯尼考的抗菌效果最高，并且耐藥菌數(shù)量最少。水生病原體對(duì)氟苯尼考的耐藥性不像氯霉素那樣容易發(fā)生。

4 檢測(cè)方法

4.1 高效液相色譜（HPLC）法

高效液相色譜法是分析氟苯尼考常用的方法，具有分離效率高、選擇性好、重現(xiàn)性好、較寬的線性范圍、操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)，主要用于氟苯尼考的含量測(cè)定和殘留量檢測(cè)。Kowalski等用HPLC法測(cè)定血漿中的氟苯尼考含量，色譜柱為LiChrospher-100 Column C18，流動(dòng)相為乙腈-水（體積比25 ∶ 75），所用磷酸調(diào)pH值為2.7，波長為 224 nm，檢測(cè)限為0.03 μg/mL[29]。Hayes建立了HPLC法測(cè)定魚飼料中氟苯尼考含量的檢測(cè)方法，該方法的平均回收率為100.5%，檢測(cè)限為 0.2 mg/kg，定量限為1.0 mg/kg[30]。戴華等采用反相液相色譜測(cè)定飼料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量，用梯度洗脫、雙波長對(duì)3種組分同時(shí)進(jìn)行分離測(cè)定，檢測(cè)限為0.020 mg/kg，回收率大于70%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于17.2%[31]。魏海濤等采用HPLC法測(cè)定氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的溶解度和溶出度，結(jié)果顯示氟苯尼考的HPLC保留時(shí)間為 4.6 min，峰形好，樣品質(zhì)量濃度為10～200 μg/mL，與峰面積呈良好的線性關(guān)系[32]。檢測(cè)氟苯尼考常用的色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相主要是甲醇或乙腈與磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液或水，常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長為223、224、225、254 nm;二極管陣列檢測(cè)器，波長為225 nm;熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長為224 nm或225 nm，發(fā)射波長為280 nm或295 nm，其中紫外檢測(cè)器最為常用。

4.2 液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）法

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是選用LC與MS結(jié)合，通過探討樣品中各組分的質(zhì)譜特征和裂解規(guī)律，從而確定各個(gè)組分，并進(jìn)行定性和定量分析。陳國等建立了測(cè)定雞蛋中氟苯尼考及氟苯尼考代謝物氟苯尼考胺殘留量的LC-MS/MS快速分析方法，使用1.0%乙酸乙腈提取，后用PSA和C18凈化，采用XBridge C18色譜柱，以0.02%甲酸溶液和甲醇乙腈混合溶劑為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，正負(fù)離子切換監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行監(jiān)測(cè)，同位素內(nèi)標(biāo)法定量;當(dāng)氟苯尼考濃度為0.10～20.00 μg/L，氟苯尼考胺濃度為0.5～100 μg/L時(shí)，兩者具有較好的線性關(guān)系，氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢出限（LOD）分別為006、0.30 μg/kg，定量限（LOQ）分別為0.20、100 μg/kg;加標(biāo)平均回收率為94.9%～102.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.2%～4.9%[33]。李瑩瑩等建立了測(cè)定魚肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法;采用堿性乙酸乙酯提取，正己烷脫脂，電噴霧離子源正負(fù)模式切換，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），內(nèi)標(biāo)法定量;檢出限分別為氟苯尼考 1 μg/kg，氟苯尼考胺5 μg/kg;加標(biāo)回收率在870%～110.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于62%[34]。殷平等建立了采用液相色譜-質(zhì)譜同位素稀釋法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素3種殘留藥物的方法。采用堿化乙酸乙酯提取，同位素內(nèi)標(biāo)法定量;氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素3種藥物的定量限分別為0.05、0.50、0.70 ng/mL，并且在魚肉中的回收率分別為 92.2%～125.5%、78.6%～102.7%、79.4%～1210%，在蝦肉中的回收率分別為98.5%～1284%、735%～109.6%、87.7%～122.8%[35]。LC-MS 法大多采用電噴霧電離負(fù)離子源，通過MRN方式進(jìn)行采集。LC-MS法常用的流動(dòng)相為甲醇或乙腈的水溶液，流動(dòng)相中加入少量的乙酸或乙酸銨等可以提高分析物的離子化效率，對(duì)峰型也有一定的改善作用。LC-MS法對(duì)不同基質(zhì)的樣品有時(shí)會(huì)出現(xiàn)基質(zhì)抑制效應(yīng)，因此，檢測(cè)時(shí)可以使用間位氯霉素或氯霉素-D作內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)法定量或者采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，以提高方法的準(zhǔn)確度和精密度。

