李知翰 崔永輝 張西亮

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，主要由于飲食結(jié)構(gòu)改變及幽門螺桿菌感染等原因引起，死亡率較高[1-2]。晚期胃癌患者以貧血和營養(yǎng)不良為主要表現(xiàn)，臨床上化療常被用來治療晚期胃癌。匡菁等[3]研究證明，阿帕替尼可抑制腫瘤組織的生成，使晚期胃癌患者的生命延長。因此本研究旨在探究血清結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1(MACC1蛋白)在晚期胃癌患者中的表達(dá)情況及對(duì)阿帕替尼化療療效的預(yù)測價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果作出如下報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2017年12月我院收治的60例晚期胃癌患者，按治療方法的不同將其分為對(duì)照組(n=36)和觀察組(n=24)，其中男性37例，女性23例；年齡32～65歲，平均(44.32±7.13)歲，腺癌有28例，其他類型有32例；低分化癌22例，中高分化癌38例。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)影像學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查證實(shí)為胃癌的患者，且腫瘤臨床分期為Ⅳ期；既往化療失敗或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者；生存期大于3個(gè)月者；美國東部腫瘤協(xié)作組(ECOG)[4]評(píng)分為0～2分者；簽署知情同意書者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：靶病灶處接受過放療者；按照NYHA標(biāo)準(zhǔn)[5]，Ⅲ～Ⅳ級(jí)心功能不全者；大手術(shù)后30天內(nèi)者；伴有重度肝腎功能不全、腸穿孔、活動(dòng)性出血等癥狀者等。分別取患者的胃癌組織及對(duì)應(yīng)的正常胃黏膜組織進(jìn)行MACC1蛋白檢測。2組基線資料差異不顯著(P>0.05)，可比較分析。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并通過本研究。

1.2 治療方法

對(duì)照組患者口服替吉奧片80 mg/m2，每日1次，連續(xù)服用2周；每個(gè)化療周期第1天靜脈點(diǎn)滴奧沙利鉑甘露醇注射液100 ml，21 d為1個(gè)化療周期；觀察組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，口服甲磺酸阿帕替尼片(艾坦)，850 mg/d，每日1次。2組均在化療3個(gè)周期后評(píng)估療效。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)統(tǒng)計(jì)MACC1蛋白在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)情況。Western印跡檢測MACC1的表達(dá)水平：分別將胃癌組織及相應(yīng)正常胃黏膜組織剪碎成塊，用冷磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗，加入裂解液，勻漿器勻漿后，置于冰上裂解30 min。取5 μl蛋白樣品，按BCA蛋白定量檢測試劑盒說明書檢測蛋白樣品的濃度。剩余蛋白樣品與5倍上樣緩沖液按4∶1比例混合，煮沸5 min。在聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品孔中加入40 μl變性蛋白質(zhì)樣品，在80 V電壓下觀察到溴酚藍(lán)，將電壓調(diào)整到120 V，直到溴酚藍(lán)進(jìn)入底端。取出蛋白凝膠，在4 ℃，90 V電壓下將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉在37 ℃環(huán)境下封閉1.5 h后，在4 ℃下加入1∶800一抗反應(yīng)過夜，然后再加入1∶2000二抗中在37 ℃下反應(yīng)1.5 h，加顯色液，以GAPDH為內(nèi)參照，分析目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。(2)統(tǒng)計(jì)2組患者化療前和化療3個(gè)周期后MACC1蛋白含量的變化情況。(3)統(tǒng)計(jì)2組患者化療3個(gè)周期后的預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 在正常胃黏膜組織和胃癌組織中MACC1蛋白的表達(dá)情況比較

MACC1蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為63.33%(38/60)，顯著高于正常胃黏膜組織中的表達(dá)率6.67%(4/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=42.344，P<0.01)。

2.2 晚期胃癌患者化療前后MACC1蛋白含量比較

化療3個(gè)周期后，2組患者的MACC1蛋白含量均降低，且觀察組較對(duì)照組降低的更顯著(P<0.01)。見表1。

表1 晚期胃癌患者化療前后MACC1蛋白含量比較

2.3 2組患者化療3個(gè)周期后預(yù)后情況比較

化療3個(gè)周期后，與對(duì)照組相比，觀察組的無進(jìn)展生存時(shí)間和總生存時(shí)間均較長(P<0.01)。見表2。

表2 2組患者化療3個(gè)周期后預(yù)后情況比較月)

3 討論

晚期胃癌患者常存在貧血、消瘦、營養(yǎng)不良等現(xiàn)象，多選擇化療延長生命，同時(shí)會(huì)選擇靶向治療以減輕對(duì)正常細(xì)胞的損害[6-7]。由于缺乏準(zhǔn)確的治療策略，且組織學(xué)等分子生物學(xué)差異使胃癌患者對(duì)化療的敏感性有較大差異，晚期患者化療后的5年生存率不超過5%[8-9]，因此，尋找低損傷、能預(yù)測化療療效的生物標(biāo)志物已迫在眉睫。

MACC1基因編碼的蛋白質(zhì)包含852個(gè)氨基酸，可通過調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮作用，激活信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤血管生成、誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[10-11]；MACC1可調(diào)控β-鏈蛋白等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用[12-14]。在本研究中，胃癌組織中的MACC1蛋白陽性表達(dá)率高于正常胃黏膜組織中的表達(dá)率，說明MACC1蛋白能有助于胃癌的診斷，MACC1的異常激活導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及異常增生，也可以通過上調(diào)β-鏈蛋白的表達(dá)發(fā)揮作用，從而抑制MACC1表達(dá)，使癌細(xì)胞凋亡，抑制癌細(xì)胞增殖[15-16]。Nishikawa等[17]報(bào)道在胃癌中MACC1的表達(dá)水平高于正常的組織，發(fā)揮促腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，控細(xì)胞周期的作用。

阿帕替尼是受體酪氨酸激酶抑制劑，是目前世界上第一種小分子抗血管生成靶向藥物[18]，其用于晚期胃癌標(biāo)準(zhǔn)化療失敗后被證明是安全有效的，可有效抑制腫瘤組織新血管的生成，是晚期胃癌患者三線及三線以上的臨床治療藥物[19-20]。本研究中，患者在口服阿帕替尼3個(gè)療程之后，疾病對(duì)照組MACC1蛋白含量顯著大于疾病觀察組，化療后，疾病對(duì)照組MACC1蛋白含量下降不明顯。說明阿帕替尼化療效果良好，MACC1越低化療效果越好，并且在臨床應(yīng)用中，阿帕替尼不良反應(yīng)少[21]。本研究中疾病觀察組的無進(jìn)展生存時(shí)間和總生存時(shí)間均顯著大于疾病對(duì)照組，說明阿帕替尼可延長晚期胃癌患者的生存時(shí)間。這與周自華等[22]的研究一致。

綜上，MACC1有助于胃癌的診斷，且MACC1越低阿帕替尼的化療效果越好。