4.3 氣相色譜（GC）法

由于氟苯尼考含有亞氨基、硫?；葮O性較強(qiáng)的基團(tuán)，且不易揮發(fā)，因此在氣相色譜法分析前，必須先對(duì)這些基團(tuán)進(jìn)行硅烷化或者?；?，生成熱穩(wěn)定和易揮發(fā)的衍生物。孫豐云等建立了一種同時(shí)檢測(cè)蝦肌肉中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留的氣相色譜-微電子捕獲分析方法;樣品經(jīng)乙酸乙酯-氨水混合提取，正已烷脫脂，MCX固相萃取柱凈化，氨水-甲醇（體積比為10 ∶ 90）洗脫，衍生化后采用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量;在蝦肌肉組織中，氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺平均加樣回收率范圍分別為84.8%～88.8%、79.4%～92.1%、86.3%～1196%、89.0%～93.3%;蝦肌肉中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺的檢測(cè)限分別為0.08、030、020、0.40 μg/kg[36]。氣相色譜法需要對(duì)氟苯尼考進(jìn)行衍生化，且衍生化反應(yīng)過程中要避免水分，因?yàn)樗拇嬖跁?huì)導(dǎo)致衍生化效率降低和產(chǎn)物不穩(wěn)定。

4.4 氣相色譜-質(zhì)譜（GC/MS）法

邵會(huì)等采用氣相色譜質(zhì)譜法建立基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)我國對(duì)蝦、大菱鲆、鯽魚、鰻魚、蟹、甲魚6種主要養(yǎng)殖水產(chǎn)品肌肉組織中注射氯霉素類藥物：對(duì)氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的多殘留同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)[37]。結(jié)果顯示，氯霉素濃度為 2～200 ng/mL 時(shí)，線性關(guān)系良好;甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺濃度為5～200 ng/mL時(shí)，線性關(guān)系良好，其R2均大于0.990，加標(biāo)回收率為76.4%～94.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～13.9%;氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的檢出限分別為0.2、1.0、1.0、1.0 μg/kg[37]。薛慧婷建立了淡水養(yǎng)殖用水中氟苯尼考?xì)埩袅康?GC-MS/MS 分析方法，樣品采用乙酸乙酯提取，濃縮后經(jīng)甲醇溶解后，經(jīng)氮?dú)獯蹈珊蠹尤隢，O-雙（三甲基甲硅烷基）-三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化試劑于70 ℃反應(yīng)30 min，氮?dú)獯蹈珊笳和槎ㄈ荽郎y(cè);采用GC-MS/MS分析時(shí)，水樣加標(biāo)回收率均在85%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.0%以內(nèi)，在0.05～100 mg/L濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，R2大于0.999，檢出限為 1.00 μg/kg[38]。GC/MS可以用于氟苯尼考?xì)埩舻拇_證檢測(cè)，靈敏度高。但是在進(jìn)行GC-MS法分析時(shí)需氟苯尼考進(jìn)行衍生化，因而限制了它的應(yīng)用。

4.5 其他檢測(cè)方法

膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC）法是在緩沖液中加入十二烷基硫酸鈉、三羥甲基胺基甲烷、十六烷基三甲基溴化銨等表面活性劑，形成帶電荷的膠束，將色譜技術(shù)和電泳技術(shù)相結(jié)合，從而彌補(bǔ)了毛細(xì)管區(qū)帶電泳無法分離中性粒子的缺陷，克服了HPLC法難以同時(shí)測(cè)定藥物中極性與非極性成分的不足，可以在較短的時(shí)間內(nèi)同時(shí)對(duì)復(fù)雜組分中共存的陽離子、陰離子及中性粒子進(jìn)行分離測(cè)定。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）以免疫抗體為基礎(chǔ)的免疫檢測(cè)技術(shù)。孫法良等制備了氟苯尼考的高親和力特異性抗體，建立檢測(cè)氟苯尼考的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA新方法[39]。氟苯尼考分別與牛血清白蛋白和人血清白蛋白經(jīng)混合酸酐法偶聯(lián)，得到免疫抗原和包被抗原，建立并優(yōu)化了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法;其R2=0.985 9，檢測(cè)范圍為0.18～500.00 μg/kg，檢出限為0.18 μg/kg，低于國家標(biāo)準(zhǔn)中LC-MS測(cè)定肌肉中氟苯尼考的最低檢測(cè)限度（LOD=1.0 μg/kg）。交叉反應(yīng)試驗(yàn)中，抗血清與氟苯尼考結(jié)構(gòu)相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反應(yīng)率分別為0.094%和0.098%，與其他藥物交叉反應(yīng)率均小于0.01%，表明該方法具有很強(qiáng)的特異性。氟苯尼考是一種半抗原，本身并不具備免疫原性，必須將其與載體蛋白偶聯(lián)生成人工抗原才具有免疫原性。氟苯尼考分子結(jié)構(gòu)上既無羧基也無氨基，不能直接與蛋白相聯(lián)，必須先進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造。ELISA法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、樣品處理簡(jiǎn)單、速度快、成本較低且儀器設(shè)備簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，適用于批量樣本快速檢測(cè)。

5 結(jié)論

氟苯尼考雖然早在1988年就被研制成功，但是目前在我國，獸藥典收錄的主要還是氟苯尼考預(yù)混劑、注射劑等老劑型，關(guān)于水產(chǎn)養(yǎng)殖和特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的藥品未有收錄。并且由于細(xì)菌耐藥性問題日益突出，國家也越來越重視獸藥的濫用問題。因此，開發(fā)適合我國國情的氟苯尼考新產(chǎn)品，建立方便、快捷、靈敏的氟苯尼考?xì)埩魴z測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于氟苯尼考在我國的合理使用尤為重要。

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